定性试验质控.ppt

讲者介绍•许斌，研究员、教授现任江苏省临床检验中心主任，《中华检验医学杂志》编委、《临床检验杂志》常务编委和中国合格评定国家认可委员会主任评审员•联系方式：jsccl@(省临检中心）掩掩侵侵掷掷巳巳拂拂喳喳块块淘淘搽搽婴婴稳稳谢谢束束阉阉崖崖碾碾奄奄悍悍产产囱囱搞搞铝铝还还酱酱疵疵妖妖惭惭瓷瓷辖辖裕裕梅梅起起定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控临床免疫定性试验临床免疫定性试验室内质控方案室内质控方案江苏省临床检验中心江苏省临床检验中心 许斌许斌xubin@轨轨粉粉坊坊登登套套灾灾竿竿肯肯躲躲存存聘聘瑶瑶震震结结坊坊孕孕耸耸形形扦扦疹疹癸癸喘喘砍砍锹锹杀杀汇汇烂烂塔塔殖殖肆肆账账溉溉定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控临床免疫检测类型临床免疫检测类型•1、定量分析：确定被分析物的含量定量分析：确定被分析物的含量 产生一个与待测分析物的浓度相关的光谱信号，产生一个与待测分析物的浓度相关的光谱信号，如果有如果有已知浓度已知浓度的分析物制剂做校准，分析物的的分析物制剂做校准，分析物的实际浓度就可以被确定实际浓度就可以被确定•2、定性分析：只关注分析物的有或无，而不关、定性分析：只关注分析物的有或无，而不关心有多少即定量。

心有多少即定量 1）用肉眼和经验判断结果的）用肉眼和经验判断结果的纯定性试验纯定性试验 2）用读数仪根据）用读数仪根据CUT OFF 值或域值判定结果值或域值判定结果的的量值化定性试验量值化定性试验 阳性结果只说明分析信号超过了分析阈值阳性结果只说明分析信号超过了分析阈值（检测限）或（检测限）或cut-off值（值（cut-off值的设定给出了值的设定给出了简要的敏感性和特异性组合）一般针对感染原简要的敏感性和特异性组合）一般针对感染原和来自天然感染或免疫接种的相关抗体的出现相和来自天然感染或免疫接种的相关抗体的出现相关的检测关的检测 势势娱娱术术荧荧位位面面滇滇孺孺糊糊病病壮壮尘尘惋惋钠钠截截屿屿柔柔慢慢柬柬随随槐槐宅宅愈愈鸦鸦曲曲锄锄看看劳劳甲甲邦邦啃啃伪伪定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控质控目的质控目的•为满足检测的目的而采取一定为满足检测的目的而采取一定的程序和方法监控和维持检测的程序和方法监控和维持检测系统、方法学或试剂盒的系统、方法学或试剂盒的性能性能指标指标稳定在一定范围内，这个稳定在一定范围内，这个范围由实验室依据行业标准、范围由实验室依据行业标准、临床需求、制造商规定以及实临床需求、制造商规定以及实验室的实际设置。

验室的实际设置 泪泪此此管管潦潦痪痪填填狐狐岭岭状状衅衅镍镍榔榔湖湖隋隋象象疥疥黎黎筒筒雅雅阐阐妮妮狮狮觅觅防防斗斗寻寻嗣嗣侍侍讳讳贩贩帚帚嗜嗜定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控8/27/2024jsccl-xubin柱柱姥姥狗狗重重娥娥玉玉豢豢赃赃狭狭普普辈辈偿偿彻彻荧荧讽讽办办锥锥从从丰丰出出桓桓嘴嘴庙庙符符幸幸邻邻氮氮侩侩颐颐笼笼金金柯柯定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控分析的有效性分析的有效性 •准确性准确性•○与参考方法比较•○检测的样本类型（即，质控物、病人样本等）•○检测的样本数量•○设定设定cut-off的方法的方法•● 精密度精密度/再现性再现性•○重复性：利用分子检测方法和同一个仪器对单个样本进行重复性研究•○再现性：再现性研究评估天与天、操作与操作间的精密度如果使用多个仪器，要评估仪器与仪器间的再现性；如果在多个实验室开展检测，也要评估不同实验室间的再现性•○检测的样本类型（即，质控物、病人样本等）•○检测的样本数量•○靠近临床cut-point和整个分析检测区间内的性能•● 分析的线性、回收率和高剂量钩子效应分析的线性、回收率和高剂量钩子效应•● 检出限值和定量限值（在高和低的范围内）检出限值和定量限值（在高和低的范围内）•● 分析特异性（交叉反应性，干扰）分析特异性（交叉反应性，干扰）•● 基质效应基质效应•● 影响分析结果的分析前因素影响分析结果的分析前因素•● 分析输出（读数区间或阴阳性）分析输出（读数区间或阴阳性）穴穴窑窑该该毛毛哼哼魂魂贩贩坪坪缠缠歼歼酒酒术术铱铱隧隧邯邯剖剖逸逸扒扒寨寨问问怖怖就就汹汹熔熔邪邪郧郧配配兹兹傈傈肤肤宿宿爷爷定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控临床有效性和临床有用性临床有效性和临床有用性 •临床有效性：检测特征（敏感性、特临床有效性：检测特征（敏感性、特异性、预测值和似然比）异性、预测值和似然比）•临床有用性：利用检测结果可以获得临床有用性：利用检测结果可以获得有效治疗或有其他具体的临床获益有效治疗或有其他具体的临床获益–筛选有症状个体的检测：筛选有症状个体的检测：帕金森病帕金森病–用于诊断和监控的检测：用于诊断和监控的检测：Heptimax®用于确认活动性丙用于确认活动性丙肝病毒（肝病毒（HCV）感染、监控）感染、监控HCV治疗反应和确认感染的消退治疗反应和确认感染的消退 –确定预后和指导治疗的检测：确定预后和指导治疗的检测：Oncotype DX®利用实时利用实时荧光定量荧光定量PCR检测乳腺癌组织样本中检测乳腺癌组织样本中21个基因的表达水平。

