空气中微生物的检测.ppt

空气中微生物数量的检测空气中微生物数量的检测2011.11.21n n一、实验目的n n二、实验原理n n三、实验步骤n n四、结果计算n n五、结果评价一、实验目的和意义一、实验目的和意义n n掌握检测和计数空气中微生物的基本方法n n掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操作n n学习对室内空气进行初步的微生物学评价实验意义实验意义n n空气中细菌总数常作为室内空气质量和空气受到微生物性污染程度的指标n n用于医院、公共场所等空气质量的评价二、实验原理二、实验原理n n1 1：自然沉降法（沉降平板法）：自然沉降法（沉降平板法）n n根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的根据空气中携有微生物气溶胶粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上，作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上，经过经过24h24h，，37℃37℃温箱培养计算出菌落数温箱培养计算出菌落数n n特点：此法简单方便，但稳定性差，直径特点：此法简单方便，但稳定性差，直径1 1～～5μm5μm的粒子在的粒子在5min5min中内沉降距离有限，使小粒子采集中内沉降距离有限，使小粒子采集率较低n n2. 2.撞击法撞击法n nAndersonAnderson采样器原理：多级筛孔型采样器采样器原理：多级筛孔型采样器 由由6 6个带有微细针孔的金属撞击盘构成，盘下放置个带有微细针孔的金属撞击盘构成，盘下放置有培养基的平皿，每个圆盘上有有培养基的平皿，每个圆盘上有400400个环形排列小个环形排列小孔，由上到下孔径逐渐减小。

气流从顶罩进第一孔，由上到下孔径逐渐减小气流从顶罩进第一级，较小的粒子会由于动量不足随气流绕过平皿级，较小的粒子会由于动量不足随气流绕过平皿进入下一级经过进入下一级经过6 6次撞击后，可把绝大部分微生次撞击后，可把绝大部分微生物采下Anderson采样器（采样器（FA-1型）型）各级撞击盘捕获粒子范围及孔径大小各级撞击盘捕获粒子范围及孔径大小n nⅠ Ⅰ：＞：＞7μm 7μm 孔径孔径1.181.18㎜㎜n nⅡ Ⅱ：：4.7~7μm 4.7~7μm 孔径孔径0.910.91㎜㎜n nⅢⅢ：：3.3~4.7μm 3.3~4.7μm 孔径孔径0.710.71㎜㎜n nⅣⅣ：：2.1~3.3μm 2.1~3.3μm 孔径孔径0.530.53㎜㎜n nⅤ Ⅴ：：1.1~2.1μm 1.1~2.1μm 孔径孔径0.340.34㎜㎜n nⅥⅥ：：0.65~1.1μm 0.65~1.1μm 孔径孔径0.250.25㎜㎜各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义各种粒径大小的菌落易沉降的部位及意义n n特点 a. 采集粒谱范围广，一般在0.2～20μm以上； b. 采样效率高，逃逸少 c. 微生物存活率高n n3.滤过法：使一定量的空气通过吸附剂（灭菌生理盐水），然后培养吸附剂中的细菌，计算出菌落数。

n n4.液体撞击法：和固体撞击式采样器一样，是利用喷射气流方式将空气中的微生物粒子采集在小体积的液体中，适用于高浓度的空气微生物采样三、实验步骤三、实验步骤n n1.自然沉降法 配制琼脂培养基（已做） ↓培养皿暴露空气中5min/10min ↓ 37℃温箱培养24h ↓ 计数和结果评价n n采样布点原则采样布点原则a. a. 根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，根据室内面积进行对角线或者梅花式均匀布点，小于小于50m50m2 2的房间应设的房间应设3 3个点，个点，5050～～100m100m2 2设设3 3～～5 5个；个；100m100m2 2以上至少以上至少5 5个点个点b. b. 采样高度采样高度 和人呼吸高度一致（和人呼吸高度一致（1.21.2～～1.5m1.5m））c. c. 采样点应避开风口，离墙壁距离应大于采样点应避开风口，离墙壁距离应大于0.5m,0.5m,采样采样时关闭门窗，减少人员走动时关闭门窗，减少人员走动n n2. 2.撞击法撞击法 调整采样器高度为呼吸带高度于调整采样器高度为呼吸带高度于1.21.2～～1.5m1.5m ↓ ↓将平皿依次放入圆盘，固定并做好标记将平皿依次放入圆盘，固定并做好标记 ↓ ↓接通电源，开打电源开关，调整流量到接通电源，开打电源开关，调整流量到28.3L/min 28.3L/min ↓ ↓采样采样5min/10min5min/10min后，取出平皿，经过后，取出平皿，经过24h24h，，3737℃℃培养，培养，计数计数分组： 4个同学一组，分别采用自然沉降法和Anderson采样器，采样时间设为5min和10min，比较两种采样方法的结果。

