琼脂糖凝胶电泳检测DNA.doc

琼脂糖凝胶电泳检测DNA(agarosegelelectrophoresis)目的和要求学习和掌握琼脂糖凝胶电泳的原理和基本操作实验原理1. 琼脂糖凝胶电泳是最常用的鉴定DNA的方法，基本原理与蛋白质电泳相似：简便易行，只需少量DNA2. 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度3. DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时具有电荷效应与分子筛效应，迁移速率与其相对分子质量的对数反相关4. 琼脂糖凝胶中的DNA可利用荧光染料GoodView染色并在在紫外灯照射下观察主要试剂和器材一、试剂50xTAE缓冲液（pH8）；凝胶上样缓冲液（0.2%溴酚蓝，50%蔗糖）GoodView（溴化乙锭EB替代物）；琼脂糖二、器材电泳仪、水平电泳槽、紫外检测仪基本操作方法1. 琼脂糖凝胶制备：称取0.45g琼脂糖，放入锥形瓶中，加入30mlTAE缓冲液，保鲜膜封口，置微波炉加热至完全澄清透明取出摇匀（琼脂糖浓度为1.5%）；待凝胶溶液冷却至50°C（不烫手），加入3mlGoodView（终浓度0.5€g/ml）2. 凝胶板制备：用制胶器将紫外透光凝胶盘固定好，采用水平仪调整平衡使凝胶盘位于同一水平面；将适宜的梳子垂直架在凝胶盘内槽的一端；将冷却至50C的琼脂糖凝胶缓缓倒入凝胶盘内槽，厚度适宜（不要有气泡）3.点样待凝胶凝电泳缓冲液取5微器将其加入加4.电泳：接通电泳槽与电泳仪的电源，调节电压90V,当溴酚蓝染料移动到距凝胶前沿l-2cm处，停止电泳5.观察：在紫外灯下观察凝胶，有DNA处应显出荧光条带，记录电泳结果注意事项：1. 倒胶时把握好胶的温度，不要高于60°C，否则温度太高会使凝胶盘变形2. 胶一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要竖直向上，不要弄坏点样孔3. 点样时枪头下伸，点样孔内不能有气泡思考题在电场中的迁移率取决于哪些因素？。