体外诊断试剂分类和常见产品技术原理.ppt

单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,,,*,*,*,*,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,单击此处编辑母版标题样式,,体外诊断试剂的分类和基本原理,洛阳惠尔纳米科技有限公司,体外诊断试剂和器械在国外统一称为体外诊断医疗器械 属于医疗器械的一部分在我国，体外诊断试剂是指：可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用, 在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中, 用于对人体样本( 各种体液、细胞、组织样本等) 进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品( 物) 、质控品( 物)等概念,根据国家管理类别：按照产品风险程度的高低，体外诊断试剂依次分为第三类、第二类、第一类产品不同类的产品在审查、批准后颁发医疗器械注册证书上由不同的机构进行：,,第三类由国家食品药品监督管理局审查、批准；,,第二类由省级食品药品监督管理局审查、批准；,,第一类由市级食品药品监督管理局审查、批准体外诊断试剂的分类（一）,第三类产品：,,,1,．与致病性病原体抗原、抗体以及核酸等检测相关的试剂；,,,,2,．与血型、组织配型相关的试剂；,,,,3,．与人类基因检测相关的试剂；,,,,4,．与遗传性疾病相关的试剂；,,,,5,．与麻醉药品、精神药品、医疗用毒性药品检测相关的试剂；,,,,6,．与治疗药物作用靶点检测相关的试剂,;,,,,7,．与肿瘤标志物检测相关的试剂,;,,,,8,．与变态反应（过敏原）相关的试剂。

除已明确为第三类、第一类的产品，其他为第二类产品，主要包括：,,,1,．用于蛋白质检测的试剂；,,2,．用于糖类检测的试剂；,,3,．用于激素检测的试剂；,,,4,．用于酶类检测的试剂；,,,5,．用于酯类检测的试剂；,,,6,．用于维生素检测的试剂；,,,7,．用于无机离子检测的试剂；,,,8,．用于药物及药物代谢物检测的试剂；,,,9,．用于自身抗体检测的试剂；,,,10,．用于微生物鉴别或药敏试验的试剂；,,,11,．用于其他生理、生化或免疫功能指标检测的试剂第二类产品：,,1,．微生物培养基（不用于微生物鉴别和药敏试验）；,,,2,．样本处理用产品，如溶血剂、稀释液、染色液等注：第二类产品中的某些产品，例如蛋白质、糖类、激素、酶类等的检测，如果用于肿瘤的诊断、辅助诊断、治疗过程的监测，或用于遗传性疾病的诊断、辅助诊断等，则按第三类产品注册管理在药物及药物代谢物检测的试剂中，如果该药物属于麻醉药品、精神药品或医疗用毒性药品范围，则按第三类产品注册管理第一类产品：,按照受理和审评分为：按照药品受理和审评的和按照 医疗器械受理审评的一、按药品受理和审评的体外诊断试剂：,,*1.ABO,血型定型试剂（盒）,,*,2.,乙型肝炎表面抗原（,HBsAg,）试剂（盒）,,*,3.,丙型肝炎病毒（,HCV,）抗体试剂（盒）,,*,4.,人类免疫缺陷病毒,HIV,抗原,/,抗体诊断试剂（盒）,,*,5.,梅毒螺旋体抗体试剂（盒）,,6.,放免试剂,(,盒,),,注：*号的品种，预期用途为血源筛查时按药品受理和审评，为临床诊断时，按第三类医疗器械进行管理。

体外诊断试剂的分类（二）,二、 按医疗器械受理和审评的体外诊断试剂 ：,,1,、临床血液学和体液学检验试剂,,2,、临床化学检验试剂,,3,、临床免疫学检验试剂 4,、微生物学检验试剂,,5,、组织细胞学检验试剂,,6,、变态反应、自身免疫诊断检验试剂（盒）,,7,、遗传性疾病检验试剂,,8,、分子生物学检验试剂,,9,、其它检验试剂（盒）,体外诊断试剂的分类,（二）,按照技术方法分：,,1.,比色法（颜色反应）；,2.,分光光度法；,,3.,凝集法；,4.,散射法（沉淀反应）；,,5.,透射比浊法（沉淀反应）；,,6.,速率法、终点法（产物或底物量）；,,7.,标记技术；,8.,生物亲和；,9.,免疫技术；,,10.,发光技术；,11.,荧光技术；,12.,放射技术；,,13.,形态分析；,,14.,流式细胞；,15.,电泳技术；,体外诊断试剂的分类,（三）,按照技术方法分：,,16.,克隆技术；,17.,酶技术；,18.,基因技术；,,19.,聚合酶链反应,-PCR,（分子生物技术）；,,20.,杂交技术（分子生物技术）；,,21.,印迹技术；,22.,层析技术；,,23.,色谱技术；,24.,质谱技术；,,25.,溶出法；,26.,伏安法；,,27.,多技术联合应用，如：酶联免疫、免疫比浊、放射免疫、免疫化学发光、免疫层析、荧光杂交、免疫组化、流式荧光、电极溶出伏安法等。

