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划痕标记染料示踪技术.docx

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划痕标记染料示踪技术：所需试剂及配置方法：HBSS、PBS、胎牛血清、荧光黄染料、罗丹明染料、无水乙醇、 2%多聚甲醛、 0.3mM 正辛醇、培养基、手术刀片、荧光显微镜1、洗液：加1%胎牛血清的HBSS液，PBS液2、染料：称取 0.05g 的荧光黄粉末，加入 2ml 无水乙醇超声溶解（95%乙醇溶解稍慢、稍有困难）然后取1ml该母液，用PBS稀释至50ml即得到0.05%的荧光黄溶液罗丹明同上3、 2%多聚甲醛4、 GJ 阻滞剂正丁醇： 0.3mM 的正辛醇与无水乙醇按 1:50 混合溶解，取20 “L加入到PBS液或培养基中，使用其处理细胞 16h具体步骤：1、细胞培养在100 mm培养皿中，待长到75%-85%的密度2、弃去培养基，用含1%胎牛血清的 HBSS 清洗洗 5min*3 次（有文献中直接使用 PBS 液清洗）3、加入2ml染料混合剂（室温？）用手术刀在视野划痕，放置1 0分钟（有说2分钟），弃去染料（可回收），用 HBSS 液洗3 次， PBS 液洗2次，再用 2%多聚甲醛固定20分钟，4、使用荧光显微镜不同滤波器分别观察两种荧光标记情况，使用 imageJ 分析。

5、使用配好的含正辛醇培养基培养细胞16h，重复以上操作。

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