Alltech型蒸发光散射检测器解决HPLC检测难题课件.ppt

ELSDELSD检测器的选择和主要的应用介绍检测器的选择和主要的应用介绍GRACE ~ Davison Davison 从分析到制备的解决方案从分析到制备的解决方案Ø美国奥泰公司美国奥泰公司( (AlltechAlltech) )于于20042004年年8 8月并入月并入GraceGrace公司，隶属于三大公司，隶属于三大 分支之一的分支之一的DavisonDavison旗下的探索科技部门旗下的探索科技部门ØDavisonDavison是全球最大的硅胶生产商，能够为是全球最大的硅胶生产商，能够为LC,GCLC,GC和和LCLC的应用提供从的应用提供从小规模研发到大规模工业生产的一站式解决方案小规模研发到大规模工业生产的一站式解决方案  HPLC和和GC柱，配件和仪器柱，配件和仪器 硅胶基色谱填料硅胶基色谱填料HPLC毛细柱和微径柱毛细柱和微径柱 HPLC柱和小型仪器柱和小型仪器 制备级和工业级制备级和工业级LC柱和装柱服务柱和装柱服务 生物分离专用生物分离专用HPLC柱和填料柱和填料 GRACE大纲Ø常规检测器的回顾ØELSD的检测原理ØELSD与常规检测器的比较ØELSD在分析上的优点ØAlltech ELSD的介绍ØELSD的维护Ø质量保证Ø总结GRACE其它检测器的介绍其它检测器的介绍-    紫外可见紫外可见UV/VisUV/Vis- 示差折光示差折光RIRI- 荧光荧光FluorescenceFluorescence- 质谱质谱Mass SpectrometryMass SpectrometryGRACE检测器是高效液相色谱（检测器是高效液相色谱（HPLCHPLC））的核心部件之一，被喻为的核心部件之一，被喻为HPLCHPLC的眼睛。

的眼睛它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信号，它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信号，通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析检测器的应用分布检测器的应用分布紫外可见紫外可见 65%示差和蒸发光示差和蒸发光10%电化学电化学10%荧光荧光8%质谱质谱4%其它其它3%GRACE紫外紫外/ /可见检测器可见检测器UV/VISUV/VIS优点：优点：• 易于操作• 可靠性• 费用相对低廉• 溶剂梯度兼容• 对样品没有破坏性• 相对灵敏度高GRACE局限性：局限性：• 没有好的发光基团 的化合物响应较差• 溶剂的使用上受紫外截止波长的限制荧光检测器荧光检测器FluorescenceFluorescence 优点：优点：•很好的灵敏度•很好的选择性•受流速和温度的变化影响很小GRACE局限性：局限性：•线性范围窄•操作复杂-需要对化合物和仪器的变化了解透彻•某些物质如氧气会熄灭荧光-必须严格脱气•能够自然产生荧光的化合物不是很多•衍生方法复杂示差折光检测器示差折光检测器RIRI优点优点：：•通用性-对几乎所有的物质具有相应•宽的动态线性范围--104•易于操作GRACE局限性局限性:•检测灵敏度不高•对于温度和压力的波动敏感•平衡慢•检测既有正峰也有负峰•不能进行梯度洗脱•流动相预先混合后的效果好于泵混合的质谱质谱 MSMS优点优点:•灵敏度高•选择性好•提供化学结构信息GRACE局限性局限性: :•购买费用高•操作复杂•需要经常维护•定量分析困难蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器ELSDELSD•发展历史•检测原理•局限性•优点•在分析中的应用GRACE发展历史发展历史:•   第一台商业化的产品出现在80年代初期• 最早的应用集中在聚合物的分析上• 90年代初期，更多其它方面的应用• 目前,应用在广泛的领域GRACEELSD行业超过行业超过20年的领先制造经验年的领先制造经验:GRACE500 型型2000 型型800 型型2000ES型型3300 型型独特的检测方法：独特的检测方法：检测三部曲:Ø雾化Ø溶剂的蒸发Ø检测GRACEELSDELSD可以对所有挥发性低于流动相的物质作出可以对所有挥发性低于流动相的物质作出准确检测，而与被检测物质的化学基团关系不大，准确检测，而与被检测物质的化学基团关系不大，物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的质量成正比。

质量成正比第一步：雾化第一步：雾化ü色谱柱流出物通过色谱柱流出物通过喷雾器针孔喷雾器针孔ü与氮气混合与氮气混合ü形成均匀的雾状液形成均匀的雾状液滴滴( (气溶胶气溶胶) )GRACE第二步：溶剂的蒸发第二步：溶剂的蒸发ü液滴通过加热的漂移管液滴通过加热的漂移管ü流动相蒸发流动相蒸发ü干燥的样品颗粒保留干燥的样品颗粒保留GRACE第三步：检测第三步：检测ü样品颗粒通过流动池样品颗粒通过流动池ü激光激光““撞击撞击””颗粒被散射颗粒被散射ü光电二极管检测散射光光电二极管检测散射光检测角度为检测角度为90℃90℃，避免虚假，避免虚假信号信号(>90℃(>90℃折射折射/ /衍射光；衍射光；<90℃<90℃反射光反射光)GRACE两种类型气溶胶处理方式：两种类型气溶胶处理方式：A型-所有液滴进入漂移管及流动池(又称为“无气溶胶分流 No Aerosol Splitting”)B型-部分液滴分流排掉；只有一部分进入漂移管及流动池(“气溶胶分流Aerosol Splitting”)GRACEA A型型ELSD-ELSD-气溶胶不分流操作气溶胶不分流操作Ø所有样品从喷雾器进入漂移管及流动池Ø需要较高温度才能完全蒸发流动相；ØA型ELSD只有不分流一种操作模式GRACEB型ELSD-气溶胶分流操作Ø部分样品被排掉Ø较低的温度已足够蒸发所有溶剂ØB型ELSD只有分流一种操作模式GRACEAlltech 