HPLC法测定盐酸多巴胺注射液的有关物质【药学论文】.doc

药学论文-HPLC 法测定盐酸多巴胺注射液的有关物质【摘要】 目的 筛选合适的高效液相色谱条件，测定盐酸多巴胺注射液的有关物质方法 采用不加校正因子的主成分自身对照法，采用 RPHPLC ；色谱柱为 Diamonsil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为［0.005 mol/mL 十二烷基硫酸钠 冰醋酸0.1 mol/mL 乙二胺四醋酸二钠(700∶10∶2)］ 乙腈(6∶4)；柱温：40℃；流速：1.20 mL/min；检测波长 280 nm结果 在 1～12 μg/mL 范围内线性良好，测定标准曲线为 Y=36493X-629.88（r=0.9996，n=11）；最低检测限为 0.9997 ng结论 该法专属性强，准确，灵敏，可用于盐酸多巴胺注射液有关物质的检查 【关键词】 RP HPLC 法；盐酸多巴胺注射液；有关物质盐酸多巴胺（dopamine hydrochloride）注射液的有关物质检查，中国药典［1］中并没有收载英国药典中收载的灭菌多巴胺浓溶液和注射用盐酸多巴胺采用薄层色谱法，需用盐酸甲基多巴胺对照品（4Omethyldopamine hydrochloride 和 3Omethyldopamine hydrochloride）测定系统适用性［2］。

本文采用 HPLC 法进行有关物质检查，方法准确，重现性好，灵敏度高，可作为本品的有关物质检查方法，更有效的对其进行质量监控1 仪器与试药TU1901 型紫外可见分光光度计，美国 Waters 1525 高效液相色谱仪，日本Shimadzu LC10Avp 高效液相色谱仪甲醇、冰醋酸、十二烷基硫酸钠和乙二胺四醋酸二钠均为分析纯试剂盐酸多巴胺注射液由广州白云山明兴制药有限公司提供，批号为 050107，050501，0607032 色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：［0.005 mol/mL 十二烷基硫酸钠 冰醋酸0.1 mol/mL 乙二胺四醋酸二钠(700∶10∶2)］ 乙腈(6∶4)；流速：1.2 mL/min；检测波长 280 nm；理论板数按盐酸多巴胺峰计算为 3 600在以上色谱条件下，盐酸多巴胺保留时间约为 5 min，见图 1A.酸性破坏试验 B.碱性破坏试验 C.加热破坏试验 D.氧化破坏试验 E.光照破坏试验 F.溶解介质氧化破坏试验 G.溶解介质碱性破坏试验图 1 盐酸多巴胺降解产物色谱图（略）Fig.1 HPLC chromatograms of decomposition products of dopamine hydrochloride3 方法与结果3.1 方法的专属性考察取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相制成每 1 mL 中含 300 μg 的溶液，取5 mL 置试管中，加热 30 min 进行加热破坏试验；取 5 mL 置试管中，加质量分数为 10%的盐酸溶液 2 滴，加热 30 min 后用质量分数为 10%的 NaOH 溶液调为中性作为酸性破坏试验；取 5 mL 置试管中，加质量分数为 10%的 NaOH 溶液 2 滴，加热 30 min 后加质量分数为 10%盐酸溶液调为中性作为碱性破坏试验；取 5 mL置试管中，加质量分数为 30%的过氧化氢 2 滴，加热 30 min 作为氧化破坏试验；取 5 mL 置试管中，在紫外灯 366 nm 下光照 1 h 作为光照破坏试验；同时做溶解介质的破坏性试验。

各取上述溶液 20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图，结果酸性和碱性对盐酸多巴胺有明显的破坏，溶解介质约在 1.1 min 和 1.4 min有杂质峰，拟定的色谱条件对分解产物与主峰有良好的分离，表明方法的专属性强，见图 13.2 方法的耐用性考察选用 Diamonsil C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）、江苏汉邦 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Alltech C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色谱柱等 3 种不同品牌不同填料的 C18 色谱柱，取破坏性溶液进样，结果 3 种色谱柱对分解产物与主峰均能达到有效分离3.3 线性范围精密称取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相溶解并稀释成每 1 mL 含 1～12 μg 的 11 个溶液，依法测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，求得回归方程：Y=36 493X-629.88（r=0.999 6，n=11）盐酸盐多巴胺在 1～12 μg/mL 范围内呈良好线性关系3.4 检测限 按上述色谱条件，以信噪比为 3∶1 对检出限进行测定，测得盐酸多巴胺在此条件下的检出限为 0.999 7 ng。

3.5 供试品的测定精密量取本品适量，加流动相稀释成每 1 mL 中含 300 μg 的溶液作为供试品溶液；精密量取 1 mL，置 50 mL 量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照溶液量取对照溶液 20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，盐酸多巴胺峰的保留时间约在 5 min，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为记录仪满量程的20％～25％再精密量取供试品溶液与对照溶液各 20 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸多巴胺保留时间的 3 倍供试品溶色谱图见图 2，检验结果见表 1A.空白溶剂 B.1%对照溶液 C.样品图 2 盐酸多巴胺注射液有关物质检查色谱图（略）　　Fig.2 HPLC chromatograms of dopamine hydrochloride injection　表 1 样品测定结果（略）Tab.1 Determination results of sample4 讨论4.1 取破坏性实验项下盐酸多巴胺原溶液（未经破坏），照分光光度法在200～360 nm 范围内扫描，供试品溶液在 280 nm 处有最大吸收，且无其它干扰，所以将检测波长定为 280 nm。

4.2 按拟定的方法和色谱条件，盐酸多巴胺经酸、碱、氧化、光照、加热等条件破坏产生的杂质有良好的分离，方法可行主峰保留时间在 5 min 时，保留时间约在 3、4、8 min 处有杂质峰4.3 方法耐用性的考察中选用的 3 种色谱柱对分解产物与主峰均能达到有效分离，表明该法对色谱柱的选择无特殊要求4.4 经测定 3 批样品，单个杂质峰面积均不大于对照溶液中盐酸多巴胺峰面积的 1.25 倍（2.5%）,且没有多于一个杂质峰的峰面积大于对照溶液中盐酸多巴胺峰的峰面积（2%）参考文献】［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国国药典:2005 版二部［Z］.北京:化学工业出版社,2005:500.［2］ BP［Z］.2007.2531。