体外诊断试剂的分类,（三）,在实际应用中，单一技术往往不能满足检测需要，因此，诊断试剂会联合使用多种技术常见的体外诊断产品：,,1.,生化分析仪、生化试剂；,,2.,酶标仪、酶免试剂；,3.,免疫化学发光仪及试剂；,,4.,胶体金（乳胶、荧光）免疫层析试剂；,,5.,血细胞分析仪、细胞检测试剂；,,6.,尿液分析仪、尿液检测试剂（试纸）；,,7.,（血气）电解质分析仪、电解质试剂；,,8.,细菌、微生物培养及鉴定试剂；,,9.,免疫组化染色液、液基细胞试剂、免疫印迹试剂,,10.PCR,仪及试剂；,11.,血型试剂；,,12.,流式细胞仪12.,微量元素（原子吸收法）,常见的体外诊断产品技术原理及应用,生化分析仪、生化试剂,全自动生化分析仪；,,肝功类、肾功类等,,比色法、比浊法、散射法、速率法、终点法,酶标仪、酶免试剂,酶标仪：比色计；,,酶免试剂：酶联免疫法比色法,,抗原抗体特异性结合、酶作为标记物和催化物，加入底物产生颜色反应，放入比色计进行比色化学发光仪及试剂,以酶为催化剂，通过氧化反应，使底物发光过氧化物酶（,HRP ),促发光，底物,——,鲁米诺,,,碱性磷酸酶,(AP ),促发光，底物,——,螺旋金刚烷环氧化物苯磷酸酯（,AMPPD),非酶促化学发光及电化学发光,非酶促化学发光：,以吖啶酯、过氧化氢为发光系统，不需要酶的催化。

仪器成本高，技术复杂，尚未国产化（,Abbott),,,电化学发光：,氧化反应是通过电极上的电化学反应产生，标记物为三氯联吡啶钌仪器成本高，技术复杂，尚未国产化Roche,）,,,胶体金（乳胶、荧光）层析试剂,胶体金免疫层析法：将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便胶体金免疫层析法反应示意图,,吸样垫,胶体金,垫,包被T线,包被C线,上样垫,NC,膜,支撑物,HIV,胶体金类快速诊断试剂检测结果,第三类）免疫印迹试剂,免疫印迹试剂盒,:,风湿病自身抗体检测试剂盒（免疫印迹法）,免 疫 印 迹 法 示 意 图,（第四类）蛋白芯片（微阵列）类试剂,蛋白芯片（微阵列）：丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒（蛋白芯片法）；,,多肿瘤标志物检测试剂盒（蛋白芯片法）,（第五类）单抗类试剂,血型定型类试剂：血型定型试剂盒（单克隆抗体）,,免疫组化：,ImmuChem,免疫组化试剂盒（单抗）,,免疫比浊：血清载脂蛋白,A1,免疫比浊试剂盒,,乳胶凝集：,D-dimer,二聚体乳胶凝集试剂盒,（第六类）多抗类试剂,血型定型类试剂：血型定型试剂盒（人血清,/,马血清）,,免疫组化：癌胚抗原检测试剂盒（多抗）,,免疫比浊：,β-,微球蛋白测定试剂盒（免疫比浊法）,,乳胶凝集：沙门氏菌乳胶凝集试剂盒,抗原,抗原：指进入有免疫活性的组织（宿主）而引发免疫应答的物质。

或虽不能引发免疫，但可以同抗体结合的物质蛋白质，多糖，核酸，糖脂，青霉素,,全抗原性具有多个抗原决定族,抗体,宿主对体内存在的外来分子，微生物或其他因子的应答而产生的蛋白质（免疫球蛋白，丙种球蛋白）,,根据抗体性质：多克隆抗体，单克隆抗体,,根据抗体分子结构：,IgA, D, E, G, M,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,IgG,IgM,抗体模式图,单克隆抗体,由一株淋巴细胞产生，针对一种抗原决定族,,抗原免疫小鼠,-,取脾脏,-,与瘤细胞融合,-,克隆筛选,-,单克隆抗体细胞株,,扩增细胞,-,注射入小鼠腹腔,-,采腹水,-,纯化抗体,,流,,程,杂交瘤技术,多克隆抗体,针对多个抗原决定族,,抗原免疫动物,-,采集动物血清,,纯化抗体,（第七类）诊断血清（菌液）,诊断血清：侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清；,,志贺氏菌属四种混合多价血清,,诊断菌液：伤寒沙门菌菌体（,O,）抗原、鞭毛（,H,）抗原诊断菌液,（第八类）血球凝集类试剂,抗体致敏血球：破伤风抗体诊断试剂（血凝法）；,,白喉抗体诊断试剂（血凝法）,（第九类）核酸扩增类试剂,荧光,PCR,：乙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒,,PCR-ELISA,：结核分支杆菌检测试剂盒（核酸扩增酶联免疫法）,,PCR-,毛细管电泳：性染色体多倍体（分型与突变）检测试剂盒；,,PCR-,电泳：,α-,地中海贫血基因诊断试剂盒（,gap-PCR,法）,,转录介导扩增（,TMA,）：沙眼衣原体与结核分枝杆菌检测试剂盒,PCR,基本原理示意图,,PCR,过氧化物酶联物,96,孔酶标法,,加样,分析,观察,,数据,PCR,产物的检测,,96,孔酶标法,,,（第十类）基因芯片（微阵列）类试剂,基因芯片（微阵列）：,α-,地中海贫血基因芯片诊断试剂盒,,PCR-,杂交：人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（,PCR-,反向杂交法）,（第十一类）探针放大（原位杂交）类试剂,bDNA,类：,HIV-1 bDNA,检测试剂盒；,,mRNA,检测试剂盒,(,生物素原位杂交法,),探针放大类试剂,--,支链,DNA,技术,病毒的RNA释放后加入微孔板中——板孔中包被有可与病毒特异结合的一系列靶探针（Target Probe），另一系列靶探针的一端可标记在游离的病毒核酸链上，另一端可与bDNA结合——bDNA信号放大——加入酶标记物对结合的bDNA进行标记——经过清洗后加入底物进行反应，测定反应强度。

