有效磷的测定方法.docx

有效磷的测定方法方法1、钼锑抗比色法解磷菌发酵菌液(用什么培养基？？)经离心处理后，取上清液，用2，4．二硝基酚作为指 示剂加入1．2滴，上清液中可溶性磷酸盐可与钼锑抗显色剂反应，生成磷钼蓝，于适宜波长处进 行比色测定，根据标准曲线计算出有效磷的含量，通过有效磷的浓度大小表示微生物溶磷能力的 高低1、实验所用溶液(1) 钼锑抗贮存液的制备首先量取硫酸153ml(p=约1.84g/ml)缓缓地倾入约400m l蒸馏水中，搅拌、冷却然后称取 lO.Og钼酸铵溶于约60°C的300m 1水中，冷却然后将上述硫酸溶液缓缓加入此钼酸铵溶液中, 再加入5g/L酒石酸锑钾溶液100ml,最后用水稀释至l L,盛于棕色瓶中，放于阴暗处保存2) 钼锑抗显色剂准确称量抗坏血酸1.5g，溶于100ml钼锑抗贮存液中此溶液必须现配现用，有效期为1d.(3) 磷标准溶液(5 mg/L)准备称取0.439g磷酸二氢钾在105C烘箱中烘干2 h后冷却，溶于200 ml水中，加人5 m1硫酸 (p约1. 84g/ml)，转入l L容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线，即为磷标准液100mg/L 取此溶液准确稀释20倍即为5 mg/L磷标准溶液，此溶液不宜久放。

2、 工作曲线的绘制分别吸取5mg/L磷标准溶液0、2、4、6、8、10、12ml于50m1容量瓶中，加水稀释大约至 20m1，加入5ml钼锑抗显色剂，摇匀后定容，即得0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mg/L 磷标准系列溶液，在室温20C-25C下放置4 h后，以0mg/L磷标准液为对照溶液，其余磷标 准溶液与待测液同时比色，并记录在该峰值下的吸光度以测得的吸光度为纵坐标，磷浓度 (mgL)为横坐标，绘制成工作曲线3、 菌液的制备在300 ml三角瓶中分别加入50 m1培养基，121C灭菌20 min无菌操作，每瓶接入已经 活化的待测菌种，不接种菌种的作为空白对照，置于30C摇床上，160 r/min振荡培养5 d~7 d后，取出测定有效磷含量4、 样品的测试发酵液在4000 r / min的条件下离心30 min，吸取上清液，用蒸馏水稀释适当倍数后， 量取若干毫升加入50 ml容量瓶中，滴加2. 3滴2, 4-二硝基酚指示剂溶液，用1 mol/L氢氧 化钠溶液或硫酸溶液调节pH至溶液刚呈现微黄色(小心缓加，边加边摇)，然后加入钼锑抗显 色剂5m1摇匀，定容至刻度空白试验发酵液做相同的处理，在室温20. 25C下放置4 h左右， 在721分光光度计上660 nm处比色，测定吸光度，以空白试验发酵液为对照液调零点，读取 吸光度值，在工作曲线上查出磷标准液的浓度。

方法2 磷钼蓝比色法(1)磷钼蓝比色法原理在含磷的溶液中，加入钼酸铵，在一定酸度条件下，溶液中的磷酸与钼酸络合形成黄色的磷钼杂合酸 一磷钼黄HP0+12HM0=H3[PMo 0 ]+12H03 4 2 0 4 l2 40 2在适宜的试剂浓度下，加入适当的还原剂(sncl2或抗坏血酸)，使磷钼酸中的一部分M06+还原为 Mo5+，生成磷钼蓝(磷钼杂多蓝)一HP0 • 10Mn0 • M0 0或H3P04 • 8Mn0 • 2Mn 0在一定的范围内，蓝色的深3 4 3 2 5 3 2 5度与磷含量成形比，这是钼蓝比色法的基础用可见分光光度计在波长660nm处测定钼蓝的吸光值，以定量 分析磷含量⑵绘制0D6一磷含量标准曲线：准确吸取磷标准使用液0、0.2、0.4、0. 6、0. 8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0mL(相 当于含磷0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 u g)分别置于10mL具塞试管中，加入钼 蓝比色混合液5mL，加水至刻度、混匀，于45°C水浴25min后，以0号管作空白，使用可见分 光光度计在660nm波长处测定吸光度，以测出的吸光度对磷含量绘制磷标准曲线。

3)培养液中可溶性磷含量的测定接菌后分别在24、48、72、96、120小时取样，将培养液4500r / min离心15min,准确吸取5mL 上清液置于10mL具塞试管中，加入5mL比色混合液，于45C水浴25min,使用紫外分光光度计 在660nm波长处测定吸光度，利用0D66磷含量标准曲线计算培养液中的磷含量解有机磷的 测定则是在上清液中加入过硫酸钾溶液，120C下反应30min，然后重复以上过程。