鞣质含量测定法操作规程.doc

· 鞣质含量测定法1简述1985年版至2000年版《中国药典》一部鞣质含量测定法一直沿用皮粉法，虽适用范围广，但存在耗样量多，测定时间长，且没有选择性，测定结果偏高，皮粉用量大等缺点，近年来，皮粉试剂的供应和质量都很难保证，使皮粉法德应用受到限制《中国药典》2010年版一部修改为磷钼钨酸-干酪素紫外-可见分光光度计法2仪器与用具2.1紫外可见分光光度计2.2量瓶，移液管，具塞锥形瓶3试药与试液3.1没食子酸对照品3.2磷酸、盐酸（分析纯）3.3干酪素（生化试剂）3.4磷钼钨酸试液 应符合《中国药典》2010年版一部附录XV B的规定3.5 29%碳酸钠溶液 取碳酸钠（NaCO3·10H2O）29g或无水碳酸钠10.8g，加水100ml溶解4操作方法 本实验应避光操作4.1对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品50mg，置100ml棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含没食子酸0.05mg）4.2标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、分别置25ml量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1ml，再分别加入11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml,29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置30min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（附录V A）,在760nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

4.3供试品溶液的制备 按个品种项下的规定的量取样，精密称定，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置过夜，超声处理10min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置（使固体沉淀），滤过，弃去初滤液50ml，精密量取续滤液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得4.4测定法4.4.1总酚 精密量取供试品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入磷钨酸试液1ml”起，加水10ml,依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg），计算，即得4.42.不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25ml，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞锥形瓶中，密塞，置30℃水浴中保温1h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml棕色瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1ml”起，加水10ml，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量（mg）计算，即得5记录与计算5.1记录对照品、供试品称样量，测定过程供试品溶液的稀释，量取的体积等；标准曲线的制备中对照品溶液的量取体积以及相应的吸光度值，计算回归方程。

5.2分别按标准曲线法计算总酚量和不被吸附的多酚量，两者之差为鞣质含量即： 鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量6注意事项6.1药材一般应粉碎过三号筛6.2显色溶液在30min后反应完全，在3h内稳定因此，规定显色后放置30min后测定吸光度。