苏微玉米赤霉烯酮免疫亲和柱使用说明书.docx

苏微玉米赤霉烯酮免疫亲和柱使用说明书【产品用途】苏微玉米赤霉烯酮（ZEN）免疫亲和柱适合于和ZEN酶 免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测ZEN适用 于谷物、粮油、食品、饲料等样本中的 ZEN 净化处理，提高 了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定 【产品性能】柱吸附能力：三lOOng/支；回收率： 75%~90%柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶 特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，玉米赤霉烯酮（ ZEN） 单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的ZEN经过提取、 过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过ZEN免疫亲和柱， 在免疫亲和柱内， ZEN 与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱 除去未被结合的杂质最后采用甲醇洗脱ZEN，然后进行相 关分析产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支说明书 l 份；【所需材料】（不提供）（ 1 ）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器 （18000r/min〜22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移 液器（lOO^L〜lOOO^L）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径 11cm，孔径1.5gm）、20mL玻璃注射器等。

2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、 pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水样品制备及净化】（1）谷物（玉米、小麦等）----准确称取40.0g粉碎的样品，加入4.0g氯化钠，----与100.0mL乙腈-水溶液（9+1）或甲醇-水（8+2）混合， 以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用快速定性滤纸过滤，----准确移取10mL滤液并加入40mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用准确移取10.0mL混匀液进行过亲和柱2） 酱油、醋、酱及酱制品----准确称取25.0g样品到100容量瓶中，----加入乙腈（或甲醇）定容至100mL，超声提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用准确移取10.0mL混匀液进行过亲和柱3） 酒类----准确称取不含二氧化碳的酒类试样20.0g样品，加入乙腈（或甲醇）定容至50 mL，----用定量滤纸过滤，----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

准确移取10.0mL混匀液进行过亲和柱注：含二氧化碳的酒类取样前先置于4°C冰箱冷藏30min， 过滤或者超声脱气4） 大豆、油菜籽及植物油----准确称取40.0g样品，加入4.0g氯化钠，----加入乙腈-水（9+1）或甲醇-水（8+2） 100.0mL，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取10.0mL滤液加入40.0mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱5） 饲料----准确称取40.0g粉碎的样品于250mL具塞锥形瓶，加 入4.0g氯化钠，----与100.0mL乙腈-水溶液（9+1）或甲醇-水（8+2）混合,以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取60min，----用定量滤纸过滤，----准确移取10.0mL滤液并加入40.0mLPBS稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用准确移取10.0mL混合液进行过亲和柱亲和柱净化】7.4注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！一将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上； 0.1%的吐温20-PBS溶液：----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，用5〜10mL pH7.4 取pH7.4的PBS溶液1L,加入lOOuL吐温。

磷酸盐缓冲液（PBS）或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度通过免疫亲和柱，样品提取液必须缓慢地连续地通过柱子（用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合免疫亲和柱）；----准确移取混匀提取液注入注射器中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱；----先用10mL 0.1%的吐温20-PBS溶液清洗，再用10mL 10%甲醇-水清洗，（主要针对酱油、醋、饲料等颜色较深的样品，其他可略去）；一用20mL水冲洗柱子，弃去流出液，流速2滴/秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体；----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体收集全部 洗脱液待测注意事项】（1） 玉米赤霉烯酮对人体有害，应戴手套操作凡接触到标 样的玻璃器皿都要用 5%次氯酸钠浸泡过夜2） 不要使用过有效期的免疫亲和柱3） 免疫亲和柱应在2~8£保存不要冷冻4） 便用前，免疫亲和柱需至少提前半小时冋温至室温（25°C左右）5） 按以上的提取过程，样品通过柱子的实际体积等于0.8g原物质，分析方法的检测限可以通过改变进柱的样品体积而改变。

6） 称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议最低不少于5g样7） 玉米赤霉烯酮对光线敏感，因此样品及其提取液应当低温（2〜8°C）、避光保存保存期】有效期为 12 个月生产日期见包装盒缓冲溶液配制】pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）：准确称取8g氯化钠、1.16g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾，溶解至1L水中，用0.2M氢氧化钠溶液调节pH至。