2000(ES)型ELSD唯一提供两种操作模式的ELSD，在任何流动相及样品分析条件下均达到最佳结果GRACE一台仪器，两种操作模式：一台仪器，两种操作模式：Ø撞击器(Impactor)关-所有液滴进入漂移管及流动池(A型ELSD-无分流)Ø撞击器(Impactor)开-部分液滴被排除，只有一部分进入漂移管及流动池(B型ELSD-气溶胶分流)Ø采用新型专利“气溶胶分流技术” US Patent #6229605US Patent #6229605 GRACE撞击器关模式Ø撞击器与气溶胶流向平行Ø所有样品流过漂移管到达流通池Ø最适用于非挥发性样品及挥发性溶剂(大部分为有机)Drive ShaftNebulizerOpticsImpactor ‘Off’GRACENebulizerDrive ShaftImpactor ‘Off’OpticsExhaustDrift TubeNebulizerImpactorDrain撞击器开模式Ø撞击器垂直于气溶胶流向，部分液滴碰上撞击器从废液管排掉;其余穿过撞击器，经过漂移管到达流动池Ø最适用于半挥发性样品及低挥发性溶剂(大部分为水溶液)Drive ShaftNebulizerImpactor ‘On’OpticsGRACENebulizerDrive ShaftImpactor ‘On’NebulizerDrainImpactorDrift TubeExhaustOptics撞击器撞击器关关- -最适合非挥发性样品最适合非挥发性样品Column: Alltech 700CH Carbohydrate Column 10µm, 300x6.5mmMobile Phase: 100% WaterFlowrate:0.5mL/min1.  蜜三糖 (50µg/mL)2.  乳糖(50µg/mL)3.  葡萄糖 (50µg/mL)4.  甘露糖 (50µg/mL)Column: Alltech 700CH Carbohydrate Column 10µm, 300x6.5mmMobile Phase: 100% WaterFlowrate:0.5mL/min# 9206# 9205Impactor ‘On’Impactor ‘Off’碳水化合物碳水化合物非挥发性样品在撞击器非挥发性样品在撞击器“关关”的情况下也不挥发，全部进入流动池，的情况下也不挥发，全部进入流动池，得到最高灵敏度得到最高灵敏度 GRACE撞击器撞击器关关- -最适合挥发性溶剂最适合挥发性溶剂有机溶剂在较低温度蒸发，在撞击器“关”的情况下，也会完全蒸发，B型ELSD 任何条件下均分流，造成样品损失，降低检测灵敏度Column: Alltech Econosphere®, C18, 5µm, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn: Alltech Econosphere®, C18, 5µm, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/min1.  n-癸基-b-D-吡喃糖苷 (5µg/mL)2.  n-辛基-b-D-吡喃糖苷 (5µg/mL)3.  n-十二烷基-b-D-吡喃糖苷(5µg/mL)葡萄糖苷分析葡萄糖苷分析Impactor ‘On’Impactor ‘Off’# 9180# 9179GRACE撞击器撞击器开开- -最适合半挥发性样品最适合半挥发性样品在撞击器开情况下，可以较低温蒸发溶剂，防止半挥发性样品蒸发防腐剂分析防腐剂分析Column: Alltech Econosphere®, C18, 5µm, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn: Alltech Econosphere®, C18, 5µm, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/min1.  羟基苯甲酸甲酯 2.  羟基苯甲酸乙酯3.  羟基苯甲酸丙酯4.  羟基苯甲酸丁酯# 9202Impactor ‘Off’Impactor ‘On’# 9201GRACE撞击器撞击器开开- -在几乎室温下检测半挥发样品在几乎室温下检测半挥发样品Column:Prevail™ Carbohydrate ES, 5µm, 250 x 4.6mm Mobile Phase: Acetonitrile: 0.04% Ammonium Hydroxide (80:20)Flowrate: 1.0mL/min 1. Glycerol甘油GRACEELSDELSD的局限性的局限性1 1. . 只能使用挥发性的流动相2.2. 样品的挥发性必须要小于流动相3.3. 检测器响应是非线性的GRACE挥发性的流动相改性剂挥发性的流动相改性剂#1#1Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPAcidsTrifluoroacetic Acid三氟乙酸三氟乙酸0.313.7072.4°CFormic Acid甲酸甲酸3.7510.25100.7°CAcetic Acid醋酸醋酸4.759.25116.0°CCarbonic Acid碳酸碳酸6.377.63—BasesAmmonia氨水氨水9.254.75-33.35°CMethylamine甲胺甲胺10.813.1916.6°CEthylamine二乙胺二乙胺10.663.34-6.3°CTriethylamine三乙胺三乙胺11.012.9989.3°CBuffersAmmonium Formate甲酸胺甲酸胺3.0-5.0120°CPyridinium Formate甲酸吡啶翁甲酸吡啶翁3.0-5.0Ammonium Acetate乙酸胺乙酸胺3.8-5.8111°CPyridinium Acetate乙酸吡啶翁乙酸吡啶翁4.0-6.0Ammonium Carbonate (for reverse phase)碳酸胺碳酸胺(用于反相用于反相)8.0 (adjusted)Ammonium Carbonate碳酸胺碳酸胺5.5-7.5 and 9.3-11.3GRACE挥发性的流动相改性剂挥发性的流动相改性剂#2#2Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPIon-Pair ReagentsPentafluoropropionic Acid五氟丙酸~0.696-97°CHeptafluorobutyric Acid七氟丁酸~0.6120°CNonafluoropentanoic Acid九氟戊酸140°CPentadecafluoroocatanoic Acid十五氟辛酸~0.6189°CTridecafluoroheptanoic Acid十三氟庚酸~0.6175°CGRACE载气流速与漂移管温度GRACE载气流速和漂移管温度是载气流速和漂移管温度是ELSDELSD中可以调节的两个中可以调节的两个重要参数，建立适当的重要参数，建立适当的HPLC-ELSDHPLC-ELSD分析方法需要分析方法需要对这两个参数进行优化。