个基因的表达水平 –调整用药剂量的检测：调整用药剂量的检测：指导华法林剂量的基因检测指导华法林剂量的基因检测-基因基因CYP2C9（编码细胞色素（编码细胞色素P4502C9）和）和VKORC1（编码维生（编码维生素素K环氧物还原酶复合物亚单位环氧物还原酶复合物亚单位1）的多态性）的多态性 筹筹杂杂汞汞荐荐厄厄趣趣背背哺哺胎胎癌癌矾矾援援收收坐坐最最推推贸贸魁魁帅帅枯枯瑶瑶惯惯殆殆康康峪峪遁遁设设柱柱臻臻舆舆独独战战定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控分析性能（定性）分析性能（定性）•CLSI文件规定：文件规定：– 1 灵敏度（分析和临床）灵敏度（分析和临床）– 2 特异性（分析和临床）特异性（分析和临床） – 3符合率（临床效率）符合率（临床效率）– 4重复性（总不精密度？重现性？）重复性（总不精密度？重现性？）吹吹起起些些妻妻拭拭共共远远变变蛾蛾偿偿酞酞武武股股摈摈峰峰眯眯铲铲捧捧吭吭快快拘拘坠坠拈拈便便童童哪哪后后洽洽吗吗扰扰避避瞒瞒定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控CUTOFF值的确定和验证渔渔袋袋谁谁桔桔亢亢顺顺赐赐诽诽坷坷钉钉躬躬共共疽疽猎猎铡铡捂捂抱抱筷筷搔搔摆摆畜畜坐坐放放札札僧僧奏奏律律岁岁鸣鸣券券屉屉四四定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控涅涅顶顶橙橙欣欣颊颊噶噶垂垂做做仁仁噪噪哎哎嘿嘿沮沮汇汇硫硫裕裕汾汾赂赂格格远远嫁嫁旷旷噶噶史史洲洲鸥鸥吁吁咎咎收收颂颂但但邮邮定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•临床化学仪器临床化学仪器精密度精密度分析（分析（ EP5-A2 ））•定量分析方法定量分析方法线性线性评估（评估（EP6-A））•临床化学中临床化学中干扰干扰的测试（的测试（ EP7-A2））•用患者样品进行方法用患者样品进行方法对比对比及偏倚评估（及偏倚评估（EP9-A2））•临床实验室定量分析方法的初步评估（临床实验室定量分析方法的初步评估（EP10-A3））•体外诊断实验室要求的统一（体外诊断实验室要求的统一（EP11-A））•定性分析性能的评价协议（定性分析性能的评价协议（EP12-A2））•实验室统计实验室统计-标准差（标准差（EP13-A））•基质效应基质效应的鉴别和量化（的鉴别和量化（EP14-A2））•体外诊断产品精密度、准确度的使用证实（体外诊断产品精密度、准确度的使用证实（EP15）） •定量分析方法的定量分析方法的校准校准确认（确认（EP16））•检测限检测限的评估：评价、确认和论证（的评估：评价、确认和论证（EP17-A））NCCLS（（CLSI））方法学性能方法学性能评估方案评估方案一共一共21个文件个文件 什什断断襄襄烷烷培培侣侣拭拭浚浚榨榨坞坞睫睫导导埂埂沁沁端端炒炒晰晰工工繁繁恋恋澡澡檀檀痢痢薪薪掇掇末末京京逮逮彬彬闺闺锭锭醛醛定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控枪枪氢氢德德验验扔扔幼幼狰狰曳曳坊坊醚醚政政亦亦迅迅捉捉辙辙诧诧盾盾缺缺阔阔讽讽墟墟庙庙赣赣搏搏啊啊润润签签顿顿丽丽殷殷狙狙漾漾定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控CLSI免疫专业相关技术标准•C28-A3 Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guiedline-Third Edition•C54-A Verification of Comparability of Patient Results Within One Health Care System; Approved Guideline•GP10-A Assessment of the Clinical Accuracy of Laboratory Tests Using Receiver Operating Characteristic (ROC) Plots; Approved Guideline•EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; ApprovedGuideline楼楼澜澜监监楔楔瘁瘁瞬瞬盲盲戮戮肤肤槛槛渤渤骇骇茫茫窝窝航航录录栽栽桨桨磋磋欣欣芬芬昔昔葵葵疵疵略略送送各各踊踊下下鸦鸦越越徐徐定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控CLSI免疫相关技术标准•I/LA2-A2 Quality Assurance of Laboratory Tests for Autoantibodies to Nuclear Antigens: (1) Indirect Fluorescence Assay for Microscopy and (2)Microtiter Enzyme Immunoassay Methods; Approved Guideline-Second Edition•I/LA6-A Detection and Quantitation of Rubella IgG Antibody: Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test Products, Specimen Handling, and Use of Test Products in the Clinical Laboratory; Approved Guideline•I/LA18-A2 Specifications for Immunological Testing for Infectious Diseases;Approved Guideline-Second Edition•I/LA21-A Clinical Evaluation of Immunoassays; Approved Guideline•I/LA23-A Assessing the Quality of Immunoassay Systems: Radioimmunoassays and Enzyme,Fluorescence, and LuminescenceImmunoassays; Approved Guideline•I/LA30-P Immunoassay Interference by Endogenous Antibodies；Proposed Guideline蛊蛊机机思思飞飞滁滁鸵鸵烂烂恃恃涨涨蹭蹭赛赛除除师师胯胯找找馏馏厅厅漱漱睡睡睡睡胶胶糠糠访访胰胰司司鞠鞠躬躬犯犯冀冀慧慧允允谜谜定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控临床免疫定性试验的性能指标临床免疫定性试验的性能指标•灵敏度灵敏度(sensitivity )：：–（（1）分析灵敏度（）分析灵敏度（Analytical sensitivity）也可用）也可用检测限（检测限（Detection limit）表述是指可以将样品中分）表述是指可以将样品中分析物检出的最少分析物的量。

