药物含量测定方法与验证.ppt

第四章第四章 药物药物的含量测定的含量测定方法方法与与验验证证Ñ 定量分析方法的分类与特点Ñ 样品的前处理方法Ñ 药品分析方法的验证¨第第一一节节 定量分析方法的定量分析方法的分类与分类与特点特点 定量分析方法的计算定量分析方法的计算–药典对药物的药典对药物的含量限度的表示方法含量限度的表示方法•原料药：多以原料药：多以% %表示，有二种情况表示，有二种情况–①①按原料药本身形式计算其含量按原料药本身形式计算其含量–例例 ：：阿司匹林阿司匹林（（P.P.1111）按干燥品计不得）按干燥品计不得少于少于9 99 9.5%.5%–对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0%99.0%–凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过量上限不得超过101.0%101.0%–②②由于药物组成不定，需以另一种稳定形由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量式计算含量–例例 ：氢氧化铝：氢氧化铝 [Al(OH) [Al(OH)3 3] ]以含三氧化二铝以含三氧化二铝（（AlAl2 2O O3 3）计，不得少于）计，不得少于48 .0%48 .0%•制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况–①①按标示量计算按标示量计算–标示量即规格量，生产厂家的处方量。

它标示量即规格量，生产厂家的处方量它是以标示量为是以标示量为100%100%，将测得含量与之相比，将测得含量与之相比较，求出相对于标示量的百分含量较，求出相对于标示量的百分含量–例：维生素例：维生素B B1 1注射液含维生素注射液含维生素B B1 1应为标示应为标示量的量的95.0%95.0%～～105.0%105.0%–干酵母片含蛋白质不得少于标示量的干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%40.0%–②②直接用直接用% %含量规定范围（主药含量微）含量规定范围（主药含量微）–例：复方碘溶液例：复方碘溶液– 含含 I 应为应为4 .5% ～～5 .5% – 含含 KI 应为应为9 .5% ～～10 .5% –复方氯化钠注射液复方氯化钠注射液– 含总含总Cl-量量 0.52%～～0.58% – 含含KCl量量 0.028%～～0.032%– 含含CaCl2·2H2O 0.031%～～0.035%–③③以重量规定含量范围（多为复方制剂）以重量规定含量范围（多为复方制剂）–例：复方炔诺酮片例：复方炔诺酮片– 炔诺酮炔诺酮 0.54～～0.66mg /片片 – 炔雌醇炔雌醇 31.5～～38.5μg /片片 –复方磺胺甲噁唑片复方磺胺甲噁唑片– SMZ 0.360～～0.440 g /片片– TMP 72.0～～88.0mg /片片一、容量分析法一、容量分析法————滴定法滴定法aA+bB cC+dDaA+bB cC+dD（（ A—— A——被测药物；被测药物； B—— B——滴定液）滴定液）（一）、滴定度的概念（一）、滴定度的概念–T---T---与与1ml1ml规定浓度的标准溶液所相规定浓度的标准溶液所相当的被测物的当的被测物的mgmg数。

数二）、滴定度的计算（二）、滴定度的计算–T=MT=MA A ×m ×mB B × a/b × a/b （（mg/ml mg/ml ））（三）含量计算（三）含量计算 1 1、直接滴定法、直接滴定法 原料药以原料药以% %表示的制剂表示的制剂样品样品% = V×F×T/W×100% % = V×F×T/W×100% F = NF = N实实 / N/ N理理2 2、间接滴定法、间接滴定法（（1）、剩余滴定法中须做空白）、剩余滴定法中须做空白样品样品% =（（V空白空白－－ V测测 )样样 ×F×T/W×100% （（2）、生成物滴定法）、生成物滴定法aA+bB=cC（生成物）（生成物）+dD ，，cC+eE=fF+gG 找到找到A与与E的关系，计算滴定度（的关系，计算滴定度（p.146）（自学））（自学） •相当于标示量相当于标示量% %的计算公式的计算公式–片剂：片剂：–V×F×T/W×平均片重平均片重/标示量标示量×100%–针剂：针剂：– V×F×T/W/标示量（标示量（g/ml）） ×100%•以重量以重量/片计的计算公式片计的计算公式–V×F×T/W×平均片重平均片重=重量重量/片片 司司可可巴巴比比妥妥钠钠胶胶囊囊含含量量测测定定：：精精密密称称取取内内容容物物0.1385g0.1385g，，置置碘碘量量瓶瓶中中，，加加水水10mL10mL，，振振摇摇使使溶溶解解，，精精密密加加溴溴滴滴定定液液（（0.05mol/L0.05mol/L））25 25 mLmL，，再再加加盐盐酸酸5 5 mLmL，，立立即即密密塞塞并并振振摇摇1 1分分钟钟，，暗暗处处静静置置1515分分钟钟后后，，加加碘碘化化钾钾试试液液10 10 mLmL，，立立即即密密塞塞，，摇摇匀匀，，用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液（（0.1mol/L0.1mol/L，，F=0.992F=0.992））滴滴定定，，至至近近终终点点时时加加淀淀粉粉指指示示液液，，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试试验验校校正正。