对这两个参数进行优化优化的原则是降低噪声到可以接受的程度，并尽优化的原则是降低噪声到可以接受的程度，并尽量提高信噪比量提高信噪比载气流速与漂移管温度GRACE漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显的漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显的规律性低于某一温度，基线水平较高，因为低规律性低于某一温度，基线水平较高，因为低于这一温度，流动相得不到充分挥发，而盐的加于这一温度，流动相得不到充分挥发，而盐的加入将会提高这一温度，因为盐的挥发需要更高的入将会提高这一温度，因为盐的挥发需要更高的温度，但并不是漂移管温度越高越好，因为温度温度，但并不是漂移管温度越高越好，因为温度太高会使流动相沸腾，反而会增加背景噪音，同太高会使流动相沸腾，反而会增加背景噪音，同时还有可能导致溶质的部分挥发，降低信噪比时还有可能导致溶质的部分挥发，降低信噪比故最优温度应为在流动相（包括其中所含的盐）故最优温度应为在流动相（包括其中所含的盐）基本挥发的基础上，产生可接受噪音的最低温度基本挥发的基础上，产生可接受噪音的最低温度载气流速与漂移管温度GRACE一一般般来来说说，，在在其其它它条条件件不不变变的的情情况况下下，，载载气气流流速速越越小小，，形形成成的的物物质质粒粒子子半半径径越越大大，，对对激激光光的的散散射射能能力力越越强强，，相相应应的的响响应应信信号号越越大大。

但但并并不不是是载载气气流流速速越越小小越越好好，，因因为为当当载载气气流流速速太太小小时时，，流流动动相相不不能能完完全全挥发，背景噪音会增加，信噪比也会降低挥发，背景噪音会增加，信噪比也会降低最最优优载载气气流流速速应应是是在在可可接接受受噪噪音音的的基基础础上上，，产产生生最最大检测响应值时的最低流速大检测响应值时的最低流速如何应对非线性响应的检测器？如何应对非线性响应的检测器？-选择2阶方程或者幂指曲线方程-使用曲线的仅仅线性部分-使用log/log 双对数方法产生线性曲线 即:对照品的浓度和面积同时取对数,至少两个点得到直线方程在中国药典2005版中，中药计算采用两点双对 数方法,抗生素计算采用三点双对数方法GRACE散射光的响应值与粒子质量的关系：散射光的响应值与粒子质量的关系： I＝＝kmb取对数：取对数： lgI＝＝blgm＋＋lgk m：：待测组分的粒子质量和待测组分的粒子质量和 I：： 待测组分所产生的散射光光强待测组分所产生的散射光光强 k,b：：常数常数Log-Log线性方程线性方程GRACEELSD--ELSD--功能强大的功能强大的HPLCHPLC检测器检测器Ø通用性高通用性高- -可检测任何挥发性低于流动相 的化合物Ø灵敏度好灵敏度好-比示差及低波长紫外灵敏Ø一致的响应一致的响应-给出准确的样品浓度Ø用途广泛用途广泛-梯度相容，改善分离及缩短分析时间GRACEELSDELSD响应因子的一致性GRACEØ不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具有不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具有相同的响应因子，这种响应因子的一致性，相同的响应因子，这种响应因子的一致性，使纯度分析结果和多组分物质的相对比例测使纯度分析结果和多组分物质的相对比例测定结果更准确。

定结果更准确Ø在无合适对照品的情况下，采用另外一种含在无合适对照品的情况下，采用另外一种含量已知的物质作内标，测定未知物含量成为量已知的物质作内标，测定未知物含量成为可能这一点对组合分子库、无紫外发色团可能这一点对组合分子库、无紫外发色团物质的新药基准品的建立尤为有用物质的新药基准品的建立尤为有用ELSDELSD比较其它几种检测器的优势比较其它几种检测器的优势Ø示差 RIØ紫外可见 UV/VisØ荧光Fluorescence Ø质谱MSGRACEELSDELSD相比示差的优势相比示差的优势: :示差检测器的限制示差检测器的限制ELSD优点优点•温度变化会引起基线不稳定温度变化会引起基线不稳定•不受环境温度影响不受环境温度影响•可能出现负峰可能出现负峰•均是正峰均是正峰•不可以用梯度洗脱不可以用梯度洗脱•梯度洗脱兼容梯度洗脱兼容•受溶剂峰干扰受溶剂峰干扰•溶剂无响应，无溶剂峰溶剂无响应，无溶剂峰•灵敏度差灵敏度差•ng级的检测限级的检测限GRACEELSD不会出负峰五糖五糖, 1.5mg/mLELSDRIRI (反转极性)GRACEELSDELSD相对相对RIRI，提高了检测灵敏度和基线稳定性，提高了检测灵敏度和基线稳定性RIELSD10277102781. Fructose 果糖2. Glucose 葡萄糖3. Sucrose 蔗糖Column:     Prevail™ Carbohydrate ES, 5µm, 53 x 7mm (Part No. 35104) Mobile Phase:  Acetonitrile:Water (75:25) Flowrate:      2.0mL/min Column Temp: 30°CGRACE碳水化合物的梯度洗脱# 7576 (Isocratic)1. 