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药物分析设计性实验综述维生素C及其制剂的含量测定 年　４　月摘要：本文简要简介了维生素C的构造、性质，详述了维生素C的鉴别及含量测定的措施,如滴定分析法,分光光度法，电极法,薄层色谱法和高效液相色谱法等，并讨论多种措施的优缺陷核心词:维生素C;鉴别；含量测定；前言:维生素C作为维持机体正常生理功能的重要维生素之一，不仅广泛参与机体氧化、还原等复杂代谢过程，还能增进体内胶原蛋白和粘多糖的合成,增长机体抵御力缺少时可引起造血机制障碍、贫血、微血管壁通透性增长,脆性增强，容易出血等坏血病症状,故其对人体健康有着重要的意义维生素C是一种酸性己糖衍生物,具有烯醇式己糖内酯立体构造,分Ｄ和L两种立体构型,但只有L型有生理功能维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变,两者均具有生物活性其Ｃ2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出Ｈ＋,故维生素Ｃ虽然不含自由羧基,仍具有有机酸的性质维生素C呈无色无臭的片状结晶体，易溶于水,不溶于脂在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可增进其破坏速度维生素ｃ的剂型重要有片剂、颗粒剂、泡腾剂、注射剂等维生素C分子构造图1　鉴别鉴别措施有:与氧化剂反映、薄层色谱法、紫外光谱法、红外光谱法等，本综述只讲述其中具有代表性的两种。

1.1与硝酸银反映:: 除维生素Ｃ钙、维生素C钠、维生素注射液、维生素C银翘片，其他制剂均可用此措施 １.1．1原理维生素Ｃ与硝酸银发生氧化还原反映,产生黑色金属银沉淀１．1.２措施取维生素C 0.2 g,加水１0 mL溶解取该溶液５ mL，加硝酸银试液0.5 ｍL，即生成金属银的黑色沉淀 1.2与二氯靛酚钠反映　:除维生素C注射液和维生素C钠制剂，其他均可用此措施1.2.1原理2，６-二氯靛酚是一种染料,其氧化型在酸性介质中呈玫瑰红色，在碱性介质中显蓝色，与维生素C反映后生成还原型无色的酚亚胺 1.２．2措施(1）取维生素Ｃ 0.2 ｇ,加水10 ｍＬ溶解取该溶液5 mL，加二氯靛酚钠1～2滴，试液的颜色即消失 （２)取维生素C银翘片10片，除去糖衣，精密称定,研细，混匀，充足研磨，精密称定适量(约相称于维生素C ０.2 ｇ)，置10０ mＬ量瓶中,加新煮沸的冷开水1０ mL、稀醋酸10 mL，振摇使充足溶解,用水稀释至刻度，摇匀滤过,取续滤液适量,用氨试液调节pH至中性，加入适量活性炭（每30mL续滤液中加0.５ ｇ活性炭），加热至沸,滤过取二氯靛酚钠试液数滴置点滴板，滴加滤液数滴,试液的蓝色即消退。

2 含量测定 维生素C及其制剂的含量测定措施有：滴定分析法、分光光度法 、高效液相色谱法、电极法、薄层色谱法等2.1滴定分析法 滴定分析法中有碘量法、2,6- 二氯吲哚酚滴定法、铁(Ⅲ)置换氧化还原滴定法 、库仑滴定法 、氢氧化钠两点电位滴定法等其中碘量法操作简朴较为广泛使用,并被中国药典收录为维生素C的含量测定措施2.１.1碘量法 ＣhP采用本法对维生素C原料、片剂、颗粒剂、泡腾颗粒剂、泡腾片、注射剂及维生素C银翘片进行含量测定为消除辅料对测定的干扰，滴定前要进行必要的解决如片剂溶解后应滤过,取续滤液测定;注射液测定前应加丙酮２ ｍL,以消除抗氧化剂亚硫酸氢钠对测定的影响 (1）取维生素C原料药约0．2ｇ,精密称定，加新沸过的冷水100 mL 于稀醋酸1０ mL 使溶解, 加淀粉批示液l ｍL , 立即用碘滴定液（0.0５ mol /L ）滴定，至溶液显蓝色并在30秒钟内不褪， 每ｌ mL碘滴定液（０. 05 mol /Ｌ ) 相称于8.806 ｍ ｇ 的Ｃ6Ｈ8O６2)取维生素C片20片，精密称定,研细，精密称取适量(约相称于维生素Ｃ 0.2 ｇ),置10０ mL量瓶中，加新沸过的冷水1０0 mL与稀醋酸１０ mL的混合液适量，振摇使维生素C溶解并稀释至刻度,摇匀，迅速滤过,精密量取续滤液５0 mL ,加淀粉批示液l ｍL,立即用碘滴定液（0.0５mｏｌ／L)滴定,至溶液显蓝色并持续3 0秒钟不褪。

