高效液相色谱柱柱效测定.docx

高效液相色谱柱柱效测定一、实验目的 1．了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 2．学习高效液相色谱仪的使用3．学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法二、基本原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相 和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的气相色谱中评价色谱柱柱效的方法 及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：u tn = 5.54 —r-l Y1/2式中：tR为组分的保留时间Ry1/2为色谱峰的半峰宽度Y 为色谱峰的峰底宽度三、仪器和试剂1．仪器 1：高效液相色谱仪（紫外检测器）2．仪器 2：高效液相色谱仪（紫外检测器）3. 50p l微量进样器 4．试剂：苯、萘、联苯、甲醇均为分析纯；纯水为重蒸的去离子水配制成含苯、萘、联苯各30p l/ml的甲醇溶液四、实验条件1. 色谱柱1长15cm，内径4.6mm,装填10pm的C-18烷基键合固定相2. 色谱柱2长15cm，内径4.6mm,装填5pm的C-18烷基键合固定相3. 流动相 甲醇:水（85:15）,流量0.8ml/min4. 紫外光度检测器 波长254nm,灵敏度0.085. 进样量5p l五、实验步骤1. 根据实验条件和实验录像指导，按 KLC321 仪器操作步骤将仪器调节至进样状态， 待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。

2. 吸取5p l苯、萘、联苯的甲醇溶液进样，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录 色谱数据文件名3. 用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据4. 在仪器上测定色谱柱2的塔板数，打印色谱图并比较色谱柱柱效差异六、 数据记录及处理1 .记录实验条件 1）色谱柱与固定相（ 2）流动相及其流量、柱前压（ 3）检测器及其灵敏度（ 4）进样量2. 记录色谱峰的保留时间tR和相应色谱峰的半峰宽丫1/2R 1/23. 分别计算苯、萘、联苯在该色谱柱上的理论塔板数n和理论塔板高度七、 思考题1．由本实验计算出的各组分理论塔板数说明什么问题？ 2．紫外光度检测器是否适用于检测所有有机化合物，为什么？ 3. 试分析色谱柱1和色谱柱2 测定结果的差异及产生的原因。