核糖2. 木糖3. 果糖4. 葡萄糖5. 蔗糖6. 麦芽糖7. 乳糖8. 棉子糖1. 果糖2. 葡萄糖3. 蔗糖4. 麦芽糖5. 乳糖# 7570 (Gradient)CarbohydratesGRACEELSD相比紫外检测器的优势: UV的局限性 ELSD的优点 •只能检测吸收紫外或可见光• 检测挥发性低于溶剂的任的化合物何化合物•检测基于样品的消光系数• 检测基于样品浓度•低波长紫外检测作梯度洗脱时•梯度洗脱时基线稳定 出现基线漂移•溶剂峰会干扰• 溶剂没有响应，无溶剂峰• 溶剂选择受其紫外末端吸收限制•可用任何挥发性的溶剂 GRACE甾体化合物# 79411.  雌酮-3-硫酸钠, 100ng2.  b-雌二醇-17- b -D-葡萄糖苷酸钠, 100ng3.  5b -孕烷-3a,20a-二醇-葡萄糖酸苷, 220ng # 7940 Column: Alltima™ C18, 5µm, 150 x 2.1mm(Part No. 88370)Mobile Phase:A:  0.1% TFA in WaterB:  0.1% TFA in MethanolGradient: Time:01018%B:60100100 Flow Rate:  0.2mL/minGRACE10446ELSD显示在UV谱图中未检测到的成分 Lotrimim® AF Topical Solution1. PEG2. ClotrimazoleColumn: Alltima™ C18, 5µm, 150 x 4.6mm (Part No. 88302)Mobile Phase:A: Water B: MethanolGradient: Time:081020               25%B:305010010030Flow Rate:  1.0mL/minColumn Temp.:40°C#10446 #10447GRACEELSD比比UV更能准确反映样品实际的量更能准确反映样品实际的量1:1 混合物混合物1. Ephedrine 麻黄素2. Caffeine  咖啡因1045010449Column:  Alltima™ HP EPS C18, 5µm, 150 x 4.6mm (Part No. 87715) Mobile Phase: 1% Acetic Acid:Methanol:Acetonitrile (70:20:10) Flow Rate: 1.0mL/minGRACEELSD检测没有发光团的化合物不需要衍生检测没有发光团的化合物不需要衍生1. lauric Acid2. Myristic Acid3. Palmitic Acid4. Stearic Acid5. Arachidic Acid6. Behenic Acid9539Column:          Prevail™ Organic Acid, 5µm, 150 x 4.6mm (Part No. 88640) Mobile Phase:    (75:25) Acetonitrile:Methanol Flow Rate:         1.0mL/min脂肪酸脂肪酸GRACEELSD在分离使用的溶剂选择上有特点在分离使用的溶剂选择上有特点1. LGG2. LGL3. LLL4. OGL5. PGL6. OLL7. OGO + PLL8. OOO10047Column:  Alltima™ C18, 5µm, 250 x 4.6mm (Part No. 88056) Mobile Phase: A: Acetonitrile  B: Dichloromethane Gradient:  Time:040%B:3050 Flow Rate: 1.0mL/minTriglycerides in Evening Primose Oil 月见草油中的甘油三酯GRACE二氯甲烷对于高分子量的甘油三酯溶解度高.荧光检测器的局限性•大多需要柱前或柱後衍生大多需要柱前或柱後衍生•无需衍生无需衍生荧光检测器的限制荧光检测器的限制 ELSD的优点的优点GRACE柱前衍生法分析氨基酸—紫外&荧光1. 天门冬氨酸2. 谷氨酸3. 丝氨酸4. 甘氨酸5. 组氨酸6. 苏氨酸7. 丙氨酸8. 精氨酸9. 脯氨酸10. 酪氨酸11. 蛋氨酸12. 缬氨酸13. 半胱氨酸14. 异亮氨酸15. 亮氨酸16. 苯丙氨酸17. 赖氨酸 #7596#5164GRACE  1. Gly2. Ser/Asn3. Asp4. Gln5. Ala/Thr6. Glu7. Cys/Lys8. His9. Pro10.  Arg11. Val12. Met13. Tyr14. Ile15. Leu16. Phe17. TrpColumn:  Prevail™ C18, 5µm, 250 x 4.6mm (Part No. 99210)Mobile Phase: A: 5mM Heptafluorobutyric Acid, pH1.0 w/0.7% TFA  B: AcetonitrileGradient: Time:06825%B:001535Flow Rate:  1.0mL/minGRACEELSD对无衍生氨基酸分析虽然虽然MSMS是通用性的检测器，是通用性的检测器，ELSDELSD也有自己的优势也有自己的优势1.投入和操作的成本低投入和操作的成本低2.操作容易操作容易3.维护简单维护简单4.定量相比更准确定量相比更准确5.        对于色谱条件的要求在对于色谱条件的要求在ELSDELSD和和MSMS上是相似的，所以上是相似的，所以ELSDELSD方法能够方便的应用在方法能够方便的应用在MSMS上不需要修改。