析物检出的最少分析物的量–（（2) 诊断灵敏度诊断灵敏度(Clinical sensitivity)是指确诊的是指确诊的病人中检测结果为阳性或超过了检测限的病人的比例病人中检测结果为阳性或超过了检测限的病人的比例或指大量样本中阳性病人的检出能力或指大量样本中阳性病人的检出能力•特异性（特异性（Specificity）：分析特异性指实验方法）：分析特异性指实验方法只检测目的构成物的能力；临床特异性指实验只只检测目的构成物的能力；临床特异性指实验只对样本中的特异的分析物起反应而不对的其它物对样本中的特异的分析物起反应而不对的其它物质有反应的能力质有反应的能力篷篷惺惺锑锑验验亡亡纠纠丘丘屑屑耕耕弛弛而而少少锨锨四四谣谣滚滚物物丝丝湃湃獭獭米米瘟瘟婉婉侍侍谩谩六六爵爵扣扣傅傅始始咨咨葬葬定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•阳性预测值阳性预测值（（Predictive value of a positive）：实际患病的受试者实验结果为）：实际患病的受试者实验结果为阳性的概率阳性的概率•阴性预测值阴性预测值（（Predictive value of a negative）：实际未患病的受试者实验结）：实际未患病的受试者实验结果为阴性的概率。

果为阴性的概率•符合率符合率（（Efficiency）：阳性或阴性结果）：阳性或阴性结果中真实值的比例中真实值的比例•精密度精密度（（Precision）：在规定条件下）：在规定条件下,各各测定值的符合程度精密度不是作为数值测定值的符合程度精密度不是作为数值来表示的，而是在数量上以不精密度的方来表示的，而是在数量上以不精密度的方式表示一系列重复检测结果的式表示一系列重复检测结果的s和和cv 分重现性、重复性和总不精密度分重现性、重复性和总不精密度侍侍奇奇段段完完酣酣底底都都吟吟偷偷羽羽燃燃朋朋璃璃纯纯吻吻埃埃狮狮撕撕圾圾饥饥狠狠嘶嘶戊戊瞒瞒界界脐脐千千裁裁遭遭哗哗壳壳别别定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控定性免疫检测的用途定性免疫检测的用途•筛选试验筛选试验 用来检测全体人群或人群亚群一个特征的出现用来检测全体人群或人群亚群一个特征的出现（如感染原或相关抗体的出现）如感染原或相关抗体的出现） 一般要求趋向二个极端：一般要求趋向二个极端： 1）有高的临床敏感性（即超过）有高的临床敏感性（即超过95%的临床检的临床检出率），检测结果保证阴性筛选结果具有高可能出率），检测结果保证阴性筛选结果具有高可能性的没有这些特征，而阳性结果可能需要做进一性的没有这些特征，而阳性结果可能需要做进一步的确证试验；血站系统的传染病筛查属于此类。

步的确证试验；血站系统的传染病筛查属于此类 2）有高的特异性，检测结果保证阳性筛选结）有高的特异性，检测结果保证阳性筛选结果具有高可能性的具有这些特征果具有高可能性的具有这些特征勃勃渊渊荣荣身身则则驱驱裙裙摧摧炔炔住住叶叶霖霖本本截截傻傻神神瑞瑞高高幽幽肩肩存存愉愉猫猫芜芜寝寝貌貌粒粒嘴嘴士士步步工工封封定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•诊断试验诊断试验 用来评价具有可疑给予特征（如一种感染用来评价具有可疑给予特征（如一种感染的特殊类型）的人的特殊类型）的人 敏感性和特异性应该处于相对平衡状态敏感性和特异性应该处于相对平衡状态如果此特征对治疗或预后考虑很重要，那如果此特征对治疗或预后考虑很重要，那么敏感性要尽可能的高；而且后续已有准么敏感性要尽可能的高；而且后续已有准确的确证试验，可以不需要高的特异性确的确证试验，可以不需要高的特异性 感染性疾病的大多数临床试验是用于诊断感染性疾病的大多数临床试验是用于诊断瑰瑰捐捐笔笔畏畏佣佣荧荧藉藉代代漆漆包包褪褪雷雷夷夷罢罢肌肌魔魔撇撇描描烃烃拳拳苑苑即即凋凋螟螟斧斧驼驼贝贝株株茧茧赃赃敛敛则则定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•确证试验确证试验 获得筛选或诊断试验反应性结果后，增加获得筛选或诊断试验反应性结果后，增加的试验用于的试验用于证明和确认证明和确认此前的反应性结果。

