妊娠肝内胆汁淤积症PGI2、TXA2的水平及COX2在胎盘中的表达.pdf

重庆医科大学硕士学位论文妊娠肝内胆汁淤积症PGI、TXA的水平及COX-2在胎盘中 的表达姓名：汤艳红申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：杨锡蒂2003.5.1重垦堕型茎兰堡主兰垡堡壅符号说明I C Pi n t r a h e p a t i cc h o l e s t a s i so fp r e g n a n c y妊娠期肝内胆汁淤积症N L Pn o r m a ll a t ep r e g n a n c y正常晚期妊娠P G I2p r o s t a e y c l i n前列环素T x A 2t h r o m b o x a n e血栓素C O Xc Y c l o o x y g e n a s e环氧化酶T B At o t a lb i l ea c i d总胆汁酸N S Tn o n —s t r e s st e s t无负荷实验C p mc o u n t sp e rm i n u t e每分钟转数R p mr o u n d sp e rm i n u t e每分钟计数P B Sp h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n e磷酸盐缓冲液D A Bd i a m i n o b e n z i d i n e二氨基联苯胺P Gp r os t a g l a n d i n前列腺索P G I Sp r o s t a e y e l i ns y n t h a s e前列环素合成酶SeS e l e n i u m硒2重庆医科大学硕士学位论文妊娠期肝内胆汁淤积症前列环素与血栓素的水平及环氧化酶．2 在胎盘组织中的表达摘要目的本研究通过测定妊娠期肝内淤积症( I C P ) 与正常晚期妊娠( N L P ) 母血、羊水、及脐血中前列环素、血栓素( P G l 2 、ⅨA 2 )的含量及免疫组化研究环氧化酶C O X - 2 在胎盘组织中的表达，探讨P G l 2 、T X A 2 及C O X ．2 在I C P 时的变化意义及其与胎儿预后的关系。

方法随机选择择期剖富产的单胎I C P2 5 例，N L P2 5 例对照分别于剖宫产术前取母血，术时取羊水及脐血用放免法测定P G l 2 、T X A 2 的含量及免疫组化法定性检测胎盘组织中C O X ．2 的表达患者入院后常规检查肝功能指标( 胆红素、转氨酶、胆汁酸等) 常规进行胎儿监护( N S T 监护、脐血流S ／D 比值测定及B 超等) ＼J I _ 萤果I C P 与N L P 母血P G l 2 、T X A 2 水平无明显差异羊水、脐血中P G l 2 水平I C P 组较N L P 组低( P 1 6 0 b p m ；( 5 ) 持续减缓 0 ．0 5与正常妊娠相比较P 0 ．0 5社：与正常妊娠相比较P 0 ．0 5 ) ，而羊水及脐血中T X A 2 水平I C P 组较N L P 组高，二者存在显 著性差异( P 1 ) 3 ．4胎盘免疫组化结果I C P 组与N L P 组各取胎盘标本1 0 例，进行免疫组化染色定性研究C O X - 2的表达其结果显示：I C P 组胎盘和N L P 组相比，光镜下：结缔组织及纤维成分增多，表现出类似肺脏的病理变化。

间质空泡增多，绒毛呈退行性变，出现水肿、纤维素样坏死与有关文献报道一致( 9 ) C O X ．2 在血管内皮细胞、血管平滑肌细胞及绒毛上皮细胞胞浆中染色强阳性而间质中纤维细胞染色强度较弱，绒毛滋养细胞染色不明显N L P 组则无阳性染色其结果判定根据着色程度和分布，用H S C O R E 评分作半定量分析( 1 0 ) H S C O R E = ∑P i ( i + 1 ) ，以P i 代表同一染色范围内阳性细胞所占百分比，变化范围为0 - 1 0 0 ％，i 代表染色强度，以1 、2 、3 分别代表弱、中、强3 个染色强度( 无着色时i ．= o ) ；H S C O R E最大值为4 H S C O R E ( N L P ) = 0 ．2 2 ±0 ．0 9 ：H S C O R E ( I C P ) =9 ．3 5 ±0 ．4 5 ，差别有显著性意义( p o ．0 5 ) 且I C P 时羊水粪染与T X A 2 、P G l 2 存在一定关系，T X A 2 与胎儿体重存在负相关( 产- 0 ．6 6 ) ，而P G l 2 存在正相关( F O ．5 2 ) 与D e k k e r 报道较一致( ”) 。