上不需要修改6.6. 在在ELSDELSD上进行上进行MSMS的方法研究，能够节省的方法研究，能够节省MSMS用于实用于实际样品的分析际样品的分析7. GRACE并联使用并联使用UV/ELSD/MS能够得到最多的结构和浓度信息能够得到最多的结构和浓度信息1. Aspartame2. Hydrocortisone  3. Reserpine4. Terfenadine  Column:  ZORBAX® StableBond C18, 3.5µm, 50 x 4.6mm (Part No. 835975-902)Mobile Phase: A: 0.025% Formic Acid in Water     B: 0.025% Formic Acid in AcetonitrileGradient: Time:0155.1%B:250025Flow Rate:  1.0mL/minColumn Temp: 30°C Chrom#10456 #10458 #10457GRACE总结总结: :用用ELSDELSD替代或补充现有检测器的益处替代或补充现有检测器的益处•消除衍生简化方法•比RI有更好的灵敏度和稳定性•给其它检测器作补充，能够看到哪些物质没有检测到•能够比UV&MS得到更准确的样品量的信息GRACEELSDELSD更多的优点：更多的优点：通用性的检测器通用性的检测器: :- - 可以使用微径柱来提高灵敏度可以使用微径柱来提高灵敏度- - 条件方便放大到制备条件方便放大到制备- - 在极端的梯度条件下进行快速分离在极端的梯度条件下进行快速分离检测没有发光团的化合物的理想选择检测没有发光团的化合物的理想选择: :- Lipids- Lipids磷脂磷脂- Polymers- Polymers聚合物聚合物- Surfactants- Surfactants表面活性剂表面活性剂- Carbohydrates- Carbohydrates碳水化合物碳水化合物GRACE在在ELSDELSD上用微径柱检测上用微径柱检测1. Vitamin A (100ng on-column)2. Vitamin E (160ng on-column)3. Vitamin K1 (130ng on-column)Column:Alltima™ C18, 3µm, 150 x 1mm (Part No. 88384)  Mobile Phase: Methanol:Chloroform (90:10)Flow Rate:  50µL/min #10279GRACE制备时通过制备时通过ELSD控制馏分收集器，过滤控制馏分收集器，过滤UV无吸收化合物无吸收化合物Column:  Alltima™ C18, 5µm, 150 x 10mm (Part No. 81102)Mobile Phase: Water:Acetonitrile (55:45)Flow Rate:  5.0mL/minColumn Temp.: 25°C1. Ethinamate  (5.0mg/mL)#10438GRACEELSD对流动相的组成改变不响应，允许在极端梯度条件下的快速分离对流动相的组成改变不响应，允许在极端梯度条件下的快速分离1. Ephedrine2. Acetylsalicylic acid3. Diphenhydramine4. Trimipramine   Column:Alltech® Alltima™ HP C18, 3µm, 33 x 7.0mm (Part No. 87671)Mobile Phase: A: 0.1% TFA in Water  B: 0.1% TFA in Acetonitrile  Gradient:  Time:03%B:1090 Flow Rate:2.5mL/min  Column Temp:30°C #10451GRACE主要的应用领域主要的应用领域GRACEPharmaceuticals 药物药物Non-chromophoric drugs 没有发光团的药品Excipients 赋性剂Impurities 杂质Amino acids氨基酸Aminoglycoside antibiotics 氨基糖甙类Nutraceuticals 天然产物天然产物Ginseng 人参Astragaloside IV 黄芪甲苷Ginkgolides 银杏Glucosamine氨基葡萄糖Polymers/Surfactants聚合聚合物物/表面活性剂表面活性剂PEGs Polysorbate聚山梨酸酯Tween PVA聚乙烯醇GPECDimethiconeLipids 脂类脂类Phospholipids磷脂Triglycerides 甘油三酸酯Fatty acids 脂肪酸Carbohydrates碳水化合物碳水化合物Simple sugars单糖Oligomers 寡糖Sugar alcohols糖醇2005版中国药典中用版中国药典中用ELSD检测的药品名称检测的药品名称 序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码1地肤子地肤子皂苷甲醇－水－冰醋酸=85:15:0.2一部P812路路通路路通酸甲醇－水－冰醋酸=87:13:0.1一部P2053黄芪 黄芪甲苷 C18柱，乙腈：水=32：68 一部P212 4炙黄芪 黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68 一部P213 5银杏叶 萜类内酯 白果内酯 C18柱，甲醇:四氢呋喃：水=25：10：65 一部P220 6银杏叶提取物 萜类内酯 白果内酯C18柱， 正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P282 7知母 拔契皂苷元 C18柱，甲醇：水=95：5 一部P1 48 8意苡仁 甘油三油酸酯 C18柱，乙腈：二氯甲烷=65：35 一部P260 9浙贝母 贝母素 C18柱，乙腈：水：二乙胺=70：30：0.3 一部P205 10乙肝宁颗粒黄芪甲苷甲醇－水=75:25一部P29011玉屏风口服液黄芪甲苷乙腈－水=35:65一部P40912补中益气丸（水丸）黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=35：65 一部P48013银杏叶片萜类内酯 白果内酯C18柱， 正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P597GRACE2005版中国药典中用版中国药典中用ELSD检测的药品名称检测的药品名称 