HPLC法测定二氯醋酸二异丙胺含量.doc

1HPLC 法测定二氯醋酸二异丙胺含量【关键词】 高效液相色谱法；二氯醋酸二异丙胺；含量测定［摘要］ 目的：建立 HPLC 法测定二氯醋酸二异丙胺的含量方法：采用 Zorbax SBC18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm） ，以 1.0 mmol/L 四丁基溴化铵溶液（用氨水调 pH 至 7.2）乙腈（72∶28）为流动相，流速为 1.0 mL/min，检测波长为 207 nm结果：二氯醋酸二异丙胺在 0.5～1.5 mg/mL 浓度范围内线性关系良好（r=0.9999） ，日内和日间精密度分别为0.80%、1.05%，平均回收率为 99.1%，样品经破坏的降解产物和二氯醋酸二异丙胺分离度良好结论：本法简便、专属性强，可用于二氯醋酸二异丙胺的含量测定［关键词］ 高效液相色谱法；二氯醋酸二异丙胺；含量测定Determination of diisopropylamine dichloroacetate with HPLC［Abstract ］ Objective:To establish an HPLC method to determine the contents of diisopropylamine dichloroacetate. Methods: Zorbax SBC18 column (250 2mm×4.6 mm, 5 μm) was used. The mobile phase was consisted of 1.0 mmol/L tetrabutylammonium bromide solution (adjusted pH to 7.2 with ammonia water)acetonitrile (72∶28). The flow rate was 1.0 mL/min. And detection wavelength was set at 207 nm. Results: The calibration curve of diisopropylamine dichloroacetate was linear in range of 0.5～1.5 mg/mL. The RSD of intraday and interday assays was 0.80% and 1.05%, respectively. Satisfactory separation between diisopropylamine dichloroacetate and its main degradation product was obtained. Conclusions: The method is convenient, selective and effective for determination of diisopropylamine dichloroacetate.［Key words］ HPLC; Diisopropylamine dichloroacetate; Quantitative determination二氯醋酸二异丙胺是维生素 B15 的活性成分，有改善肝功能、调节血脂代谢的作用［1］ 。

二氯醋酸二异丙胺主要用于治疗各种疾病引起的肝功能障碍，可用于治疗非酒精性脂肪性肝病者［2］及并发高脂血症者［1］ 已有文献报道可用 GC 法测定二氯醋酸二异丙胺尿药浓度3［3］ ，但是二氯醋酸二异丙胺的沸点较高，该方法对气相色谱柱损害较大，普通实验室难以普及，而有关物质和含量测定的 HPLC 法则未见报道本研究建立了二氯醋酸二异丙胺含量测定的 HPLC 法，并进行了方法学评价结果表明，该方法分离度好、灵敏度高、专属性强，可用于二氯醋酸二异丙胺质量控制1 仪器与试药Agilent 1100 高效液相色谱仪，包括紫外检测器和 Chem Stations 化学工作站（安捷仑科技有限公司） 二氯醋酸二异丙胺，批号：040214 （北京双鹤药业） ；二氯醋酸二异丙胺对照品（美国Sigma 公司，含量 99.8%） 乙腈为色谱纯（ Merck 公司） ，水为重蒸水，其他试剂均为市售分析纯2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Zorbax SBC18（250 mm×4.6 mm，5 μm） ；流动相：1.0 mmol/L 四丁基溴化铵溶液（用氨水调pH 至 7.2）乙腈（72∶28） ；检测波长：207 nm；流速：1.0 mL/min；进样量： 20 μL。