I C P 组中重度羊水粪染者较轻度者T X A 2 水平升高而P G l 2 降低，( P 1 ) ，而与脐血正相关( 间．8 9 ，r = 0 ．7 7 ) ，胎盘也是羊水P G l 2 、T X A 2 的重要来源2C O X - 2 在I c P 时的变化及意义C O X 是P G 合成的限速酶，目前以知C O X 至少有两种同工酶，即C O X - 1和C O X ．2 ，二者虽结构相似，但生物学活性却有差异，在正常及病理过程中发挥不同的作用C O X - 1 属结构型酶，在多种组织中微量表达，参与维持机体的正常生理功能：C O X - 2 属诱导型酶在正常状态下多数组织不表达，当组织细胞受到刺激因素包括细胞因子、内毒素等作用时C O X - 2 表达迅速上调现知人类血管内皮细胞，平滑肌细胞，绒毛上皮细胞、胃上皮细胞等可表达C O X - 2 本文免疫组化结果显示C O X - 2 主要在I C P 患者胎盘组织绒毛层上皮细胞、血管内皮细胞及血管平滑肌细胞的胞浆中，与P G l 2 的合成部位一致而N L P 胎盘中表达阴性，与相关文献报道一致‘3 ’1 力多项研究表明C O X ．2 与发动分娩、诱发富缩有关。

D e n n e s 在研究中发现C O X - 1 、C O x ．2 在分娩后的羊膜及绒毛膜蜕膜中均见表达，但C O X - 2 对P G合成占主要作用，选择性C O X - 2 拮抗剂可明显减少羊膜P G 的合成，抑制宫缩，认为可能是安胎的方法之一( I ”T h a w o m 等观察到培养妊高征患者脐静脉内皮细胞可见环氧化酶C O X ．1 、C O X ．2 均表达( 正常孕妇只表达C O X ．1 ) ，而P G l 2 合成较正常妊娠者减少表明C O X - 2 影响P G h 的释放，C O X - 2 参与妊高征的发病机制，选择性C O X ．21 8重庆医科大学硕士学位论文抑制剂可能为其治疗方法之一( 1 们w o n g 报道：正常动脉内皮仅表达C O X - 1 ，而在动脉粥样硬化斑块中除C O X ．1 表达外，可见诱导型C O X ．2 表达，且P G l 2合成减少，认为C O X ．2 可能与斑块中P G 的合成改变有关( 1 钔I C P 时引起C O X - 2 阳性表达的原因可能与高水平T X A 2 有关：血小板来源的T X A 2 可选择性激活P 4 4 ，4 2 丝裂原激活蛋白激酶途径以旁分泌的形式上调C O X - 2 的表达( 2 0 ) ，具体机制尚不清楚有待继续研究。

C a u g h e y 在研究P G 与C O X 的关系时发现T X A 2 主要为C O X - 1 的催化产物，而C O X 一2 对T X A 2 的影响不大但C O X - 2 抑制剂可显著抑制P G l 2 的合成说明C O X ．2 对P O l 2 合成密切相关( 2 ”我们的研究发现I C P 患者胎盘组织中C O X ．2 表达，但脐血、羊水中P G l 2水平较N L P 组低，C O X - 2 引起P G l 2 合成减少的机制可能有以下几个方面：1O n o d e r a 在探讨N O 与C O X ．1 、C O X ．2 之间的关系时发现正常生理条件下，动脉内皮细胞只表达C O X - 1 ，而在抑制C O X ．1 及加入内毒素的作用下可诱导C O X - 2 表达在表达C O X ．1 的细胞中，加入N O 的供体及花生四烯酸均不影响P G l 2 的合成，同样条件作用于表达C O X ．2 的细胞，则可见P G l 2 生成减少N O 对P G 的调节主要通过C O X ．1 ／C O X ．2 二者表达的比率，间接影响酶的活性㈤N O 作为促血管扩张的活性物质，在I C P 时生成相对减少㈤，改变C O X - 1 ／C O X - 2 的比率，引起C O X - 2 活性减退，P G l 2 减少。