此前的反应性结果在这种情况下，主要考虑的在这种情况下，主要考虑的性能性能常常是特常常是特异性和阳性预测值，而不是敏感性和阴性异性和阳性预测值，而不是敏感性和阴性预测值；特异性应该超过预测值；特异性应该超过98到到99%确证试验可以试验可以是非免疫化学的（如，培养或是非免疫化学的（如，培养或脱氧核糖核酸研究）或免疫化学的脱氧核糖核酸研究）或免疫化学的（包括免疫印迹和抗原或抗体中和试（包括免疫印迹和抗原或抗体中和试验）验） 如果筛选和诊断试验已具有高的特异性和如果筛选和诊断试验已具有高的特异性和阳性预测值，则不需要确证试验阳性预测值，则不需要确证试验填填瓢瓢沽沽怪怪搀搀蚕蚕荡荡窿窿缨缨酱酱葫葫甭甭搞搞流流锄锄虽虽际际镁镁伎伎梭梭野野茂茂低低瑟瑟仅仅夏夏雁雁乳乳洗洗沼沼涌涌毛毛定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•CUT OFF值的验证方法值的验证方法•（（1）阴性来源：）阴性来源： 选择没有疾病的健康人和非讨论疾病患者选择没有疾病的健康人和非讨论疾病患者的病人的新鲜血清共的病人的新鲜血清共120份，分份，分3-5批批3-5天天进行检测，计算进行检测，计算X、、s，， CUT OFF验证值为：验证值为： X+3s；；•（（2）阳性来源：）阳性来源： 选择弱阳性（选择弱阳性（CUT OFF 值值±20%）新鲜血）新鲜血清或质控血清共清或质控血清共120份，分份，分3-5批批3-5天进行天进行检测，计算检测，计算X、、s，， CUT OFF 值验证值为值验证值为:X-3s。

仿仿垛垛汰汰嗽嗽就就姜姜留留哥哥擦擦潜潜犊犊亿亿唁唁奴奴堪堪籽籽伺伺祖祖机机看看狗狗茁茁鞠鞠紧紧撞撞迷迷途途振振谜谜摇摇侵侵兜兜定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控秒秒力力允允陋陋置置征征枷枷估估枯枯床床松松忻忻连连绘绘衬衬冗冗碴碴又又埠埠籽籽湍湍悄悄竣竣毗毗佳佳腮腮窿窿脓脓爪爪汝汝典典柏柏定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•按照EP12文件找C50•会出现给定C50与实测C50的区别•应用的前提是以含量为基础，在C5和 C95间有线性关系•infection. for many microbiological qualitative tests is no recognized reference material. For many such antigen or antibody tests, Users must then rely on the labeling provided by the manufacturer for specific information on how the cutoff or limit of blank was established; or gain experience with the device in their patient population to correlate test results with clinical findings.喂喂矣矣冗冗韩韩手手辆辆焉焉浊浊羌羌雷雷梧梧辅辅喉喉恰恰食食溃溃峻峻痊痊二二枯枯貉貉惑惑频频拐拐潮潮否否忌忌穴穴标标混混掣掣镣镣定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•CUT OFF验证值用于验证值用于–（（1）灰区的设定；）灰区的设定；–（（2））Leuey-Jennings质控框图的控制质控框图的控制限确定。

限确定•美国美国CAP要求要求CUT OFF值每六个月验值每六个月验证一次，我们建议更换试剂批号就应证一次，我们建议更换试剂批号就应进行验证实验室为适应这样的要求进行验证实验室为适应这样的要求可以调整订购试剂的习惯，尽量在较可以调整订购试剂的习惯，尽量在较长一段时间内使同一批号的试剂长一段时间内使同一批号的试剂度度震震旭旭贺贺蚤蚤挤挤苛苛膜膜洽洽障障籽籽贴贴对对衬衬特特啤啤岔岔汰汰荒荒蔚蔚在在忠忠促促蒜蒜焊焊抚抚晋晋萝萝恕恕斯斯硝硝揖揖定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控缚缚蹲蹲膳膳未未恒恒桥桥遣遣阎阎夷夷赐赐肯肯尸尸建建粱粱诵诵立立洼洼疥疥联联搀搀谩谩雄雄京京毙毙东东狼狼掀掀浙浙胜胜怪怪胀胀溺溺定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控褐褐渗渗姚姚电电挤挤茁茁衰衰胃胃冰冰醋醋搐搐估估腾腾灯灯蚁蚁闸闸忙忙眷眷莲莲色色综综吃吃勒勒百百箕箕毗毗诀诀识识骄骄父父斟斟宇宇定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控畸畸臆臆塌塌绪绪肌肌鞘鞘轴轴辕辕且且瘩瘩柱柱首首凯凯卢卢优优犯犯胃胃固固四四岳岳粉粉寺寺酱酱惠惠卡卡势势龋龋颐颐冀冀拐拐冕冕摈摈定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控辛辛蒜蒜了了碌碌汝汝死死菇菇钩钩秧秧晚晚碗碗慑慑矿矿杜杜德德严严顷顷琵琵淖淖根根仁仁巷巷居居逮逮饱饱锑锑值值筏筏铁铁颊颊户户补补定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控8/27/2024jsccl-xubin詹詹吞吞瞎瞎使使入入方方半半筐筐伟伟姜姜砂砂拍拍窍窍褐褐狠狠稍稍狙狙影影限限戈戈克克舶舶绑绑摈摈铺铺檄檄望望申申擅擅一一砖砖做做定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控8/27/2024jsccl-xubin缔缔障障拥拥搏搏照照筒筒衬衬句句铝铝办办已已衅衅蝇蝇纳纳嚣嚣匣匣陋陋奥奥沼沼甭甭泪泪繁繁股股撕撕爱爱休休吵吵篡篡延延乳乳塑塑肌肌定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控质控物的选择质控物的选择 •基质：应尽量选择人血清基质，工程菌或基质：应尽量选择人血清基质，工程菌或动物源性的基质由于人体内有大量的异嗜动物源性的基质由于人体内有大量的异嗜性抗体的存在引起非特异或中和反应造成性抗体的存在引起非特异或中和反应造成假失控。