2.2 线性范围取二氯醋酸二异丙胺对照品约 0.5 g，精密称定，4置 50 mL 量瓶中，加流动相适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述溶液 0.5、0.8 、1.0、1.2、1.5 mL 置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度并摇匀，照色谱条件测定以峰面积（A）为纵坐标，样品浓度（C）为横坐标，进行线性回归，本品在0.5～1.5 mg/mL 浓度范围内呈良好线性关系，回归方程为A=9.98×102C+3.52，r=0.99992.3 回收率试验取二氯醋酸二异丙胺对照品约 60 mg、90 mg 和 140 mg 各三份，精密称定，分别置 100 mL 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，照色谱条件测定，将测得的峰面积代入标准曲线得测得量，计算回收率，得平均回收率为99.1%（RSD=0.30% ，n=9 ） 2.4 精密度和检测限称取二氯醋酸二异丙胺适量，用流动相溶解配成 1.0 mg/mL 的 6 份平行溶液，连续进样测定，考察日内精密度；连续测定 3 天，考察日间精密度测得日内和日间精密度RSD 分别为 0.80%（ n=6）和 1.05%（n=3） 采用 0.5 mg/mL 的标准溶液逐级稀释，以信噪比（S/N=3）测得二氯醋酸二异丙胺检测限为 10 μg/mL。

2.5 破坏试验为考察样品在不同条件下降解产物对方法的影响，分别将本品于 130 ℃高温烘烤 4 h，强光 5 000 lx 照射 5 d，用 0.1 mol/L 的 HCl 溶液、0.1 mol/L 的 NaOH 溶液和 10％H2O25溶液在 100 ℃加热 1 h 破坏，以同法处理的相应溶剂作对照，测定经破坏后的样品溶液的色谱图，见图 1结果表明，在高温、光照、酸、碱和氧化剧烈条件下破坏产生的产物和二氯醋酸二异丙胺分离度良好，不影响本品含量测定图 1 略2.6 空白溶剂干扰试验本法用流动相配制测定溶液，故以流动相为空白，色谱图见图 2结果表明，空白溶剂不存在干扰图 2 空白溶剂色谱图　略2.7 样品测定精密称取二氯醋酸二异丙胺适量，加流动相配制成 1 mg/mL 的溶液，作为供试品溶液；另精密称取对照品适量，加流动相配制成 1 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液按上述色谱条件检测，记录峰面积，按外标法计算含量测得二氯醋酸二异丙胺含量为 99.2%，归一化法计算有关物质为 0.75%用二氯醋酸二异丙胺国家标准［3］即滴定法作为对照，测得供试品的含量为 99.3%，说明本方法可用于二氯醋酸二异丙胺的质量控制。

3 讨论6由于二氯醋酸二异丙胺极性较大，水溶液显弱酸性，在 C18柱上基本上无保留，参考有关文献［4］ ，可以在流动相中加入四丁基季铵盐进行分离我们选用四丁基溴化铵为离子对试剂后，色谱图中主峰保留时间在 7 min 左右，能实现样品和杂质的分离根据文献［4］ ，选用 pH 为 7.5 左右的流动相最为合适经过实验，当pH 值低于 7.0 时，出峰时间短于 2 min，说明主峰未与离子对试剂结合；当流动相 pH 值为 8.0 时，色谱图和 pH 为 7.5 时基本一致但是 C18 柱的 pH 耐受范围一般在 3～8，为了避免对色谱柱造成不必要的损害，我们在稍低于 7.5 的 pH 条件下进行了实验有文献报道用 GC 法测定二氯醋酸二异丙胺的含量［5］ ，但未见 HPLC法测定其含量的报道本文建立了 HPLC 测定二氯醋酸二异丙胺的方法，经破坏试验表明，样品的降解产物与主药二氯醋酸二异丙胺能完全分离，该方法可用于二氯醋酸二异丙胺的含量测定参考文献：［1］ 王 哲, 周长玉, 李晓莉. 二氯醋酸二异丙胺治疗非酒精性脂肪性肝炎的临床观察［J］. 深圳中西医结合杂志, 2003, 13(6):373375.［2］ 陆伦根, 曾民德, 茅益民, 等 . 二氯醋酸二异丙胺治疗7非酒精性脂肪性肝病的随机双盲临床研究［J］. 中华肝脏病杂志, 2005, 13(2): 9295.［3］ 国家药品标准, 化学药品［S ］. 第十四册. WS10001(HD1319)2003.［4］ 孙毓庆 . 分析化学(下册) ［M］. 第四版. 北京: 人民卫生出版社, 1999: 279280.［5］ 蔡素芳, 肖永红, 余泽波. 顶空气相色谱法测定二氯乙酸二异丙胺尿药浓度［J］. 重庆医科大学学报, 2004, 29(1): 108112.。