每l ｍL碘滴定液（0.０５ m o l ／L ）相称于8.80６mg的C６H８O6 (3)精密量取维生素C注射液适量( 约相称于维生素C 0.2 ｇ ),加水15 ｍL与丙酮2 mL ，摇匀,放置5分钟,加稀醋酸4 mL与淀粉批示液ｌ mL，用碘滴定液(0.0５ ｍol/L)滴定,至溶液显蓝色并持续3 0秒钟不褪每l ｍL碘滴定液（0．05ｍol/L)相称于8.806 mｇ 的C6H8O6 直接碘量法在滴定过程中发现溶液里的不溶物吸附碘,并且溶液与空气接触时间较长但是此法简捷、迅速、以便，成果也较精确,适合测定多批量样品2.1.2间接碘量法 先加过量的碘原则液与配制好的维生素 C 溶液反映完全，用硫代硫酸钠滴定过量的碘至蓝色刚好消失 I2＋２Ｎa２S２O3=Nａ2S4Ｏ6+２NａI 间接碘量法消除了不溶物吸附作用的影响,缩短了Vｃ液与空气的接触时间,避免了碘的挥发对实验成果导致的影响 2.1.３返滴定碘量法 药典中常采用将碘溶解在 KＩ 溶液中以增大碘的溶解度此实验取 ２０%的 KI 溶液 5 mｌ 于 25０ ml 锥形瓶中，精确量取 0.0１ ｍol/L CuSO4溶液 1 mｌ加入锥形瓶中使其充足反映，再加 ２ mｌ 淀粉批示液。

Vc液溶于冰乙酸介质中，用其进行滴定至恰使蓝色消失为止CｕI２不稳定随后分解为 Cｕ2I2和游离的碘 空白实验：取 ２0%的 ＫI 溶液 5 mｌ 于锥形瓶中,加蒸馏水 １ mｌ，再加 １0 滴淀粉批示剂溶液, 然后用溶于冰乙酸介质中的 Vｃ液进行滴定, 边摇边滴定，直至与测定颜色一致为止 反滴定碘量法的空白实验消除了因 ＫＩ 中具有碘而产生的系统误差，也消除了人眼对溶液变色的敏感限度不同而对实验导致的误差由于样品液能与KI 中自身具有的碘作用,也消除了因 ＫI 中具有的碘产生的误差反滴定法比滴定法更精确，但操作较繁琐,适合测定少批量样品2．1.4铁(Ⅲ)置换氧化还原滴定法 基于将测定抗坏血酸的碘滴定(药典)法和铁铵矾滴定法相结合,曾盔［1]等先用铁铵矾基准物氧化碘化钾置换出相称量的I2,再在维生素C药物溶液滴定中让相称量的Ｉ2定量氧化抗坏血酸合适的反映条件是：乙酸介质,碘离子过量，室温置暗处置换反映1０ ｍｉn将该法用于维生素C药物中抗坏血酸的测定,成果与药典法成果相符 2.１.５库仑滴定法 汪瑗[２]等用库仑滴定法测定维生素C的含量,以０.５mol/Ｌ溴化钾一1mol/L硝酸钾一１ｍｏl/L醋酸(１:1：ｌ)的混合溶液为电解液,在阳极发生Ｂｒ2与维生素C分子中一C＝C一不饱和双键发生加成反映,测定样品中维生素C的含量。

 用库仑滴定法测维生素Ｃ的含量，可以达到药典法测其含量的相似精度,并且可以省去标定碘溶液等繁琐的操作过程用此法测其含量既可靠、敏捷、精确、迅速,又合用于微量分析,具有明显的优越性2.1.6氢氧化钠两点电位滴定法 根据维生素Ｃ用NaOH 滴定期可定量中和１个羟基的性质，结合两点电位滴定法的原理,谢志方[3]提出了用 NａＯＨ 作滴定剂测定 Vｃ 含量的两点电位滴定法该法避免了直接电位滴定法滴定期间过长,需记录大量数据,数据解决复杂等缺陷，简化了滴定操作过程及终点的拟定，可用于测定维生素Ｃ片中 Vc 的含量2．2分光光度法2.２.1紫外分光光度法紫外分光光度法的基本是物质对紫外光的选择性吸取，是基于分子里价电子的能级之间的跃迁所产生的吸取运用此措施具有分析速度快、反复性好、无污染等的特点紫外吸取法除了与可见吸取光谱同样，可以进行定量分析，可以测定物质的物理化学常数之外, 还可以对物质进行定性的分析以及构造的分析用Ｃu2+作为催化剂加速维生素Ｃ的氧化,以EDTＡ络合校正背景作参比，运用氧化前后吸光度的差值直接测定维生素C的含量亦可运用定量过量的碘酸钾溶液,在弱酸性条件下与碘化钾生成I3的显色反映,抗坏血酸可将一部分的I3还原,剩余的I3用紫外分光光度计测定[４］。