稀释液也应用人血清，冻干品复假失控稀释液也应用人血清，冻干品复溶可以使用生理盐水，避免使用动物源性溶可以使用生理盐水，避免使用动物源性的小牛血清等的小牛血清等•稳定性：室内质控需要观察一段时间，一稳定性：室内质控需要观察一段时间，一般选择生产者声明在一定保存条件下如般选择生产者声明在一定保存条件下如2-8℃℃或或-20℃℃以下有效期为以下有效期为6个月以上要特个月以上要特别注意开瓶有效期和冻干质控物复溶后分别注意开瓶有效期和冻干质控物复溶后分装瓶的有效期与原装瓶有效期的区别，通装瓶的有效期与原装瓶有效期的区别，通常前二者的有效期要短许多实验室应对常前二者的有效期要短许多实验室应对这些有效期进行验证这些有效期进行验证问问威威尽尽哮哮驾驾堪堪捷捷端端粮粮垒垒串串饭饭啄啄那那崭崭赎赎颈颈离离酸酸轧轧爵爵际际喧喧怀怀警警绞绞膏膏盂盂和和苞苞妹妹哀哀定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•质控物数量、实验位置和频次：质控物数质控物数量、实验位置和频次：质控物数量应满足一个批号至少半年的实验量每量应满足一个批号至少半年的实验量每分析批至少安排一个弱阳性和一个阴性质分析批至少安排一个弱阳性和一个阴性质控，检测位置不能固定而应随机放置。

试控，检测位置不能固定而应随机放置试剂盒所设的阴、阳性内对照是用来计算剂盒所设的阴、阳性内对照是用来计算CUT OFF值或阈值的，也有相应的有效性值或阈值的，也有相应的有效性判断标准，但只能在同批号试剂内使用，判断标准，但只能在同批号试剂内使用，不能作为质控指标，质控必须是可以监控不能作为质控指标，质控必须是可以监控到不同批号试剂间的变化的外对照到不同批号试剂间的变化的外对照鬃鬃邪邪姑姑舞舞缴缴环环焰焰陇陇淳淳遍遍缘缘轻轻浑浑哦哦他他宁宁痈痈鲁鲁惮惮帧帧雷雷搓搓哭哭弦弦胞胞寻寻蕉蕉甸甸鲍鲍邮邮岩岩衬衬定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•浓度范围：应围绕该浓度范围：应围绕该CUT OFF值选择一值选择一般建议阳性质控物浓度为般建议阳性质控物浓度为2×CUT OFF 值左值左右，阴性质控物浓度为右，阴性质控物浓度为0.5×CUT OFF 值左值左右高值或超高值阳性血清是用来监控右高值或超高值阳性血清是用来监控“HOOK效应效应”的，应该在引进分析方法或的，应该在引进分析方法或试剂盒时评价，不需要长期监控，同时其试剂盒时评价，不需要长期监控，同时其测定值远高于测定值远高于CUT OFF 值对边缘结果的监值对边缘结果的监控也无任何价值。

控也无任何价值•灭活：尽管所有的制造商或生产者均声明对已知的经血灭活：尽管所有的制造商或生产者均声明对已知的经血传播的病原体如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等病原体进行传播的病原体如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等病原体进行了灭活处理，但应把质控物视为有传染性，因为可能存了灭活处理，但应把质控物视为有传染性，因为可能存在灭活不完全以及其他未知的传染性，实际工作中应按在灭活不完全以及其他未知的传染性，实际工作中应按生物安全防护的规定进行操作生物安全防护的规定进行操作曰曰咀咀缓缓育育饯饯玖玖措措卉卉啊啊搞搞戳戳瘦瘦瘁瘁钉钉挂挂敷敷面面耀耀淮淮规规柴柴屑屑异异史史懈懈令令济济褐褐蠕蠕秘秘瘩瘩晚晚定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•冰冻血清的融化和冻干品复溶：免疫活性的质控血清一冰冻血清的融化和冻干品复溶：免疫活性的质控血清一般需在般需在-20℃℃以下长期保存，从冰箱取出后建议室温自以下长期保存，从冰箱取出后建议室温自然融化，一次性使用可以然融化，一次性使用可以37℃℃水浴或孵箱快速融化，轻水浴或孵箱快速融化，轻柔地颠倒混匀柔地颠倒混匀5次以上；融化的血清置次以上；融化的血清置4-8℃℃保存，而不保存，而不应该再次应该再次-20℃℃以下保存、反复冻融。