序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码13硫酸卡那霉素卡那霉素 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=95：5 二部P724 14硫酸庆大霉素 庆大霉素 小诺霉素 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8二部P730 15硫酸依替米星 依替米星 奈替米星 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=84：16 二部P740 16硫酸小诺霉素 小诺霉素/庆大霉素C1a C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6 二部P718GRACEELSD对氨基葡萄糖有比对氨基葡萄糖有比RI和和UV更好的响应更好的响应Column:  Prevail™ Carbohydrate ES, 5µm, 150 x 4.6mm (Part No. 35102)Mobile Phase: Acetonitrile:Water (65:35) Flow Rate:  1.0mL/min1. Glucosamine  (1mg/mL)# 10412# 10413# 10411GRACE使用使用ELSDELSD可以梯度洗脱完全分离多种磷脂可以梯度洗脱完全分离多种磷脂, ,灵敏度高灵敏度高GRACE1.  Cholesterol                           胆固醇胆固醇2.  Palmitic acid                         棕榈酸棕榈酸3.  Phosphatidylethanolamine     磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺4.  Phosphatidylserine                磷脂酰丝氨酸磷脂酰丝氨酸5.  Phosphatidylcholine              卵磷脂卵磷脂6.  Sphingomyelin                      神经鞘磷脂神经鞘磷脂Column:  Alltech® Allsphere™ Silica, 3µm, 100 x 4.6mm (Part No. 778382)Mobile Phase: A: IPA  B: Hexane  C: WaterGradient:Time:0715%B:404040%C:288Flow Rate: 1.25mL/minELSDELSD检测糖醇检测糖醇- -高灵敏度和稳定的基线高灵敏度和稳定的基线Column:  Prevail™ Carbohydrate ES, 5µm, 250 x 4.6mm (Part No. 35101)Mobile Phase: Acetonitrile:Water (70:30) Flow Rate: 1.0mL/min1. iso-Erythritol异赤藻糖醇2. Xylitol  木糖醇3. Mannitol甘露醇4. Maltitol麦芽糖醇# 9352糖醇糖醇GRACEELSDELSD轻松检测困难化合物轻松检测困难化合物----Tween 80Tween 80GRACE5% Tween 80Column:  Alltech® Alltima™ C18, 5µm, 250 x 4.6mm (Part No. 88056)Mobile Phase: Water:Methanol (60:40)Flow Rate: 1.0mL/minELSDELSD梯度洗脱分离玉米糖浆低聚糖梯度洗脱分离玉米糖浆低聚糖GRACE  1. Dextrose  2. Maltose  3. Maltotriose  4. Maltotetraose  5. Maltopentaose  6. Maltohexaose  7. Maltoheptaose  8. Maltooctaose  9. Maltononaose10. Maltodecaose11. Maltoundecaose12. Maltododecaose13. Maltotridecaose14. Maltotetradecaose15. MaltopentadecaoseColumn:  Alltech® Prevail™ Carbohydrates ES 300A, 5µm, 250 x 4.6mm (Part No. 35101) Mobile Phase: A: Acetonitrile  B: WaterGradient:Time:015%B:3550Flow Rate: 1.0mL/min无需衍生检测橄榄油中的甘油三酯无需衍生检测橄榄油中的甘油三酯GRACE1.  1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-glycerol (LLO)2.  1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glycerol (LLP)3.  1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glycerol (OOL)4.  1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol (POL)5.  1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol (PPL)6.  Triolein (OOO)7.  1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol (OOP)8.  1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol (PPO)9.  