不同商品规格羌活药材的化学成分差异及谱效关系研究.docx

不同商品规格羌活药材的化学成分差异及谱效关系研究目的 : 羌活的商品等级仅在国家医药管理局及卫生部 1984 年颁布的 《七十六种药材商品规格标准》 上有规定 , 一方面使用了 30 多年的标准未更新, 已不能适应市场变化 , 另一方面仅靠外在形态划分羌活商品等级缺乏科学依据本课题在国家中药标准化项目《大黄等6 种中药饮片标准化建设》的支持下, 采用谱效关系研究的思路, 以不同商品规格羌活药材为研究对象, 开展化学成分、 药效活性及基于“谱效关系”的药效物质辨识研究, 为科学划分羌活商品等级、全面控制药材质量以及确定其抗炎活性的物质基础提供依据方法 :1. 通过市场调查和文献研究, 了解羌活药材商品状况,按照基原结合药材形态将羌活划分为蚕羌、条羌和大头羌,采用HPLCt测定三种商品规格共30批羌活中五种有效成分（ 绿原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇和异欧前胡素 ）的含量 , 采用水蒸气蒸馏法测定挥发油的含量 ; 通过 SPSS19.0 统计软件对五种成分和挥发油的含量进行显著性差异分析、聚类分析和主成分分析 2. 采用 HPLC法建立三种商品规格羌活的指纹图谱, 采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”（2004版A）进行共有峰确认及相似度评价；通过SPSS 19.0统计软件采用主成分分析对指纹图谱进行模式识别。

3. 采用 UPLC-LTQ/Orbitrap MS 技术分析鉴定三种商品规格羌活中的化学成分4.采用GC-M散术分析鉴定三种商品规格羌活中的挥发性成分，并利用NIST 2014 质谱库进行检索和分析5. 采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型比较三种商品规格羌活体内抗炎活性的差异性 , 并在指纹图谱研究的基础上, 采用灰色关联度法对各样品的指纹图谱特征峰峰面积与抗炎活性的关联性进行分析, 即谱效关系研究 , 通过比较各指纹图谱6. 以 LPS特征峰与抗炎作用关联度的大小 , 确定羌活抗炎作用的药效物质基础诱导的小鼠单核巨噬细胞 RAW264.7为炎症模型,通过CCK8a、Griess试剂法、ELISA法检测三种商品规格羌活醇提物处理后细胞活力的变化和炎症相关因子的分泌表达情况, 探究三种商品规格羌活体外抗炎作用差异结果 :1. 三种商品规格羌活中绿原酸、紫花前胡苷、阿魏酸、羌活醇、异欧前胡素五种成分和挥发油的含量差异很大, 大头羌的羌活醇和异欧前胡素含量之和以及挥发油的含量普遍达不到药典规定; 聚类分析和主成分分析结果同商品规格的划分完全一致, 表明所建立的含量测定结合统计学分析方法适用于不同商品规格羌活药材的鉴别。

2. 分别建立了蚕羌、 条羌和大头羌三种商品规格羌活药材HPLC旨纹图谱，从蚕羌中标定了 22个共有峰，条羌中标定了 23个共有峰，大头羌中标定了 29 个共有峰由相似度评价结果可知 , 三种商品规格羌活药材相似度极低, 化学成分组成和含量差异十分显著 ; 相同商品规格羌活的相似度较高 , 化学成分组成较为一致,只有小部分批次间存在含量差异主成分分析结果显示30 批羌活药材被分为三组, 与商品规格一致, 筛选出了 10 个特征成分, 找出了决定因素 ; 综合得分结果提示从化学成分角度来看, 条羌质量最好, 大头羌次之, 蚕羌最差3. 采用 UPLC-LTQ/Orbitrap MS 技术 , 通过精确分子量和多级质谱碎片离子,结合对照品质谱信息和文献报道从三种商品规格羌活提取物中共鉴定出 34 种化学成分 , 包括 24 个香豆素类化合物、 7 个酚酸类化合物、 2 个黄酮类化合物和 1个聚烯炔类化合物 ; 确定了三种商品规格羌活中 6 种差异性成分, 分别是前胡苷V、反式对轻基肉桂酸、 6’ -0- 反式阿魏酰基紫花前胡苷、 5’ - 羟基葡萄内酯、香叶木素和苯乙基阿魏酸酯 4. 三种商品规格羌活挥发油中共鉴定出 80 个化合物 ,其中蚕羌中鉴定出 63 个化合物 , 条羌中鉴定出 45 个化合物 , 大头羌中鉴定出 44个化合物 , 三种商品规格羌活中共有的挥发性成分有26 种。

所鉴定出的化合物主要为萜类化合物 , 其次是醇、醛、酯等化合物三种商品规格羌活挥发油成分种类和含量存在较大差异，但乙酸龙脑酯、愈创木醇、a- 源烯和石芹学烯的含量都较高5. 二甲苯致小鼠耳肿胀实验结果表明体内抗炎效果最显著的是蚕羌 , 其次是大头羌 , 条羌无显著差异, 这一结论与市场上蚕羌药效最好、 价格最高的现状相符谱效关系研究结果表明羌活是通过其内部的有效成分共同作用达到抗炎作用的 ,虽然 40 个特征峰代表的化学成分与抗炎作用药效间关联度大小不同 , 但都有关联性 , 其中有 17个特征峰与抗炎作用关联性较大,17 个关联性较大的特征峰中有3 个峰为已知成分, 分别为绿原酸、阿魏酸和异欧前胡素6.三种商品规格羌活醇提物可以通过抑制巨噬细胞NO TNF-a ［和IL-6的释放来发挥其抗炎作用 , 且三种商品规格羌活的体外抗炎作用总体呈现蚕羌 >大头羌 > 条羌结论: 本研究从化学成分和药效两方面入手探究三种商品规格羌活药材的差异性, 并采用指纹图谱与药效活性相结合的手段, 通过统计学方法,建立谱效关系 , 明确关键药效组分, 为科学划分羌活商品等级、 全面控制药材质量以及确定其抗炎活性的物质基础提供依据。