【最新word论文】冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定【药学专业论文】.doc

1冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定作者：屈红丽 可钰 尹鹏 刘宏民【关键词】 冬凌草；,,总黄酮；,,正交实验摘要：目的研究冬凌草中总黄酮的提取工艺并测定总黄酮的含量方法采用正交实验进行提取工艺的优选紫外分光光度法测定总黄酮的含量结果采用最佳提取工艺测定了不同部位不同产地的冬凌草中总黄酮含量，花中总黄酮含量最高，不同产地含量差别比较大结论该方法简单、可靠、稳定、重现性好关键词：冬凌草； 总黄酮； 正交实验Extracting Technology and Determination of the Total Flavonoid of Rabdosia rubescens (Hemsl.)HaraKey words：Rabdosia rubescens(Hemsl.) Hara; Total flavonoid; Orthogonal experiment 冬凌草 Rabdosia rubescens (Hemsl.)Hara，又名冰凌草，为唇形科香茶菜属多年生草本植物，以地上部分入药广泛分布于黄河流域及其以南广大地区，主产于河南太行山区味甘苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤之功效［1］ 。

孙汉董课题组［2］从 20 世纪 70 年代开始研究冬凌草，从中分出了二萜、三萜及少量黄酮Han J［3］等用 LCESIMSMS 方法对冬凌草中的五个二萜类及五个黄酮类化合物同时进行了含量测定我们课题组在研究冬凌草化学成分的同时，发现其中黄酮类化合物含量较高紫外分光光度法可用于黄酮［4~5］等含量测定本文对济源产冬凌草中的黄酮类化合物进行了提取工艺研究,并对不同部位不同产地的冬凌草中的总黄酮进行了含量测定1 仪器与材料1.1 仪器 Jasco V550 紫外/可见分光光度计；KQ5200DB 型数控超声波洗涤器1.2 材料冬凌草，采自济源市王屋山，经河南中医学院药学院陈随请教授鉴定为 Rabdosia rubescens(Hemsl.) Hara 的地上部分芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所所用试剂均为分析纯2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备 精密称取在 120 ℃下减压干燥至恒重的芦丁对照品 60.9 mg 于 100 ml 容量对照品溶液的制备瓶中，加适量 90%乙醇温热溶解，放冷，用 90 %乙醇稀释至刻度，摇匀精密吸取上述溶液 12.50 ml 置于 50 ml 容量瓶2中，90 %乙醇稀释至刻度，摇匀。

2.2 测定波长的确定 取对照品溶液，按 2.3 项下方法操作［6］ ，在300～700 nm 范围内测定吸收度值，结果表明芦丁在 504 nm 处有最大吸收2.3 标准曲线的绘制精密量取上述对照品溶液0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 ml 置于 10 ml 容量瓶中，分别加 90%乙醇至 5 ml，加 5%亚硝酸钠溶液 0.4 ml，混匀，放置 6 min，加 10%硝酸铝溶液 0.4 ml，混匀，放置 6 min，加 4% NaOH 溶液 4 ml，再加 90%乙醇至刻度，摇匀，放置 15 min以第 1 管为空白，在 504 nm 波长处测定吸收度 A，以测定吸收度（A）对溶液浓度（C）进行回归，得线性方程 y=0.001 3x+0.011 7，相关系数r=0.999 2可见，在测定浓度范围 0.152~0.533 mg/ml 内线性关系良好2.4 精密度考察 精密量取同一供试品溶液 1 ml，按“2.6.2”项下方法操作重复进行 7 次结果见表 1RSD 为 0.082%，表明本方法精密度良好表 1 精密度实验结果（略）2.5 稳定性考察 取同一供试品溶液，依法显色，自加完显色剂开始，每隔10 min 测定吸收度 1 次，RSD 为 0.69%，表明供试品溶液在 80 min 内测定基本稳定。

