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维生素C不同的测定方法及各种方法优缺点比较目前研究维生素C测定方法的有很多，如荧光法、2, 6-二氯靛酚滴定法、2, 4- 二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等，各种方法 对实际样品的测定均有满意的效果目前国内维生素C含量测定仍以光度法为主流，但近年来色谱法，特别是HPLC 法上升趋势尤为明显一、荧光法1. 原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺(OPDA)反应生成具有荧光的喹喔啉(quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血 酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总 量脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂 质所产生的干扰本方法的最小检出限为0.022 g/ml2•适用范围本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定二、2，6-二氯靛酚滴定法(还原型VC, GB/T6195—1986)1、 原理：还原型抗坏血酸还原染料2, 6-二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红 色消失还原型抗坏血酸还原2，6-二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2，6-二氯靛酚的量与样品中 所含维生素C的量成正比。

本法用于测定还原型抗坏血酸，总抗坏血酸的量常用2, 4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定2、 优点简便、快速、比较准确等，适用于许多不同类型样品的分析3、 缺点2, 6—二氯靛酚法虽然简便，但是药品价格昂贵而且不能直接测定样品中的脱 氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰如果样品中含有 色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难三、分光光度法1、原理：维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸，pH>5,脱氢抗 坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2,4—二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎，脎在500nm波长有最大吸收根据样品溶液吸光度，由工作曲线查出VC的浓度，即可求出VC的含量四、2, 4-二硝基苯肼法1、 原理总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸样品中还原型抗坏血酸经活性 炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总 抗坏血酸含量成正比，进行比色测定2、 适用范围本方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定3、 缺点：易受色素影响，当待测液本身有颜色时，吸光值会受到影响，从而影响到测定结 果的准确性。

且该法操作麻烦，试剂较多，耗时较长五、磷钼蓝分光光度法测定维生素C1、 测定原理染料2,6-二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态, 氧化态为深蓝色，还原态变为无色;二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深 蓝色，在酸性介质中呈浅红色用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴 定，染料被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅 红色，由染料用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量2、 优点该方法简单、快速、准确，且回收率特别高六、紫外快速测定法原理：维生素C的2, 6—二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物 质、样品色素颜色和测定时间的影响紫外快速测定法，是根据维生素C具有对 紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者 消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量七、高效液相色谱法测定维生素C (HPLC法)1、原理：高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液 相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

它与 经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻 力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chroma to graphy，HPLC)又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography， HSLP)色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由 于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和) 的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出又称 为色层法、层析法高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相 与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法2、优点：高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法，具有灵敏度高、选择性好、测定迅 速、分析时间短、样品处理简单和测定结果重复性好等优点是测定维生素C较 好的方法八、碘量法1、维生素C的原理维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种当用碘滴定维生素C时，所 滴定的碘被维生素C还原为碘离子。

随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入 的碘将以碘分子形式出现碘分子可以使含指示剂(淀粉)的溶液产生蓝色，即 为滴定终点九、电位滴定法1. 原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点.Pt为指示电极，甘汞作参比电极E池= E+-E-+E液接电位= EI2/I-+k(常数)随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化；从而指 示电极电位发生相应变化；导致电池电动势发生相应变化；计量点附近离子浓度 发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点 计算式：(与碘量法相同)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100% 2、优点：解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题用线性电位滴定法分析抗坏血酸，抗坏血酸回收率为99.80%〜101.5%,相对标 准偏差为0.61%;分析维生素C片中的抗坏血酸，相当标示量为98.90%〜 100.5%,相对标准偏差不大于0.48%,说明线性电位滴定法分析维生素C片中的 抗坏血酸含量是可行的.十、二甲苯一二氯靛酚比色法1、 适用范围测定深色样品中还原型抗坏血酸2、 测定原理用定量的2,6 —二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应，多余的 染料在酸性环境中呈红色，用二甲苯萃取后比色,在一定范围内，吸光度与染料浓 度呈线性相关，收剩余染料浓度用差减法计算维生素C含量。