2L i o u 等在研究C O X 与P G I S 的亚细胞共同区域化机制时发现在分离的小牛主动脉内质细胞中，C O X ．1 与P G I S ( P G l 2 合成酶) 同位于核包膜及内质网中，而在血清中或腺病毒C O X - 2 转染的细胞内质网中也可见到P G I S 与C O X - 2的共区域化表达说明共区域化表达，对P G l 2 合成有重要作用Ⅲ) I C P 时脐血P G l 2 水平下降，可能是因为共区域化C O X ．1 表达下调( 本研究未做) ，或是C O X - 2 阳性表达，改变了c o ) ( ．1 ／C O X ．2 之间的比率，影响了酶的活性，引起合成下降或是存在影响酶活性的物质，如低硒‘功，但具体机制仍待研究3硒是谷胱甘肽酶的活性成分之一，缺硒可引起脂质过氧化物积聚，P O l 2减少及T X A 2 增加( 2 5 ) 刘为民在研究硒( s e ) 和维生素E ( V E ) X 寸大鼠血液流变学、血栓素( T X A 2 ) 、前列环素( P G l 2 ) 的影响时发现：低S e 和低V E 粮饲养可使大鼠红细胞变形’陛、P G l 2 水平降低，红细胞压积、红细胞聚集性、红细胞聚集指数、1 9重庆医科太学硕士学位论文T X A 2 水平、T X A 2 ／P G l 2 比值升高，谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活力降低，脂质过氧化物含量增高提示，S e 和V E 不足可能通过影响P G 合成的关键酶的活性，影响花生四烯酸代谢产物T X A 2 、P G l 2 水平，尤其是影响P G l 2 的合成( 2 6 J 。

国内王竹晨等在研究I C P 时发现其患者体内也存在硒缺乏‘2 n ，缺硒引起P G l 2 合成减少，可能是通过影响C O X - 2 的活·眭，具体机制不清3T B A 与脐血、羊水P G l 2 、T X A 2 及胎儿预后的关系本文的研究结果显示T B A 与羊水粪染、新生儿体重及A p g a r 评分之间无明显相关性，( F 0 ．6 2 9 x 1 0 4 0 c 0 ) ，T B A 与脐血、羊水P G l 2 、T X A 2 相关分析显示二者之间也无相关关系，( r > 1 ) 临床资料也表明T B A 值高者，胎儿体重并不一定低，预后并不差牟一平报道：体外培养红细胞、肝细胞及血管内皮细胞观察胆汁酸对细胞的毒性作用时发现其作用具有浓度及时间依赖性的特点其作用表现在细胞内钙离子超载引起细胞功能异常以及氧自由基的毒性作用等( 2 a ) I C P 患者血浆中总胆汁酸浓度升高，血清初级胆酸中比例异常，胆酸比例升高，而鹅脱氧胆酸比例下降，引起二者比例异常( 2 9 ) M a r t i n 等报道：不同浓度胆汁酸在不同时间对人红细胞的毒性作用中胆酸的细胞毒性作用是较微弱的( 抽。

因I C P 时主要以胆酸升高为主，故对细胞的毒性作用较差，对红细胞携氧能力及血管收缩舒张功能影响较小，可能是T B A 与羊水粪染、新生儿体重、A p g a r 评分及与脐血、羊水P G l 2 、T X A 2 无相关性的原因小结我们的研究表明I C P 组患者胎盘中存在血管内皮系统的功能紊乱，脐血及羊水中高T X A 2 及低P G l。