1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol (OOS) Column:  Alltech® Alltima™ C18, 3µm, 150 x 4.6mm (Part No. 91387)Mobile Phase: A: Dichloromethane B: AcetonitrileGradient:Time:0101820%B:70557070Flow Rate: 1.5mL/min脂肪和油一般含有特征性的甘油三酯,分析甘油三酯可以鉴定脂肪和油的品种.掺有植物油的橄榄油的鉴定分析掺有植物油的橄榄油的鉴定分析GRACE1. LLL2. LLO3. LLP4. OOL5. POL6. OOO7. OOP8. PPO9. OOSColumn:Alltima™ C18, 3µm, 150 x 4.6mmMobile Phase:A:  Dichloromethane      B:  AcetonitrileGradient:Time:010  18 20%B:7055  7070Flowrate:1.5mL/minDetector:ELSD 2000橄榄油含有大量的油酸甘油三酯,而不含亚麻酸甘油三酯.后者却存在于菜油中,显示于掺有菜油的橄榄油谱图中.生物柴油生物柴油( (Biodiesel Poster)Biodiesel Poster)生产中的反应和质量生产中的反应和质量监控监控GRACEØ生物柴油是一种可再生、生物可降解和无毒燃料,它可以通过动植物油的转酯反应来制备.作为天然柴油的替代物.Ø目前国内外学者广泛采用的转酯法,即三甘油酯在酸、碱或酶等催化剂作用下经转酯反应制备生物柴油ØMAGs, DAGs和未反应的TAGs会造成污染影响生物柴油的品质GRACEBiodiesel Contaminated with Mono-, Di- and Biodiesel Contaminated with Mono-, Di- and TriacylglycerolsTriacylglycerolsUnreacted Tryacylglycerols (豆油Soy Oil) Column:Alltima™ HP C18-HL, 5µm, 250 X 4.6mmMobile Phase: A: Acetonitrile B: DichloromethaneGradient:Time05303235% B01570700Flow rate: 1.0 ml/min氨基糖苷类抗生素的氨基糖苷类抗生素的ELSDELSD分析分析( (中国药典中国药典2005)2005)Column:  Apollo C18, 5µm, 250 x 4.6mm Mobile Phase: 0.2M Trifluoroacetic Acid:Methanol (94:6)Flow Rate: 0.6mL/min1. Sulfate2. Gentamicin C1a3. Gentamicin C24. Gentamicin C2b5. Gentamicin C2a6. Gentamicin C1# 10425庆大霉素庆大霉素 C组分组分 *中检所抗生素室中检所抗生素室GRACE银杏叶提出物中内酯含量的银杏叶提出物中内酯含量的ELSDELSD测定测定( (中国药典中国药典2005)2005)银杏叶提出物的内酯类成份决定了其药理作用，HPLC-RI法灵敏度与稳定性均不理想；若采用紫外分析因为内酯类成份吸收差，最大吸收波长在219nm，受试剂末端吸收影响很大。

1.1. 银杏苦内酯C C2.2. 白果内酯3.3. 银杏苦内酯A A4.4. 银杏苦内酯B BGRACEColumn:  Platinum C18, 5µm, 250 x 4.6mm Mobile Phase: H2O:MeOH:THF=75:20:10Flow Rate: 1.0mL/min黄芪中黄芪甲苷的黄芪中黄芪甲苷的ELSDELSD分析分析( (CHP2005)CHP2005)黄芪甲苷常作为指标性成份用于黄芪药材的质量监控，因为只在220nm有弱的末端吸收，过去未能使用HPLC法定量，ELSD有通用响应，使用HPLC-ELSD法干扰少，分离度高.1.1. 黄芪甲苷GRACEColumn:  Apollo C18, 5µm, 250 x 4.6mm Mobile Phase: CAN:H2O= (32:68)Flow Rate: 1.0mL/min三七药材及其制剂中三七药材及其制剂中三七皂苷三七皂苷R R1 1, ,人参皂苷人参皂苷RgRg1 1及及RbRb1 1的含量的含量 GRACE图 三七药材及血塞通注射液HPLC色谱图a.对照品b.三七药材c.血塞通注射液 1.三七皂苷R1 2.人参皂苷Rg13. 人参皂苷Rb1Column:  Alltech® Alltima™ C18, 5µm, 150 x 4.6mm Mobile Phase: A: Water   B: AcetonitrileGradient:Time:021%B:3060Flow Rate: 0.6 mL/minAlltech ELSD 2000ES光路和电子元件进行更新光路和电子元件进行更新•布儒斯特角光阱布儒斯特角光阱,增加光阱尾吹增加光阱尾吹•30mW的激光光源的激光光源•光池涂四氟乙烯的抗腐蚀涂层光池涂四氟乙烯的抗腐蚀涂层降低背景噪音，比降低背景噪音，比20002000ELSDELSD提高一个数量级的灵敏度提高一个数量级的灵敏度GRACE关于布儒斯特角关于布儒斯特角Ø当反射光线和折射光线的传播方向互相垂直时当反射光线和折射光线的传播方向互相垂直时, ,入射光线的偏振角入射光线的偏振角称为布儒斯特角称为布儒斯特角. .Ø当透镜只能通过垂直方向的偏振光时当透镜只能通过垂直方向的偏振光时, ,便可挡住部分散射的光线便可挡住部分散射的光线. .Ø自然光在两种各向同性媒质分界面上反射、折射时，反射光和折射自然光在两种各向同性媒质分界面上反射、折射时，反射光和折射光都是部分偏振光。