十一、荧光分析法原理：用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸，然后与邻苯二胺缩合成一种 荧光性化合物样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中加入硼 酸，使脱氢抗坏铁酸形成硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物，它不与邻二苯胺生成荧光 化合物这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正十二、库仑滴定法1、原理库仑滴定法属于恒电流库仑分析是在特定的电解液中，以电极反应产物为 滴定剂（电生滴定剂，相当于化学滴定中的标准浓液）与待测物质定量作用，借 助指示剂或电位法确定滴定终点基本依据 法拉第电解定律：电解时，电极上发身化学反应的物质质量与通过电解池的电量Q成正比即：m二MQ/zF = MI t /zF计算式：Wvc二MvcQ/zFm样式中：F-―法拉第常数（96487C） Z---电极反应中转移的电子数注意：使电解效率100%2、优点：1） 无需标准化的试剂溶液，免去了大量的标准物质的准备工作（配制，标定）；2） 只需要一个高质量的供电器，计时器，小铂丝电极，且易于实现自动化控制;3） 若电流维持一个定值，可大大缩短了电解时间；4） 电量容易控制及准确测量；方法灵敏度，准确度较高；5） 滴定剂来自电解时的电极产物，可实现容量分析中不易实现的滴定过程，如 Cu + ,Br2,Cl2产生后立即与待测物反应。

3、缺点要求电解过程没有副反应和漏电现象，即使电解电极上只进行生成滴定剂的反 应，且电流的效率是100%十三、L-抗坏血酸（维生素C）测定试剂盒（酶学方法）1. 适用范围：应用于食品、饮料及生物制品检测2. 比色方法此方法用于检测水果和蔬菜（如马铃薯），水果和蔬菜产品（如西红柿酱、泡 菜、果酱、果汁），婴儿食品，啤酒，饮料，流食，粉状和烘烤剂，肉产品，奶 制品，葡萄酒，还有动物饲料，医药品（如维生素配制、阵痛药、退烧药）和生 物样品中的L-抗坏血酸（维生素C），3. 原理L-抗坏血酸（x-H2） + MTT+ PMS—> dehydroascorbate （x） + MTT-formazan + H+XL-抗坏血酸 + % 02 AA0 > dehydroascorba te + H2OX十四、光电比浊法原理：在酸性介质中，抗坏铁酸与亚硒酸（H2Se03）能定量地进行氧化还原反应1mol 的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒在一定条件下，生成的元素硒在溶液中 形成稳定的悬浊液当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的范围内，该溶液生成的 浊度与抗坏铁酸的含量成正比将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定 抗坏铁酸。

十五、近红外漫反射光谱分析法（NIRDRSA）1、原理：自1965年首次应用于复杂农业样品分析后，因其具有样品处理简单、分析速度 快等优点，逐渐受到分析界的重视此法已广泛应用于石油、纺织、农业、食 品、药物分析等领域在药物分析中，NIRDRSA可以进行定性鉴别、定量分析等 工作近红外谱区光的频率与有机分子中C-H，0-H，N-H等振动的合频与各级倍频 的频率一致，因此通过有机物的近红外光谱可以取得分子中C-H，0-H，N-H的 特征振动信息由于近红外光谱的谱带较宽，谱图重叠严重，不能用特征峰等 简单方法分析，需要运用计算机技术与化学计量学方法本实验应用的是偏最 小二乘法（PLS）,首先利用定标集建立预测模型，然后将预测集作为未知样本， 根据预测模型进行预测对所选择的谱区范围，采用对反射吸光度的MSC（散射校正）预处理，对25个 样品进行交叉 验证，即选择一个样品，从校正集中除去该样品对应的光谱和浓 度数据，并设光谱主成分数 为1,循环迭代样品数和主成分数，计算预测残差 平方和，确定所需主成分数若主成分选择 过小，会丢失样品信息，过大会造成 过度拟合当主因子为2时，预测残差平方和值最小，为2.029，故选择主因子 数为2，建立最佳PLS校正数学模型。

2、优点：维生素C是一种不稳定的二烯醇化合物，其药典含量测定方法为碘量法我们采 用近红外漫反射光谱技术直接测定维生素C含量，样品无需预处理，方法简便， 结果可靠十六、原子吸收间接测定法1、 原理：这是最近报导的一种Vc测定法，其原理是在酸性介质中还原型Vc可将Cu2+定 量地还原为Cu+并与SCN—反应生成CuSCN沉淀，在高速离心机下有效地分离出 沉淀，小心洗涤后再经浓硝酸溶解，用原子吸收法测定铜含量，即可推知样品中 维生素C的含量2、 优点：能不受果蔬自身颜色的干扰，有一定的发展前景根据试验，发现此法结果偏低, 还有待于进一步优化改善3、 缺点：该法实验仪器较昂贵，主要问题是操作过程中反应完全与否，沉淀物洗涤、离心 反复多次，极容易带来误差十七、金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法1、 原理：本发明公开了一种用金纳米微粒分光光度法测定维生素C的方法于5mL比色 管中，依次加入0. l — 2.0mL浓度为95.64ug/mL的HAuCl 1[4]溶液，0 .0 2 — 0.5 0 mL浓度为1%的柠檬酸三钠溶液，再。