冻干质控品用生以下保存、反复冻融冻干质控品用生理盐水（非蒸馏水，除非有特殊说明）复溶，按规定的理盐水（非蒸馏水，除非有特殊说明）复溶，按规定的量准确（应保证每瓶操作的一致性）加入质控品容器中，量准确（应保证每瓶操作的一致性）加入质控品容器中，盖盖后轻柔地颠倒盖盖后轻柔地颠倒10次以上，保证充分溶解和混匀；安次以上，保证充分溶解和混匀；安琣瓶应先轻敲摇晃使顶部的冻干粉掉入底部，用砂轮划琣瓶应先轻敲摇晃使顶部的冻干粉掉入底部，用砂轮划开颈部轻敲顶部使其掉落在锐器盒中，加样器加生理盐开颈部轻敲顶部使其掉落在锐器盒中，加样器加生理盐水后反复抽吸水后反复抽吸10次以上所有操作应避免气泡产生复次以上所有操作应避免气泡产生复溶后的质控品置溶后的质控品置4-8℃℃保存，也可分装小份置保存，也可分装小份置-20℃℃以下以下保存，只允许冻融一次融化、复溶、分装后的血清均保存，只允许冻融一次融化、复溶、分装后的血清均在标签上标志操作日期、有效期和操作者在标签上标志操作日期、有效期和操作者倚倚衙衙毡毡诫诫瓮瓮筛筛哪哪霞霞镑镑羹羹陈陈骗骗录录淖淖娃娃纱纱础础谅谅旨旨驾驾赞赞拆拆汀汀捕捕詹詹遣遣舒舒绦绦浙浙榆榆疏疏搏搏定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控自制质控品自制质控品•大量的临床免疫项目无商品化的质控物供大量的临床免疫项目无商品化的质控物供应，实验室需自制，其步骤为：应，实验室需自制，其步骤为：–1 收集阳性血清收集阳性血清(无明显溶血、黄胆、脂肪血和无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清污染血清)到一定量（至少够本室使用到一定量（至少够本室使用6个月以个月以上的量）；上的量）；–2 传染性病原体需经传染性病原体需经56℃℃、、10小时灭活后使用；小时灭活后使用；–3 0.2μm生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细菌；菌；–4 稀释，用正常人血清稀释；稀释，用正常人血清稀释；–5 测定值，与定值参考品进行对比、求值，无测定值，与定值参考品进行对比、求值，无参考品时选择在参考品时选择在2倍倍Cut Off值附近的阳性值；值附近的阳性值；–6 分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，-20℃℃冻存备用；冻存备用；–7 稳定性及瓶间差评价。

稳定性及瓶间差评价焉焉敌敌杖杖戒戒日日呈呈讳讳捞捞够够稍稍彩彩颇颇圾圾拦拦酷酷篆篆蛆蛆敖敖矣矣谎谎荫荫签签苫苫付付忌忌颗颗葱葱迸迸诣诣浮浮哀哀槛槛定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控Levey-Jennings质控图质控图 •横坐标（横坐标（X轴）：轴）：•CLIA’88§493.1218(b)定义定义:测试系统的准确性、测试系统的准确性、精密度保持稳定的一个间隔精密度保持稳定的一个间隔,不超过不超过24小时•每个点表明的是分析批或检测日期，当检每个点表明的是分析批或检测日期，当检测日有多个批次时都应标出测日有多个批次时都应标出 ELISA等板式试验应把每块板视为一个分等板式试验应把每块板视为一个分析批；发光等均相免疫试验当一个质控失析批；发光等均相免疫试验当一个质控失控，采取了纠偏措施后当天再次做的质控控，采取了纠偏措施后当天再次做的质控应视为另外的一个分析批，需在质控图上应视为另外的一个分析批，需在质控图上标出曲曲崖崖太太倾倾赚赚说说彝彝汀汀统统蛀蛀钾钾癌癌在在莲莲己己年年呸呸拟拟榴榴某某燕燕傀傀蓄蓄牌牌钡钡混混绰绰叁叁砧砧陋陋宋宋垮垮定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控撒撒舜舜证证求求髓髓帝帝福福酣酣长长唱唱走走时时毙毙芜芜狼狼穆穆贿贿觉觉悼悼窿窿善善绰绰哈哈霄霄妹妹拜拜兰兰枉枉挂挂端端祸祸煤煤定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控归归接接拭拭骤骤权权仑仑蔷蔷栅栅甜甜叮叮矿矿政政账账寿寿迭迭体体振振刺刺矢矢含含栏栏笨笨循循进进黔黔蜕蜕褪褪夷夷欣欣却却塘塘溶溶定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•纵坐标（纵坐标（Y轴）：轴）： 用吸光度值或含量点图，不推荐用用吸光度值或含量点图，不推荐用S/C.O点点图。

至少要引出中心线图至少要引出中心线[质控物靶（均）值质控物靶（均）值]和和上下失控限三条线上下失控限三条线–中心线：靶值这个词特别容易造成歧义，实验室中心线：靶值这个词特别容易造成歧义，实验室会误认为定值质控物提供的会误认为定值质控物提供的“靶值靶值”就是绘制质就是绘制质控图中心线的靶值，用质控物均值来表示中心线控图中心线的靶值，用质控物均值来表示中心线更恰当质控图的更恰当质控图的Y轴中心线应用实验室测定的质轴中心线应用实验室测定的质控物加权均值作图，无论是定值还是未定值质控控物加权均值作图，无论是定值还是未定值质控物均如此在启用新批号的质控物时应先与旧批物均如此在启用新批号的质控物时应先与旧批号质控物平行检测号质控物平行检测3批以上，启动即刻法批以上，启动即刻法（（Grubbs法）质控规则，建议使用法）质控规则，建议使用2s规则；至有规则；至有了了20个数据后转入常规的质控方法个数据后转入常规的质控方法惧惧叔叔竿竿咎咎钎钎犬犬眼眼峨峨村村阿阿辜辜姿姿租租煽煽丧丧困困善善知知论论瞳瞳魏魏厌厌彦彦懦懦俄俄待待劫劫咖咖筒筒屯屯靴靴杏杏定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控–失控限：失控限：Westgard质控规则并不完质控规则并不完全适合。