已已知知：：样样品品消消耗耗硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液（（0.1mol/L0.1mol/L））17.05 17.05 mLmL，，空空白白试试验验消消耗耗25.22mL25.22mL，，每每1mL1mL溴溴滴滴定定液液（（0.05mol/L0.05mol/L））相相当当于于13.01mg13.01mg的的司司可可巴巴比比妥妥钠钠计计算算本本品品相相当当于于标标示示量量的的百百分分含含量量（（规规格格0.1g0.1g，，2020粒粒胶胶囊囊内内容容物物重重2.7506 g2.7506 g）？）？ (p.90 (p.90－生成物滴定法－生成物滴定法) )司可巴比妥钠的滴定度计算司可巴比妥钠的滴定度计算 1摩尔摩尔司可巴比妥钠与司可巴比妥钠与1 1摩尔溴相当摩尔溴相当T=MA×mB×a/b＝＝260.2×0.05×1/1＝＝13.01mg/ml(25.22－－ 17.05)× 13.01×0.992× 2.7506 0.1385× 0.1× 1000×× 20×100% ¨精精密密量量取取维维生生素素C C注注射射液液4mL4mL（（相相当当于于维维生生素素C C 0.2g0.2g）），，加加水水15mL15mL与与丙丙酮酮2mL2mL，，摇摇匀匀，，放放置置5 5分分钟钟，，加加稀稀醋醋酸酸4mL4mL与与淀淀粉粉指指示示液液1mL1mL，，用用碘碘滴滴定定液液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴滴定定至至溶溶液液显显蓝蓝色色，，并并持持续续3030秒秒钟钟不不退退。

已已知知：：注注射射液液规规格格2mL:0.1g2mL:0.1g，，消消耗耗0.05mol/L0.05mol/L碘碘滴滴定定液液（（F=1.005F=1.005））22.45mL22.45mL，，维维生生素素C C的的分分子子量量为为176.12176.12，问：，问：¨（（1 1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？¨（（2 2））每每1mL1mL碘碘滴滴定定液液(0.05mol/L)(0.05mol/L)相相当当于于多多少少mgmg的的维生素维生素C C？？¨（（3 3）求本品相当于标示量的百分含量？）求本品相当于标示量的百分含量？维生素维生素C C1摩尔维生素摩尔维生素C与与1摩尔碘相当摩尔碘相当T＝＝0.05×176.12×1/1=8.806mg/ml标示量标示量%=T×F×V/W×标示量标示量×100% 8.806×22.45×1.005= 4×1000×0.05 ×100% =99.34%二、光谱分析二、光谱分析（一）、（一）、UV法法1、标准对照法（一点法）、标准对照法（一点法）–A样样/A标标 = C样样/C标标，，–样品样品%= A样样/A标标 × C标标×F/W×100%–F=稀释倍数稀释倍数– W=取样量取样量2、百分吸收系数法（、百分吸收系数法（A= E1%cm×C×L））– C% = A / E1%cm –样品样品% = A / E1%cm ×F/W–F = 稀释倍数和浓度换算因子稀释倍数和浓度换算因子–W = 取样量取样量 3、标准曲线法（、标准曲线法（y=bx＋＋a））–由标准曲线或回归方程求出由标准曲线或回归方程求出C样样，再根据，再根据F，，W求出样品求出样品%。