 2.2.2重铬酸钾分光光度法 蔡卓[5]等以重铬酸钾为显色剂，运用其与维生素C的褪色反映,通过测定反映体系吸光度(35０ｎm)变化值,拟定维生素Ｃ的含量.、操作简便、精确可靠、重现性好、敏捷度高，便于推广使用2.2.３邻二氮菲分光光度法 魏玲[6]等运用维生素C分子中烯二醇基的还原性，将高铁离子定量转化为亚铁离子,产生的亚铁离子与邻二氮菲发生显色反映，显色物的浓度与吸光度成正比,从而间接测定出维生素Ｃ的含量，检出限为2.34×10－6ｍol·Ｌ-１该措施的特点是敏捷度高，所用仪器一般、操作简朴２.3.电极法 ２.3.１ 聚中性红修饰电极法 中性红是一种吩嗪类染料，可以在电极上发生电化学聚合张秋灵[７]等用中性红制备的化学修饰电极作为工作电极,饱和甘汞电极作为参比电极,铂电极作对电极,浓度为0.５０ mol/L的NaＮＯ3作为支持电解质, ０.5000 mｏl/Ｌ的中性红溶液作为修饰液,运用修饰电极对维生素C有催化氧化的作用,通过循环伏安法测定维生素C的含量在1.0×10-5~1．0×１0-2moｌ／L范畴内,响应电流与维生素Ｃ的浓度呈线性关系,有关系数r=0.9987,检出限1.0×10－６mol/L,样品回收率在89.２7% ~10４．15%。

2.３.2碘离子选择电极法 杨秀芳[8]等提出用碘离子选择电极测定维生素Ｃ与碘在乙醇溶液中发生氧化还原反映时定量释放出游离碘离子溶液中的电位以测定样品中Vc含量的措施用1%的淀粉溶液作为批示剂,显微蓝色时为终点维生素C与游离的碘离子的含量成正比,通过使用碘离子选择电极测定溶液中游离的碘离子的含量，用原则曲线法作为分析措施,间接测定溶液中的维生素C的含量在0.１ mol／L的ＫNO3, pH=2.0~6.0的溶液中,维生素浓度对数在10-５~10-6mｏl/L范畴内与电位显示良好的线性关系,检测下限为５×10-6mol/L,回收率为9２％ ~1０３%,相对偏差为２.3% ２．4高效液相色谱法   王 蕊[９]等建立了高效液相色谱测定维生素C片含量的措施措施：采用0.１%的草酸作为溶剂,色谱中采用pheｎｏm enｅx-C18色谱柱,流动相:磷酸盐缓冲溶液(ｐH=5.８):甲醇＝９5：5流速0.8ml/min,紫外检测器,检测波长254ｎｍ成果:维生素C在０.01 -0．5mg /ml内有良好的线性关系,线性回归方程为ｙ=4Ｅ+06x＋１5508,有关系数为R2=0.99９8,措施平均回收率为9９.71%,相对原则偏差不不小于2%。

本文测定措施简便,迅速,能精确测定维生素Ｃ片的含量 赵敏［10]等建立一种敏捷、精确的高效液相色谱（HPＬC）测定维生素C注射剂的措施,并进行分析措施学验证措施:采用色谱柱为Xterrａ RP C１８(４.６×150ｍｍ,5μm），柱温为25℃，以0．０1ｍｏl·Ｌ-1(pH为3．５)的磷酸二氢钠为流动相，系统流速为0.6mL·ｍin-1,检测波长为265ｎｍ成果：该措施的线性范畴为50～12０μg·mL-１，其原则曲线的有关系数为0.9992，日内ＲSＤ为0.87%,其日间RSD为1．03％,加样回收率为10０．３6%结论:此法敏捷、精确、高效,反复性好,可用于注射用维生素C的含量测定2．5薄层色谱法 蔡毓琼[11］采用硅胶ＧF25４-ＣＭC -Nａ薄层板,正戊醇-氯仿-甲酸（６： ２： 1）为展开剂展开测定Ｖｃ银翘片中的维生素C。