药物分析课件版第六章 杂质检查-二 20151020.pptx

第六章 药物的杂质检查（二）四、重金属检查法重金属在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等在药品生产过程中遇到铅的机会较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅为代表ChP2015 收载三种检查方法第一法 硫代乙酰胺法第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法第三法 硫化钠法 条件： 介质质：醋酸盐缓盐缓 冲液 (pH 3.5) 2ml 试剂试剂 ：硫代乙酰酰胺(CH3CSNH2) 2ml 杂质对杂质对 照液：Pb(NO3)2 (10g/ml) 灵敏度范围围： 1020 g / 27ml黄色至棕黑色混悬液注意： 供试试品有色：加有色溶液或改用第二法 含微量高铁盐铁盐 ：加Vc 供试试品为铁盐为铁盐 ：除去 供试试品能形成不溶性硫化物：加掩蔽剂剂第一法 硫代乙酰胺法第一法 硫代乙酰胺法（1）供试品有色：可采用外消色法消除干扰标准溶液稀焦糖溶液标准溶液调色后的样品溶液检查3. 干扰的排除 （2）供试品中有微量 Fe3+H2SFe3+弱酸性S混浊对比色有影响排除 Fe3+Fe2+ Vc或盐酸羟胺 干扰（3）供试品为铁盐（大量的Fe3+） Fe3+在HCl溶液中能形成配位化合物用乙醚提取 Fe3+HCl HFeCl62-（黄色）水层加氨试液调至碱性,残存的Fe3+可用KCN掩蔽, 按第三法检查. 适用于含芳环、杂环及难溶于水、稀酸及乙醇，需炽灼破坏，在酸性溶液中显色的有机药物。

第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法 原理：重金属可能会与芳环、杂环形成较牢固的价键， 需先将供试品炽灼（ 500600 ）破坏，残渣 加硝酸进一步破坏，蒸干加盐酸转化为易溶 于水的氯化物，再按第一法进行检查 第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法 2. 第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法 缓缓炽缓缓炽 灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供试试品 炭化 加热热 HNO3 500-600H2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干 HCl 2ml 水15ml 中性 按第一法检查检查 蒸干 氨试试液注意：炽炽灼温度；硝酸蒸干；其他试剂试剂 干扰扰（做空白试试验验）；含钠盐钠盐 或氟的有机药药物（铂铂坩锅锅或硬质质玻璃） 炽灼温度应在500600温度过高，重金属损失 加硝酸加热处理后，必须蒸干，除尽氧化氮， 否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色 消除盐酸或其他试剂中可能夹杂重金属的影响 对于含钠盐或氟的有机药物，应用铂坩埚或硬质玻璃 蒸发皿注意事项 原理：在碱性条件（NaOH）下用硫化钠作显色剂Pb 2 S2- PbS 第三法 硫化钠法 适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物硫化钠试液应临用新制。

五、砷盐检查法 砷盐是剧毒物质，多由药物生产过程中所使用的无机溶剂引入中药中残存的三价砷盐毒性极强，可引起严重的中毒症，危害生命安全 ChP JP USP BP 古蔡氏法 Ag-DDC法 次磷酸法 各国药典砷盐检查法比较 1. 原理As3+3Zn3H+3Zn2+AsH3AsO33-3Zn9H3Zn2+3H2OAsH3AsH33HgBr23HBrAs(HgBr)3(黄色)2As(HgBr)3AsH33AsH(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3AsH33HBrAs2Hg3(黑色)AsO43-4Zn11H+4Zn2+4H2OAsH3（一）古蔡(Gutzeit)氏法 古蔡氏法检砷器8cm有孔玻璃旋塞导导气管AsH3发发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)HCl Zn 粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液生成砷斑吸收硫化氢气体（1）验砷仪2. 装置与试剂作用（1）验砷仪样品 对照 2操作加锌粒2g, 立即将装妥的导气管 B 密塞与 A 瓶, 置25-40 水浴中, 反应45分钟, 取出溴化汞试纸, 比较砷斑. 导气管B中装入醋酸铅棉花(60mg,60-80mm)再于旋塞C的平面上放一片溴化汞试纸样品、对照品分别置于检砷瓶中, 加盐酸5ml与水21ml, 再加2.5%碘化钾试液5ml 与0.3%酸性氯化亚锡试液5滴, 在室温放置10分钟 KI-SnCl2试液AsO43-2I-2H+AsO33-I2H2OAsO43-Sn2+2H+AsO33-Sn4+H2OI2Sn2+2I-Sn4+4I-Zn2+ZnI42-有利于H3As的形成 Zn粒与氯化亚锡在锌粒表面形成Zn-Sn齐，起去极化的作用，有利于H2均匀连续发生。