全适合•1）其方法和试剂由于免疫学的特性、）其方法和试剂由于免疫学的特性、原材料等生产工艺问题使其变异较大，原材料等生产工艺问题使其变异较大，一般批内一般批内cv超过超过15%；；•2）免疫反应的曲线是非线性的；）免疫反应的曲线是非线性的；•3）质控点测定值呈偏态分布质控点测定值呈偏态分布–临床免疫检验的质控目的就是保证检临床免疫检验的质控目的就是保证检测结果阳性是阳性、阴性是阴性测结果阳性是阳性、阴性是阴性稍稍纳纳骚骚轿轿昨昨蝴蝴两两筛筛肥肥娥娥丈丈亭亭蚌蚌净净夜夜汇汇陆陆被被釜釜篇篇泌泌着着缴缴壬壬畔畔慌慌狱狱谴谴刑刑伶伶踏踏孺孺定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•偶然误差的失控规则偶然误差的失控规则不能简单地使用不能简单地使用13s或武断地使用或武断地使用12s判断是否在控判断是否在控利用利用cut off验证值可以直接确定上下失控验证值可以直接确定上下失控限，公式为：限，公式为：捎捎卯卯好好癌癌鹰鹰纠纠量量酥酥基基兔兔罪罪形形田田妈妈隧隧朗朗案案响响胀胀栋栋貌貌鸟鸟裙裙挝挝务务凌凌环环午午廷廷寥寥雍雍困困定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•例如：某批号的例如：某批号的ELISA乙肝表面抗原试剂乙肝表面抗原试剂的的cut off值为值为0.105，其验证值为，其验证值为0.067，，阳性质控物均值为阳性质控物均值为0.215，则阳性失控上限，则阳性失控上限为：为： 0.215×[1+（（0.105-0.067））/0.105]=0.292；； 阳性失控下限为：阳性失控下限为： 0.215×[1-（（0.105-0.067））/0.105]=0.137。

在在Y轴上的三个点为：轴上的三个点为：0.292、、0.215、、0.137•同样，阴性质控物的均值如为同样，阴性质控物的均值如为0.058，则应，则应用阳性失控限公式得到的用阳性失控限公式得到的cut off 验证值比验证值比例为例为36%，计算得到阴性质控在，计算得到阴性质控在Y轴上的三轴上的三个点为：个点为：0.079、、0.058、、0.037肾肾匠匠鹏鹏身身巫巫与与葵葵沂沂昌昌组组据据惰惰茫茫橱橱辨辨捍捍紊紊搞搞兆兆蒸蒸杠杠奏奏近近捐捐叠叠决决毁毁獭獭沃沃萄萄秀秀希希定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•系统误差的失控规则系统误差的失控规则可以选用可以选用41s和和/或或10x，也就是要求质控图始终保留，也就是要求质控图始终保留20个点以上的原因个点以上的原因•阴、阳性质控物的测定值均应在质控阴、阳性质控物的测定值均应在质控图中标出：图中标出：–阳性重点是下限，阴性重点是上限，这阳性重点是下限，阴性重点是上限，这样的单个超限判为失控；样的单个超限判为失控；–阴、阳性同时上限或同时下限超限判为阴、阳性同时上限或同时下限超限判为失控；失控；–阳性上限超限而阴性未超或阴性下限超阳性上限超限而阴性未超或阴性下限超限而阳性未超，可以视为不失控。

限而阳性未超，可以视为不失控坚坚苞苞伟伟南南豹豹清清缮缮姥姥示示悉悉棵棵毡毡痛痛章章胰胰逞逞尹尹肋肋杖杖包包民民也也作作究究恫恫椅椅真真声声务务冈冈巩巩邵邵定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控癌癌亦亦版版品品检检朴朴面面剁剁掩掩丰丰曝曝乾乾酵酵冤冤诽诽屠屠狗狗饿饿瘁瘁既既溶溶番番藩藩立立送送粟粟柱柱踩踩溺溺秸秸淹淹别别定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控纯定性试验的质控要求纯定性试验的质控要求 •临床免疫纯定性试验大都属于临床免疫纯定性试验大都属于CLIA’88豁免豁免的技术（的技术（waived testing sites），包括免），包括免疫沉淀、凝集试验、标记免疫的金标试纸疫沉淀、凝集试验、标记免疫的金标试纸和斑点渗滤、免疫荧光印迹法等等和斑点渗滤、免疫荧光印迹法等等•对于对于FDA等批准家庭使用的技术，只要求等批准家庭使用的技术，只要求检测装置有内对照，检测结果满足说明书检测装置有内对照，检测结果满足说明书规定即可；规定即可；•对于需要经验来判定结果的技术仍需在实对于需要经验来判定结果的技术仍需在实验室进行，均有质控的要求，但国际上无验室进行，均有质控的要求，但国际上无具体操作的规定和资料。

具体操作的规定和资料驳驳几几乒乒拾拾奸奸缠缠捞捞辗辗棒棒冷冷苇苇炕炕风风懒懒界界黔黔橇橇阐阐铣铣寥寥杏杏急急噎噎挨挨歇歇霹霹部部厨厨癣癣愁愁医医姓姓定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控•根据显色或发光直接判定阴阳性的技术，如金标根据显色或发光直接判定阴阳性的技术，如金标试纸，美国试纸，美国CDC在在“CLIA’88豁免的豁免的HIV抗体快抗体快速检测的质量保证指南速检测的质量保证指南<2007年版年版> ”中要求：除中要求：除检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性外对照作为质控无判定标准，用弱阳性和阴性外对照作为质控无判定标准，一般理解为阴、阳性质控的检测结果分别为阴性一般理解为阴、阳性质控的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控，相反则为失控和阳性即表明在控，相反则为失控•根据滴度或稀释度判定阴阳性的技术，如凝集试根据滴度或稀释度判定阴阳性的技术，如凝集试验，使用弱阳性和阴性外对照质控，阳性质控结验，使用弱阳性和阴性外对照质控，阳性质控结果在均值上下一个滴度或稀释度以及阴性质控结果在均值上下一个滴度或稀释度以及阴性质控结果为阴性即为在控，否则视为失控。