注意事项： 整个过程注意无菌操作四、结果计算四、结果计算n n1. 1.自然沉降法自然沉降法n n根据奥梅梁斯基建议，面积为根据奥梅梁斯基建议，面积为100cm100cm2 2的平板培养基，暴露的平板培养基，暴露于空气中于空气中5min5min，于，于37℃37℃温箱培养温箱培养24h24h后所生长的菌落数相后所生长的菌落数相当于当于10L10L空气中的细菌数空气中的细菌数n n空气中细菌数（空气中细菌数（cfu/m cfu/m 3 3）） =1000×[(100/A) ×(5/t) =1000×[(100/A) ×(5/t) ×(1/10)] ×N×(1/10)] ×Nn n = 50000N/(A×T) = 50000N/(A×T)n nA-A-平板面积（平板面积（cmcm2 2）） T- T-暴露时间（暴露时间（minmin））n nN-N-平均菌落数（平均菌落数（cfu/cfu/皿）皿）n n2. 2.撞击法撞击法n n空气含菌量空气含菌量(cfu/m(cfu/m3)3)=[=[六级采样板的总菌数六级采样板的总菌数（（cfucfu））÷28.3÷28.3（（L/minL/min））× ×采样时间（采样时间（minmin））] ×1000] ×1000n n计算空气中微生物大小分布：计算空气中微生物大小分布： 各级微生物粒子数各级微生物粒子数％％= =该级菌落数该级菌落数/ /六级总菌落数六级总菌落数 五、结果评价五、结果评价n n空气微生物卫生标准，是以细菌作为标准空气微生物卫生标准，是以细菌作为标准n n细菌选用的指标是菌落总数，表示方法为细菌选用的指标是菌落总数，表示方法为cfu/cfu/皿或皿或者者cfu/mcfu/m3 3 我国现行标准是根据空气中实测细菌数和流行病学我国现行标准是根据空气中实测细菌数和流行病学观察结果为主要依据。

观察结果为主要依据n n室内空气质量标准 （GB/T18883-2002）n n2500cfu/m3公共场所空气卫生标准公共场所空气卫生标准n n图书馆、阅览室的空气卫生标准：空气细菌总数图书馆、阅览室的空气卫生标准：空气细菌总数≤2500cfu/m≤2500cfu/m3 3（撞击式），或（撞击式），或≤30≤30个个/ /皿（沉降式）皿（沉降式）n n娱乐场所的卫生标准：空气娱乐场所的卫生标准：空气≤4000cfu/m≤4000cfu/m3 3n n幼托机构室内卫生标准：空气细菌菌落数应幼托机构室内卫生标准：空气细菌菌落数应≤2500cfu/cm≤2500cfu/cm3 3 （沉降法）（沉降法）医院消毒卫生标准（医院消毒卫生标准（GB　　15982－－1995））1.对两种方法结果的比较？2.根据Anderson采样器的实验结果，计算空气中微生物大小分布：以各级的菌落数占六级总菌落数的百分比表示两种方法比较两种方法比较n n1. 1. 沉降法测定的菌落总数要多，在实验条件下比撞击法多沉降法测定的菌落总数要多，在实验条件下比撞击法多24.624.6％n n2. 2. 小颗粒含菌粒子在空气中稳定，不易沉降或者漂浮，撞小颗粒含菌粒子在空气中稳定，不易沉降或者漂浮，撞击法比沉降法更易采集到小粒子。

击法比沉降法更易采集到小粒子n n3. 3. 沉降法结果不稳定，容易受采样条件的影响沉降法结果不稳定，容易受采样条件的影响影响因素影响因素n n1. 温度对细菌数量影响较大，温度越低，细菌数越少n n2. 气流，不仅可以把室外的细菌带入室内，也会将地面、墙壁的含菌粒子扬起n n3. 日光，波长为254纳米的紫外线光具有杀菌作用n n4. 湿度，湿度过低，繁殖体易趋向死亡。