1.KI的作用还原剂：As5+As3+ 五价砷生成AsH3的反应速度比三价砷速度慢, 加入 KI 使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应,以增大AsH3的生成速度.2.酸性SnCl2的作用-还原剂(表现在3方面). 将五价砷还原为三价砷(As5+As3+). 将KI被氧化生成的I2再还原为I-. SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐 KI-SnCl2试液还可抑制SbH3生成（锑斑） Pb(Ac)2棉花-排除硫化物的干扰S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgSH2S + Pb(Ac)2 2HAc + PbS （留在棉花上，不干扰结果） HgBr2试纸的作用-与AsH3作用生成砷斑反应最佳条件a. Zn粒（无砷锌）的大小及用量 大小：能通过1号筛（8502000m） 用量：约2g.b. 标准砷溶液 三氧化二砷配制 标准砷斑：取2 ml (1 g /mlAS) 3. 干扰的排除供试品为S2-、SO32-、S2O32-S2-、SO32-、S2O32-H2SSO42-H+HNO3干扰砷斑检查 除去干扰 HgBr2试纸HgS, Hg（黑色）氧化 例:解毒药硫代硫酸钠中 砷盐的检查 供试品为铁盐 （Fe3+）干扰：消耗KI、SnCl2，氧化AsH3排除：可以先加足量的KI或先加入酸性氯化亚锡试 液，将Fe3+还原为Fe2+。

例：枸橼酸铁铵中砷盐检查 标准砷斑As2O3标准溶液（ug/ml）2ml 盐酸5ml 水21ml， KI试液5ml SnCl2试液5d Zn(2g)25-40水溶液45min取出溴化汞试纸 样品砷斑 药物（含AS） 盐酸5ml 、水适量 KI试液5ml SnCl2试液5d Zn(2g)25-40水溶液45min取出溴化汞试纸 比较砷斑深浅,判断注意:导管C中装有醋酸铅棉花，旋塞D上端有HgBr2试纸方法步骤：含锑药物 SbH3 + HgBr2 SbH2(HgBr) + HBr（灰色锑斑）改用白田道夫白田道夫(Betterdorff)法干扰：排除:白田道夫白田道夫法 2As3+ 3SnCl2+ 6HCl2As+ 3SnCl4 + 6H (棕褐色的胶态砷 )与一定量标准砷溶液用同法处理后的颜色比较 干扰砷斑检查 共价键结合的砷化物，环状药物须进行有机破坏： 碱破坏法 样品加Ca(OH)2小火灼烧，再于500 600炽灼至完全灰化 碱融破坏法 适用于环状结构的有机酸碱金属盐用 石灰法不能破坏完全的情况以无水 Na2CO3进行碱融破坏 酸破坏法环状药物 例：苯甲酸钠中砷盐检查 （二）二乙基二硫代氨基甲酸银法 （Ag-DDC法）1. 原理 利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的银还原为红色胶态银，以Ag-DDC溶液为空白，于510nm的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大于标准砷溶液的吸收度。