反射光中垂直振动多于平行振动，折射光中平光都是部分偏振光反射光中垂直振动多于平行振动，折射光中平行振动多于垂直振动行振动多于垂直振动 GRACEELSD 2000ES性能更新性能更新灵敏度的挑战灵敏度的挑战•一种措施是仅仅增加光强，但是同时会增加基线的噪音，导致LOD和信噪比没有变化•ELSD 2000ES 克服这种障碍，专利设计的布儒斯特角光阱，当光强增加时，信号的增强远大于噪音的增加2000ES结合布儒斯特角光阱和30mW的光源为一体GRACEELSD 2000ES灵敏度更新灵敏度更新•对相同的浓度的样品有多于10倍的信噪比(S/N)增长•增强最小检出限 (LOD)GRACE灵敏度比较灵敏度比较 – 2000ES vs 20002000ES对相同量的氢化可的松增加灵敏度对相同量的氢化可的松增加灵敏度1. Hydrocortisone (100ng on column)Column: Alltima™ C18, 5µm, 4.6 x 250mm (Part No. 88056)Mobile Phase: Water:Acetonitrile (55:45)Flow Rate:1.0mL/minGRACE灵敏度比较表灵敏度比较表 – 与其它品牌的与其它品牌的ELSDGRACEØAlltech 2000(ES)ELSD具有专利保护的分流不分流具有专利保护的分流不分流双模式双模式, 用户可根据应用自行选择操作模式用户可根据应用自行选择操作模式;Ø其它品牌的其它品牌的ELSD均为单一的强制分流模式均为单一的强制分流模式;前面板的设计方前面板的设计方便了喷雾头和漂便了喷雾头和漂移管的清洗移管的清洗 和和维护维护液体入口液体入口废液出口废液出口高灵敏度高灵敏度:相当于相当于2000ES的灵敏度的灵敏度, 高于其它品牌高于其它品牌Alltech Model 3300 ELSD GRACE基于基于Windows的的LCD 方法向导一步步地输入分析条件后自动设定仪器参数方法向导一步步地输入分析条件后自动设定仪器参数 屏幕上显示谱图屏幕上显示谱图 出错和服务记录出错和服务记录包括中文在内的包括中文在内的7种语言选择种语言选择 直接连接直接连接Aglient 1200 ChemStation工作站无需工作站无需A/D转换转换Technical Status - MechanicalNebulizer:  Modified to incorporate quick connect gas inlet and for easy removal/installation without any toolsImpactor:  Mounted on a removable cartridge insert.  By removing the nebulizer and the cartridge, the drift tube can be cleaned from the front through an access door.Technical OverviewNext Generation ELSDTechnical Status – Mechanical (Cont.)Exhaust/Liquid Waste Line:  Redesigned for a cleaner look.  The condensed exhaust vapor is combined with the liquid waste through internal tubing.  The exhaust vapor is vented to the back of the unit.  This eliminates the need for a condensation flask.  Drift Tube:  0.07" copper sleeved       stainless steel for improved       temperature stability.Technical OverviewNext Generation ELSDELSDELSD清洗清洗•需要对流路进行清洗需要对流路进行清洗- Drift tube- Drift tube漂移管漂移管- - Nebulizer Nebulizer雾化器雾化器- Optics windows- Optics windows光池光池- Light trap- Light trap光阱光阱•多长时间多长时间- 根据样品，方法和使用频率而定根据样品，方法和使用频率而定- - 通常每半年一次通常每半年一次GRACEQualification Qualification 认证认证GRACE• Installation Qualification (IQ) 安装认证安装认证- Site requirements 场地要求场地要求- Unpacking and inspection 拆箱及检查拆箱及检查- Instrument setup 仪器安装仪器安装• Operational Qualification (OQ) 操作认证操作认证- Gas flow test  气流测试气流测试- Drift tube temperature test 漂移管温度测试漂移管温度测试- Background scatter or laser power test 背景散射光或激光功率测试背景散射光或激光功率测试• Performance Qualification (PQ) 性能认证性能认证- Drift and noise evaluation 漂移和噪音的评估漂移和噪音的评估- Reproducibility 重复性重复性- Sensitivity  灵敏度灵敏度--推荐每年进行一次推荐每年进行一次--在在ELSD2000ES包装中随机带有认证文件包装中随机带有认证文件总结总结: :ELSDELSD用于分析的优势用于分析的优势·通用性通用性- 分析样品中几乎所有的峰都能检测到- 改进定量方法- 更精确的评估峰纯度   灵敏度灵敏度- 检出限达到ng级 (2000ES更优)   梯度兼容性梯度兼容性 - 在坡度梯度中保持稳定的基线GRACE。