茶多酚的提取.docx

茶多酚的提取、精制工艺及产品中茶多酚的定量分析【实验目的】1、了解茶多酚的性质及用途；2、了解植物天然产物常规提取和精制的方法3、掌握茶多酚提取与精制的原理和方法；4、掌握茶多酚的分析检测方法实验材料和仪器】1、仪器电动搅拌器 离心机 酸度计 真空干燥箱 抽滤瓶 真空蒸发浓缩装置 水环式真空泵 电子天平 水浴锅 紫外分光光度计 电热恒温干燥箱 分液漏斗 微量吸管器2、试剂氯化钠 碳酸氢钠 柠檬酸 硫酸铝 盐酸 亚硫酸氢钠 乙酸乙酯 维生素 C 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 硫酸亚铁 酒石酸钾钠 硫酸 没食子酸丙酯I、工艺过程及操作方法【实验原理】茶多酚是茶叶中 30 多种多酚类物质的总称，是一类富含于茶叶中、主要由 表儿茶素、表没食子儿茶素及没食子酸酯类等组成的多羟基化合物，含量约占茶 叶干物质总量的20%〜30%茶多酚分子中带有多个活性羟基(-OH),可终止人 体中自由基链式反应，清除超氧离子，类似 SOD 之功效茶多酚对超氧阴离子 与过氧化氢自由基的清除率达 98%以上,呈显著的量效关系,其效果优于维生 素E和维生素C茶多酚还有抑菌、杀菌作用，能有效降低大肠对胆固醇的吸收， 防治动脉粥样硬化，是艾滋病毒(人类免疫缺陷病毒，HIV)逆转录酶的强抑制物， 有增强机体免疫能力，并具抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、防衰老机理。

茶多酚安全、 无毒，是食品、饮料、药品及化妆品的天然添加成分目前茶多酚已在医药、饮 料、食品、保健等行业中广泛应用由于茶多酚易溶于热水，因此本实验首先用热水在一定温度下将茶多酚从茶 叶中提取出来；然后对茶叶浸提液盐析处理除去部分杂质；再利用某些金属离子 与茶多酚形成的络合物在一定pH值下溶解度最低的特性，将茶多酚从浸提液中 沉淀出来并高效地与咖啡碱等杂质分离；经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后，用 对茶多酚具有很好选择性的有机溶剂再次对其进行萃取分离；最后将茶多酚萃取 液通过真空浓缩、真空干燥得到茶多酚精品实验步骤】1、 浸提：称取一定重量过20目的茶叶末，加入其重量20倍的70°C〜95°C的热 水，搅拌下恒温浸提60min，过滤得茶叶浸提液取样分析浸提液中茶多酚的含 量，计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率2、 盐析：加氯化钠于茶叶浸提液中，使其质量分数为6%，静置盐析1.5h后过 滤3、 沉淀：在上述滤液中加入茶叶重量2%〜5%的NaHSO3，然后加入茶叶重 量20%的硫酸铝饱和水溶液，加热至70°C〜80 °C,用15%NaHCO3溶液在快 速搅拌下调节 pH 至 5〜6，此时有大量沉淀析出，沉淀自然沉降一段时间后过滤， 最后用等体积70 C热水洗涤沉淀三次。

4、 酸溶：将沉淀在快速搅拌下放入到茶叶重量3倍的pH=2.5〜4.5的盐酸水溶 液中溶解沉淀，控制酸转溶液的pH=2.5〜4.5,酸溶时间50min,少量胶状沉淀 经离心分离除去取样分析计算酸转溶液中茶多酚的含量和总量，计算茶多酚经 过盐析、沉淀及酸溶后的回收率5、 萃取：加入茶叶重量 3%的 NaHSO3 至酸转溶液中，然后用其体积 0.5 倍的 乙酸乙酯萃取3次，每次萃取时间为10min,合并萃取液取样分析计算萃余相 中茶多酚的总量，计算茶多酚的萃取率6、 洗涤：加入茶叶重量2%的维生素C至萃取液体积0.4倍的水中，用柠檬酸 调节水溶液的pH=2.5〜3.0，等分成二份对乙酸乙酯萃取液洗涤两次7、 蒸发浓缩：将洗涤后的乙酸乙酯相在50C〜70 C下真空蒸发回收乙酸乙酯， 待浓缩成膏状物时，加入膏状物2倍体积的无水乙醇洗涤挂在壁上的物料，继续 浓缩成稠的膏状物8、 干燥：将膏状物放入真空干燥箱中，在60C〜90°C下进行真空干燥，在前1〜 2h 内，将物料搅动几次，当物料干燥成粉状或干的块状时，结束干燥干燥时 间一般 4〜8h9、 包装保存：将干燥好的茶多酚产品转移至自封塑料袋中，称重、取样后立即 密封，置入棕色玻璃干燥器中于低 （室） 温下避光保存。

产品取样用于分析产品 中茶多酚含量，计算出茶多酚的最终得率II、提取精制过程中及产品中茶多酚含量的分析检测方法（一）、提取精制过程中茶多酚含量的分析检测【实验原理】在一定pH值条件下，酒石酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫色络合物，该 络合物在 540nm 波长下具有最大吸光度在适当的浓度范围内，茶多酚的含量 与络合物的吸光度成正比，符合朗伯－比尔定律，因此可用分光光度法对茶多酚 定量分析实验材料及步骤】1、 酒石酸亚铁溶液：称取1g （准确至0.0001g）硫酸亚铁和5g （准确至0.0001g） 酒石酸钾钠，用水溶解并定容至1L （此液放置过夜后使用，可稳定1星期）2、 pH=7.5的磷酸盐缓冲液：a液（1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液）：称取磷 酸氢二钠23.877g，加水溶解并稀释至1L；b液（1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液）：称取经110°C烘干2h的磷酸二氢钾9.078g， 加水溶解并稀释至 1L取a液85mL和b液15mL混匀，即得pH=7.5磷酸盐缓冲溶液3、 供试液的制备与测定：准确吸取待测溶液1mL，将其稀释1〜25倍，再 从稀释液中准确吸取1mL，注入25mL的容量瓶中，加水4mL和酒石酸亚铁 溶液5mL，充分混合，再加pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液至刻度，用1cm比色杯， 在波长 540nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。

实验结果】待测溶液中茶多酚的含量用下式计算：茶多酚（g/mL） =1.957AX/500式中 1.957 ——用 1cm 比色杯，当吸光度等于 0.50 时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于 1.957mg；A ——试样的吸光度X —— 待测溶液的稀释倍数 m 酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量（见《生物分离工程实验》P128~129）。