二乙基二硫代氨基甲酸银结构：（红色） 试剂的作用：同古蔡法2. 装置与试剂作用有机碱：吡啶（USP法） 三乙胺-氯仿溶液（ChP法） 三乙醇胺、麻黄碱等 本反应可逆，加入有机碱使与HDDC结合，有利于反应向右定量进行完全 六、溶液颜色检查法有色杂质Ch.P采取三种检查方法：目视比色法：药物溶液的颜色标准比色液的颜色 标准比色液：比色用重铬酸钾、硫酸铜、氯化钴+水分光光度法 某波长处的吸收度色差计法药物溶液的三刺激值（在给定的三色系统中与待测色达到色匹配所需要的三个原刺激量）与水之间的色差值第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法七、易炭化物检查法含义义：药药物中易被硫酸（含硫酸94.5%-95.5%，g/g）炭化或氧化而呈色的有机杂质杂质检查检查 方法：目视视比较较法 供试试品炭化后，与对对照液（视视品种而定）目视视比较较 对对照液：溶液颜颜色检查项检查项 下的不同色调调的标标准比色液 比色用氯氯化钴钴、重铬铬酸钾钾、硫酸铜铜配成 高锰锰酸钾钾液八、溶液澄清度检查法含义义：检查药检查药 品溶液的浑浊浑浊 程度意义义：反映药药物中微量不溶性杂质杂质 的存在情况，反映药药 品的质质量和生产产工艺艺水平。

方法：Ch.P 比浊浊法药药典中澄清的定义为义为 ：供试试品溶液的澄清度相同于所用的溶剂剂，或不超过过0.5号浊浊度标标准液浊浊度标标准液：乌乌洛托品在偏酸性条件下水解产产生甲醛醛， 甲醛醛与肼缩肼缩 合，生产产不溶于水的甲醛腙醛腙 白色浑浑 浊浊，以不同量的水稀释释可得不同浊浊度的标标准液注意事项项：光线线及温度、不同药药品溶剂剂会不同第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法九、炽灼残渣检查法炽灼残渣（residue on ignition）：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐方法：1.02.0 g供试品 炽灼至恒重的坩锅 精密称定 缓缓炽灼至完全炭化 防冷至室温 加硫酸0.51ml 低温除去硫酸 700800炽灼完全灰化 移置干燥器 放冷至室温后精密称定 700800炽灼至恒重炽灼温度：Ch.P 700800 USP 80025 BP 800 JP 450550第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法12 mg0.1%0.2%炽灼残渣检查法注意点1、操作及称重方法： 1）坩埚要事先恒重，精密称定，所得的残渣要恒重； 2）坩埚应斜置，防止暴沸和溅出； 3）有机药物在坩埚中加热开始时应缓缓加热，加入硫酸后也应缓缓加热，防止药物暴沸、溅出和硫酸腐蚀; 4）坩埚炽灼后要放于干燥器中冷却后称重。

2、如供试品为重金属，炽灼温度应为500-600C，防止重金属逸失3、药物的炽灼残渣限量一般为0.1%-0.2%（1g供试品不超过1-2mg）含氟药物用铂坩埚第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法十、干燥失重测定法第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量 用于检查药物中的水分及其他挥发性物质恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下干燥至恒重的第二次及以后每次称重都应在规定的条件下继续干燥1h后进行）十一、水分测测定法（卡尔费费休法）第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法A供试试品消耗的Fisher试试液的体积积B空白消耗的Fisher试试液的体积积F每1ml Fisher试剂试剂 相当于水的重量(mg)W供试试品的重量指示终点方法：Fisher试液颜色 淡黄色红棕色永停法十二、残留溶剂测定法 主要检查在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去有机溶剂第一类：应该避免使用第二类：应该限制使用第三类：GMP或其他质控要求限制使用第四类：尚无足够毒理学资料 ChP规定采用GC法第一法：毛细管柱顶空进样等温法 适用于所需要检查的有机溶剂数量不多，并且极性差异较小的情况。

第二法：毛细管柱顶空进样程序升温法 适用于所需要检查的有机溶剂数量较多并且极性差异较大时的情况第三法：溶液直接进样法 采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱 一）测定方法 色谱柱类型固定液/固定相毛细管柱非极性100的二甲基聚硅氧烷极性聚乙二醇（PEG-20M）中极性(35%）二苯基-（65%）甲基聚氧硅烷，（50%）二苯基-（50%）二甲基聚氧硅烷，（35%）二苯基-（65%）二甲基亚芳基聚氧硅烷（14%）氰丙基苯基-（86%）二甲基聚氧硅烷（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚氧硅烷弱极性（5%）苯基-（95%）甲基聚氧硅烷，（5%）二。