2.6 供试品溶液的制备表 2 稳定性考察结果（略）2.6.1 提取条件的正交实验 将干燥冬凌草叶粉碎，分别精密称取 2 g 粗粉9 份，选择乙醇浓度、乙醇用量、超声时间、温度等 4 个因素，每个因素选择 3 个水平，编制因素水平表按 L9(34)正交设计方案［7］ ，乙醇浸泡 12 h 后超声提取,提取前后称重补重，提取液置于 5 ml 容量瓶中，放置待测表 3 冬凌草乙醇提取工艺因素水平（略）2.6.2 供试品的含量测定精密吸取各供试品溶液 1 ml，置于 10 ml 容量瓶中，加 5%亚硝酸钠溶液 0.4 ml，混匀，放置 6 min，加 10%硝酸铝溶液 0.4 ml，混匀，放置 6 min，加 4% NaOH 溶液 4 ml，再加 90%乙醇至刻度，摇匀，放置 15 min另取各供试品溶液 1 ml，置于 10 ml 容量瓶中，不加显色剂，加90%乙醇至刻度做空白，于 504 nm 处测吸收度，通过标准曲线计算总黄酮含量2.6.3 正交实验及结果 以冬凌草总黄酮含量为指标进行分析结果见表 4，由表 4 可以看出最佳提取工艺为 A3B2C3D1，即 15 倍 50%乙醇浸泡 12 h，40℃超声 0.5 h，超声功率为 100%。

由表 5 表示，乙醇浓度影响显著，超声提取时间几乎没有影响表 4 冬凌草提取工艺正交实验结果（略）3表 5 含量方差分析（略）2.7 重现性实验 取同一批样品，按供试品溶液的制备方法测定其含量，重复进行 5 次，结果表明该方法重现性良好见表 62.8 回收率实验取已知含量的 9 份供试品溶液各 1 ml，分 3 组，分别精密加入 181.7 μg/ml 的芦丁对照品溶液 0.5， 1，2 ml，按“2.6.2”项下方法显色，于 504 nm 处测吸收度结果表明：回收率高，方法可行结果见表 7表 6 重现性实验结果（略）表 7 回收率实验结果（略）2.9 不同地方不同部位总黄酮含量测定精密称取冬凌草花、叶、茎以及济源市五个乡的冬凌草干叶样各 2 g，用 15 倍 50%乙醇浸泡 12 h，40℃超声 0.5 h，按“2.6.2”项下操作方法进行总黄酮的含量测定结果见表 8 表 8 样品含量测定结果（略）3 讨论3.1 在对照品显色方法中，参考文献［6］的方法是，在加显色剂前，水稀释至相同体积，本实验采用的方法是改用 90%乙醇稀释至相同体积，显色后检测这样改进就保持了被检测溶液的乙醇浓度的一致性，降低了系统误差。

3.2 由表 8 看出，济源产冬凌草的叶和花中总黄酮含量明显高于茎中的含量，花中含量最高，为 8.088%，茎中最低，仅为 2.853%，茎的纤维含量高，质地相对致密，提取效果不佳，可能是茎中的黄酮含量明显低于花和叶的原因之一3.3 考虑到提取效率，采用室温冷浸 12 h 后再超声提取的方法3.4 不同产地的冬凌草中，总黄酮含量差别较大，含量最高的达到 11.575%，最低的为 4.837%,相差近 1.5 倍3.5 在实验过程中发现，显色过程即每一次加入试剂后是否摇匀是关键参考文献：［1］ 张维江，于 红．抗病毒药物的临床应用及其副作用［J］.中国综合临床，2001，17（10）：733．［2］ 孙汉董，许云龙，姜北．香茶菜属植物二萜化合物［M］.北京：科学出版社，2001：122.4［3］ Han J,Ye M,Chen HB,etc.Determination of diterpenoids and flavonoids in Isodon rubescens by LCESIMS~MS［J］.Chromatographia.2005，62(3~4):203.［4］ 包贝华,张 丽,丁安伟.分光光度法测定荆芥炭中总黄酮的含量［J］.时珍国医国药．2004，15（5）：264.［5］ 黄林芳,万德光.川产苦丁茶中总黄酮的含量测定．时珍国医国药［J］.2004，15（6）：327.［6］ 蒋俊毅，曹 凯，吴德康，等．紫外分光光度法测定杏香兔耳风制剂中总黄酮含量［J］.时珍国医国药，2005，16（3）：178．［7］ 张春华，严云良．医药数理统计［M］.北京：科学出版社，2001：183．。