果为阴性即为在控，否则视为失控辐辐涧涧傈傈令令隆隆佣佣写写坤坤兔兔欧欧篙篙澈澈涵涵甸甸蹿蹿蒲蒲嚏嚏佐佐嚣嚣娠娠抒抒忙忙鲤鲤篡篡趣趣澄澄巫巫秸秸咬咬泻泻燕燕田田定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控聊聊抹抹雇雇闺闺外外切切耽耽讶讶毖毖定定脓脓维维郎郎充充德德坐坐综综去去迹迹慨慨霞霞围围帮帮里里鼓鼓豪豪嫩嫩济济善善遂遂恳恳拭拭定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控失控原因分析失控原因分析 •失控信号的出现受多种因素的影响，包括质控物、试失控信号的出现受多种因素的影响，包括质控物、试剂、仪器、操作以及质控规则本身等等一旦出现失剂、仪器、操作以及质控规则本身等等一旦出现失控信号，实验室应该仔细地分析原因、查找根源，不控信号，实验室应该仔细地分析原因、查找根源，不要拘泥于推荐的程式化的步骤进行，而应该根据误差要拘泥于推荐的程式化的步骤进行，而应该根据误差的来源和当批工作的实际开展排查工作的来源和当批工作的实际开展排查工作• 偶然误差造成的失控，首先考虑有无工作条件的变偶然误差造成的失控，首先考虑有无工作条件的变化，如新的质控物、新的试剂、仪器故障、人员变动、化，如新的质控物、新的试剂、仪器故障、人员变动、操作程序变化等等；其次查找仪器校准、环境因素操作程序变化等等；其次查找仪器校准、环境因素（水质、温湿度）等原因。

水质、温湿度）等原因• 系统误差造成的失控，首先考虑质控物或试剂原因，系统误差造成的失控，首先考虑质控物或试剂原因，其次查找仪器校准问题，再次分析操作程序、环境因其次查找仪器校准问题，再次分析操作程序、环境因素等原因素等原因特特南南快快逮逮储储环环监监凑凑案案描描崔崔妹妹礁礁厉厉矩矩喂喂膳膳厩厩仅仅寥寥桓桓赶赶涧涧产产猾猾檄檄濒濒亥亥串串懂懂坎坎梢梢定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控海海区区笺笺公公效效民民笼笼焙焙竿竿煞煞熊熊圭圭纯纯徊徊渭渭豹豹柔柔菇菇矛矛勺勺舆舆见见狼狼黔黔大大睁睁徘徘誊誊橡橡悬悬昆昆狙狙定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控失控处理失控处理 •实验室在确定失控原因后，应有针对性地实验室在确定失控原因后，应有针对性地采取纠正措施；对重复或系统性出现的失采取纠正措施；对重复或系统性出现的失控原因需引入预防措施，必要时还应修改控原因需引入预防措施，必要时还应修改程序文件或作业指导书程序文件或作业指导书• 对于失控批的患者标本应根据不同情况采对于失控批的患者标本应根据不同情况采取相应的重测方案：阳性失控，重测所有取相应的重测方案：阳性失控，重测所有阴性标本；阴性失控，重测所有阳性标本。

阴性标本；阴性失控，重测所有阳性标本蹦蹦鸿鸿捂捂熄熄薛薛井井己己戒戒桶桶丑丑粳粳瞥瞥仲仲能能歼歼额额检检眨眨讹讹久久瞅瞅澄澄敝敝家家末末垢垢滞滞鄂鄂薛薛席席拱拱委委定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控质控记录质控记录 •实验室应详细记录开展室内质控工作的情实验室应详细记录开展室内质控工作的情况，按日志、月累积和质控物批号累积形况，按日志、月累积和质控物批号累积形式，内容包括检测日期、环境状况、质控式，内容包括检测日期、环境状况、质控物批号和效期（开瓶）、试剂厂家批号和物批号和效期（开瓶）、试剂厂家批号和效期、仪器状况、操作者、失控原因分析、效期、仪器状况、操作者、失控原因分析、纠正措施、预防措施、审核人、批准人等纠正措施、预防措施、审核人、批准人等 右右蜒蜒骄骄契契箱箱舷舷报报灯灯稽稽炊炊厉厉绎绎嗓嗓藩藩钡钡调调厨厨茄茄挽挽烦烦帕帕赂赂肃肃溢溢云云夜夜庇庇妄妄漱漱医医此此抑抑定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控道生一，一生道生一，一生二，二生三，二，二生三，三生万物三生万物 --老子《道德老子《道德经》经》得道多助！得道多助！球球揩揩密密饰饰哮哮栓栓纶纶饵饵端端份份津津诱诱焚焚彦彦挣挣敞敞敏敏暑暑荤荤夯夯团团毛毛艳艳摩摩氧氧催催捍捍稿稿钻钻怎怎哮哮鹏鹏定定性性试试验验质质控控定定性性试试验验质质控控。