重组白细胞介素2.ppt

重组人白细胞介素-2,Recombinant Human Interleukin-2,主要内容,一、基本信息 二、生产制备 三、药物信息 四、注意事项 五、发展前景,一、基本信息,为多肽类免疫增强剂，是一种淋巴因子 刺激B细胞增殖分化和分泌抗体 诱导干扰素和多种细胞因子的分泌 用于肿瘤辅助治疗和癌性胸、腹水的治疗 也可各种自身免疫病的治疗 对乙型肝炎、麻风病、肺结核、白色念珠菌感染等具有一定的治疗作用二、生产制备,生产制备的方式主要有两种： 1、传统工艺制备 2、基因工程制备 其中以第二种方法为主,传统工艺流程,,鸡瘟病毒，PHA,培养液,[启动诱生] 37℃,人白细胞粉,诱生白细 胞培养液,,[灭活病毒，分离],HCl,NaOH,pH = 2~2.5,pH = 7.2~7.4,离心,上清液,,35%硫酸铵,4 ℃，24h，离心,上清液,,85%硫酸铵,4 ℃，24h，离心,沉淀,,10mmol/LPBS透析,pH = 6.5，24h,透析内液,,[亲和层析] 上Sepharose柱,pH = 6.5,亲和载体I,,[洗涤] 0.4mol/LNaCl，PBS,pH = 6.5,亲和载体Ⅱ,,[吸收] 1.0mol/LNaCl,PBS透析,pH = 6.5,IL-2组分,,[凝胶层析] 上Utrogel柱,pH = 6.5,凝胶载体,,0.2mol/Ltris-HCl含0.1%PEG 2%正丁醇，0.2mol/L甘氨酸,pH = 7.6,IL-2,基因工程制备流程,IL-2 cDNA 文库的构建,,IL-2表达,利用mRNA杂交筛选,IL-2 cDNA克隆,,与质粒载体pLY-4连接，并转入大肠杆菌,,纯化的IL-2,制备包涵体，并用凝胶过滤层析纯化,cDNA文库的构建,IL-2mRNA,,逆转录酶,逆转录成单链cDNA,,末端脱氧核苷酸转移酶,cDNA末端连接dCMP残基，寡聚（dG）12~18为引物,,DNA聚合酶I,,双链 cDNA,蔗糖密度梯度离心,cDNA片段,,G-C加尾法,插入到pBR322质粒的PstI位点,,重组质,粒转化大肠杆菌,,得到IL-2 cDNA文库,三、药物信息,药典中有以下三种药物含有重组人白细胞素介素-2： 注射用重组人白细胞介素-2 重组人白细胞介素-2注射液 注射用重组人白细胞介素-2（ Ⅰ ）,注射用重组人白细胞介素-2,高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素。

外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体重组人白细胞介素-2注射液,高效表达人白细胞介素-2的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素 外观为无色或者微黄色澄明液体注射用重组人白细胞介素-2（ Ⅰ ）,高效表达人白细胞介素-2 （ Ⅰ ）基因的大肠杆菌，经过发酵、分离和高度纯化后获得的重组人白细胞介素-2 （ Ⅰ ）冻干制成，含有适宜稳定剂，不含添加剂和抗生素 外观为白色或者微黄色疏松体，加灭菌注射水后迅速溶解为澄明液体 人白细胞介素-2 （ Ⅰ ）基因是人白细胞介素-2基因序列中原125位编码半胱氨酸的序列突变为编码丝氨酸的序列后的突变基因,用法用量,静脉滴注：10万一80万国际单位； 皮下注射：50万—100万国际单位； 胸腹腔注射：30万—l00万国际单位； 介入动脉灌注：40万—l00万国际单位； 肿瘤灶局部给药：根据瘤体大小决定用药剂量一般剂量为一次20万国际单位(IU) 注：药物采用氯化钠溶解四、注意事项,注意事项： 各种不良反应中最常见的是发热、寒战，而且与用药剂量有关； 个别患者可出现恶心、呕吐、类感冒症状； 皮下注射者局部可出现红肿、硬结、疼痛； 使用较大剂量时，可能会引起毛细血管渗漏综合征，表现为低血压、末梢水肿等。

四、注意事项,禁忌： 1、对本品成份有过敏史的病人 2、高热、严重心脏病、低血压者 严重心肾功能不全者、肺功能异常或进行过器官移植者 3、重组人白细胞介素-2既往用药史中出现过与之相关的毒性反应五、发展前景,目前研究是对其在用药前进行化学修饰，主要采用PEG修饰： 具体有三聚氯氰活MPEG修饰 MPEG 硝基苯基碳酸盐修饰 修饰物和rhlu-2的投入比、反应环境的PH、修饰反应的时间、1%PEG4000的加入都会影响到修饰产物的活性五、发展前景,修饰后的产物经过疏水层析和凝胶过滤即可被提纯 目前已经证明rhIL-2 经不同的 PEG 化处理后，其循环半衰期均有不同程度的提高， 其水溶性也得到极大提高，可不用 SDS 助溶在常温下保持长期稳定参考文献,1、《中国药典》2010版第三部； 2、《重组人白细胞介素-2 的化学修饰》，吉林大学，邹显峰； 3、《重组人白细胞介素-2对人胃癌细胞SGC7901/ADR多药耐药性的逆转研究》, 大连医科大学，屈重霄； 4、《重组人白细胞介素-2的分离纯化及性质鉴定》，中国药科大学，李海娟,陈炜 20095324,。