HIV抗体检测的标准操作程序(ELISA法和快速法).doc

HIV 测定（ ELISA 法）标准操作规程1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于 HIV 感染的辅助诊断，抗 HIV 药物治疗的效果的监测2、原理采用夹心 ELISA 方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒 HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组 HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗 -HIV 抗体反应，加入 HRP 标记HIV（1+2）型抗体抗原结合，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，然后加入 TMB 底物产生显色反应通过酶标仪检测吸光度（OD 值） ，根据 OD 值判断 HIV 抗体的存在与否3、性能参数灵敏度高（0.5ng/ml）4、标本要求（1）标本类型：血清，血浆2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置不超过 8 小时，2-8℃不超过 72 小时，-20 ℃可长期保存，应避免反复冻融（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定 本文来自检验地带网 5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司（3）包装规格： 96T/Kit（4）试剂盒组成：①、HIV 酶标板；②、HIV 酶标试剂；③、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；④、显色剂 A 液和 B 液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。

7、仪器设备：酶标仪：ZS 板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准洗板机：DNM-9620 型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准8、校准程序 9、操作步骤①、配液：将 50ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水 25 倍稀释至 1000ml 备用②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照 2 孔、阳性对照 3 孔，空白对照 2孔③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照 100μl，用封板膜封板后置 37℃温育 60min④、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择 5 次程序，洗板后在干净纱布上拍干⑤、加酶：每孔加酶结合物 100μl（空白对照孔除外） ，充分混匀，用封板膜封板后置37℃温育 30min⑥、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择 5 次程序，洗板后在干净纱布上拍干⑦、显色：每孔加入底物缓冲液 50μl，TMB 50μl，轻轻振荡混匀，封板后置 37℃避光显色 10min ⑧、测定：每孔加终止液 50μl，轻轻振荡混匀设定酶标仪波长为 450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长 630 nm） ，空白调零，读取各孔 OD 值。

⑨、判断结果：计算临界值（cut-off）值临界值=阳性对照值×10% （若阳性对照 OD 值＞2.5 按 2.5 计算）正常情况下，阴性对照孔的 OD 值≤0.08样品 OD 值＜临界值者为 HIV 抗体阴性若 1孔阴性对照的 OD 值＞0.08 应舍弃，若有 2 孔或 2 孔以上阴性对照的 OD 值＞0.08，应重复实验 本文来自检验地带网 正常情况下，阳性对照孔的 OD 值≥0.80样品 OD 值≥临界值者为 HIV 抗体阳性若 1孔阳性对照的 OD 值＜0.8 应舍弃，若有 2 孔或 2 孔以上阳性对照的 OD 值＜0.8，应重复实验注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照《全国 HIV 检测管理规范》送 HIV 确证实验室进行确证试验10、质量控制：每块板设阴阳性及空白对照，并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔 OD 值采用“即刻法”计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控11、干扰和交叉反应12、生物参考区间 正常人阴性13、患者检验结果的可报告区间 阳性表示 HIV 病毒感染。

14、临床意义 用于 HIV 感染的辅助诊断，抗 HIV 药物治疗的效果的监测 15、其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有"检定合格" 防伪标签的试剂HIV 测定（胶体金法）标准操作规程2010-12-28 来源 :检验地带网 浏览:703 次 转发至： 【字号：大 中 小】 核心提示：1、检验目的 用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的 HIV-1 和 HIV-2 抗体，用于帮助检测受感染个体的 HIV-1 和 HIV-2 抗体本品检测阳性者，需进一步确证 2、原理 利用双抗原夹心法检测 HIV 抗体标本加入反应板，若标本中含有 HIV 抗体时，先与金1、检验目的用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的 HIV-1 和 HIV-2 抗体，用于帮助检测受感染个体的 HIV-1 和 HIV-2 抗体本品检测阳性者，需进一步确证2、原理利用双抗原夹心法检测 HIV 抗体标本加入反应板，若标本中含有 HIV 抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体-金标抗体复合物，在虹吸作用下向前移动，遇到包被抗原形成抗原-抗体-金标抗原复合物，并出现红色沉淀线。

包被膜上同时带有一条质控包被线作为对照，所以当出现一条红色质控线和一条（或两条）红色反应线时判断为阳性当待测标本中无HIV 抗体时，只出现一条红色质控线则判断为阴性作为质控，不管结果为阳性或阴性，都会出现一条红色质控线如无红色质控线（或只有反应线）出现，则实验无效本方法适用于血清标本检测，用于医院、海关及无偿献血员现场快速体检等3、性能参数4、标本要求（1）标本类型：血清2）标本采集：见标本采集手册3）标本储存和运输：新鲜血清 2～8℃贮存时间不超过 72 小时 （4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒（HIV-1+2）抗体诊断试剂（胶体金法） 2）试剂生产厂家：天津中新科炬生物制药有限公司3）包装规格：1 个测试/包装袋； 25 个测试/ 盒4）试剂盒组成：单人份包装测试板，每盒 25 人份说明书一份 7、仪器设备（请根据各实验室情况自行添加）8、校准程序9、操作步骤HIV-1+2 抗体诊断试剂盒操作流程（1） 、撕开包装有 HIV-1+2 抗体检测板的袋，取出检测板水平放置于实验台上2） 、用塑料吸管吸 2-3 滴血清标本（ 70-100 微升）加入标本孔中。

3） 、15-30 分钟内观察结果10、结果判断（1） 、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反应2） 、阴性：仅出现质控一条红线，则实验结果为阴性3） 、无效：如无红线（或只有反应线）出现，表明实验无效，须重新检测11、质量控制：阴性对照显示为阴性；阳性对照显示为阳性12、干扰和交叉反应其他体液或混合样品可干扰反应，不可用 EDTA 抗凝的全血血浆13、生物参考区间正常人为阴性14、患者检验结果的可报告区间阴性；阳性15、临床意义： 监测血清或血浆中的 HIV-1 和 HIV-2 抗体，用于帮助检测受感染个体的 HIV-1 和HIV-2 抗体本品检测阳性者，需进一步确证 16、其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有"检定合格" 防伪标签的试剂。