第十二类）普通生化类试剂（十万级要求）（包括酶类化学试剂、凝血试剂类等试剂）,酶类化学试剂,:,丙氨酸氨基转移酶（,ALT,）测定试剂盒；,,碱性磷酸酶（,ALP,）测定试剂盒,,凝血试剂,:,凝血酶原时间（,PT,）测定试剂盒；,,组织纤溶酶原激活物（,t-PT,）测定试剂盒,普通生化类试剂,(,十万级要求,),（,1,）,★,原理：,,,临床普通生化类试剂是一类用于测定人血液、尿液等中各项生化指标的试剂含有各种非特异性蛋白成分，要求在十万级洁净环境中生产检测方法均为比色法，方法学原理均为显色反应★,产品涉及：,,1,、酶类：含酶、辅酶与牛血清白蛋白等、剂型为干粉或液体2,、血凝类：试剂组分中含有其他活性类组分（如兔脑粉等）★,生产工艺：原材料称量、溶解、定容、中试、分装、组装、成品检验★,关键控制点：原料称量、配制、物料平衡《,细则,》,要求：应在,10,万级净化环境中进行生产操作第十三类）普通生化类试剂（清洁环境）（包括一般化学试剂、血气电解质类、血液分析仪用试剂类等）,一般化学试剂：无机离子（铝、镉等）测定试剂盒；,,白蛋白测定试剂盒（,BCG,法）；,,总胆固醇测定试剂盒（,COD-CE-PAP,法）,,血气电解质,:,电解质分析仪随机试剂；生化分析仪用稀释液、冲洗液,,血液分析仪用试剂,:,血液分析仪用稀释液、溶血剂,普通生化类试剂（清洁环境）,★,原理：与普通生化试剂（十万级要求）类相同。

★,产品涉及：无机离子检测、血气电解质类、血液分析仪用试剂类等试剂★,工艺要求：除生产可在清洁环境中进行操作外，生产工艺和关键控制点与普通生化试剂（十万级要求）类相同第十四类）干化学类试剂,干化学试剂（条、卡或盒）：干化学尿液分析试纸条；,,尿微量白蛋白（,UALB,）测试卡,干化学类试剂,,◆,原理：以滤纸为载体，将各种试剂组分浸渍后干燥，作为试剂层，固定在支持物上，试纸上的各测试块与被测样品中的成分发生酶化学反应，使试纸块发生不同的颜色变化，颜色深浅与样品中的成份含量成正比，再由光电耦合元件对测试块的颜色进行判读，达到测定样品中化学成分含量的目的◆,生产工艺主要环节：,,,特定试剂的配制、试剂条的浸润、干燥、切割、分包装等；,,（第十五类）药敏类试剂,药敏纸片（卡）：抗生素药敏纸片；随机专用药敏试剂（盒）（卡）,药敏类试剂,,●,原理：是将抗菌药物吸收到特定的纸片中，然后置于已接种待测定菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环（带）由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，故可以根据抑菌环的大小，判断细菌对药物的敏感度通过药物敏感试验，我们可以找出针对于某些致病菌的敏感药物，从而对临床中的细菌性疾病的治疗提供指导。

●,工艺：,,,配抗生素溶液,,,浸泡 干燥（冻干或烘干） 分包装,,,纸 打 孔,,,●,药敏纸片的关键工艺是纸片的浸泡，它直接影响产品质量第十六类）培养基类,马丁干粉培养基；人胚胎干细胞无血清培养基,培养基,,培养基（,Medium,）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等有的培养基还含有抗菌素和色素,按所用原料不同，可分为天然培养基（如肉汤）和合成或综合培养基（应用化学药品配成）,培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同,一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在,2~6,℃,的冰箱内,厂房要求：普通洁净间，有除湿、去粉尘设施谢谢,,。