4、计算分光光度法、计算分光光度法–双波长法，差示法均可应用比尔定律的双波长法，差示法均可应用比尔定律的公式，以公式，以△△A代替吸收度代替吸收度A¨差示分光光度法差示分光光度法¨原原理理：：利利用用被被测测物物在在两两种种不不同同溶溶液液中中吸吸收收光光谱谱发发生生了了特特征征性性变变化化，，而而共共存存干干扰扰物物在在该该两两种种溶溶液液中中未未引引起起光光谱谱变变化化，，测测定定两两种种溶溶液液的的吸吸收收度度差差值值（（ΔA值值）），，根据根据ΔA与被测物浓度与被测物浓度C的线性关系进行定量测定的线性关系进行定量测定¨方法：方法：¨ 一定量一定量+酸酸 → 一定体积一定体积 （测定）（测定）→ A测测¨ 同样量同样量+碱碱 → 同样体积同样体积 （参比）（参比）→ A参参¨ A测测－－A参参=△△A样样¨∵∵干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即¨△△A杂杂=0，，∴∴ △△A样样只与样品浓度只与样品浓度C呈线性关系呈线性关系供试品220 240 260 280nm ΔA•pH10pH10溶液，溶液，  240nm240nm •pH13pH13溶液，溶液， 255nm255nm•酸性溶液，无酸性溶液，无 maxmaxΔA样样=A pH13pH13- - A pH10pH10ΔA标标=A pH13pH13- - A pH10pH10C样样=ΔA样样/ΔA标标×C×C标标•特点：具备一般分光光度法简易、快速、特点：具备一般分光光度法简易、快速、直接读数的优点直接读数的优点;无需事先分离，又能消除无需事先分离，又能消除干扰干扰;提供一个近似理想的参比溶液。

提供一个近似理想的参比溶液ΔA¨称称取取己己酸酸孕孕酮酮0.0105g,0.0105g,加加无无水水乙乙醇醇溶溶解解后后, ,置置10ml10ml容容 量量 瓶瓶 中中 , ,稀稀 释释 至至 刻刻 度度 , ,摇摇 匀匀 吸吸 取取1.00ml,1.00ml,置置100ml100ml容容量量瓶瓶中中, ,加加无无水水乙乙醇醇稀稀释释至至刻刻度度, ,置置1cm1cm吸吸收收池池内内进进行行测测定定, , 根根据据下下列列数数据据, ,求求出出按按干干燥燥品品计计算算的的己己酸酸孕孕酮酮百百分分含含量量A=0.390, EA=0.390, E1%1%1cm1cm=393=3930.390 0.390 ××1010393 393 × × 0.01050.0105 × 100% = 含量含量% % 复复方方磺磺胺胺甲甲噁噁唑唑片片中中磺磺胺胺甲甲噁噁唑唑（（SMZSMZ））的的含含量测定：量测定： 精精密密称称取取本本品品（（每每片片含含SMZSMZ为为0.4g0.4g））1010片片，，总总重重量量为为5.5028g5.5028g精精密密称称取取SMZSMZ对对照照品品0.0501g0.0501g、、片片粉粉0.0756g0.0756g，，按按双双波波长长分分光光光光度度法法测测定定SMZSMZ含含量量。

在在257nm257nm波波长长处处测测得得：：对对照照品品溶溶液液的的吸吸收收度度A A对对为为0.3300.330，，供供试试溶溶液液的的吸吸收收度度A A样样为为0.3720.372在在304nm304nm波波长长处处测测得得：：对对照照品品溶溶液液的的吸吸收收度度A A对对为为0.0090.009，，供供试试溶溶液液的的吸吸收收度度A A样样为为0.0210.021计计算算SMZSMZ的的含含量量相相当于标示量的百分含量当于标示量的百分含量257nm257nm304nm304nm对照品对照品供试品供试品0.3300.3300.3720.3720.0090.0090.0210.021 0.372- 0.021 0.0501 5.50280.0501 5.5028 0.330- 0.009 0.0756 10 0.40.0756 10 0.4×××××××100%×100%=99.69%¨对乙酰氨基酚片剂对乙酰氨基酚片剂溶出度溶出度测定：测定：¨取取标标示示量量为为0.3g0.3g的的本本品品6 6片片，，依依法法在在1000mL1000mL溶溶剂剂中中测测定定溶溶出出度度。

经经3030分分钟钟时时，，取取溶溶液液5mL5mL滤滤过过，，精精密密吸吸取取续续滤滤液液1mL1mL，，加加0.04%0.04%氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液稀稀释释至至50mL50mL，，摇摇匀匀，，在在257nm257nm波波长长处处测测得得每每片片的的吸吸收收 度度 分分 别别 为为 0.3450.345，， 0.3480.348，， 0.3510.351，， 0.3590.359，，0.3560.356和和0.3330.333，，按按其其百百分分吸吸收收系系数数为为715715计计算算出出各各片片的的溶溶出出量量限限度度为为标标示示量量的的80%80%并并判判断断其其溶出度是否符合规定溶出度是否符合规定0.345×× 50×× 1000715×× 0.3= 80.4%片片1：：片片2……三、色谱分析（三、色谱分析（HPLC和和GC））•内标法：内标法：–F = A 内内/ A 标标×C标标/C内内–样品样品% = A样样/A内内×F×C内内×稀释倍数稀释倍数/W×100%–或或C样样= R样样/内内/ R标标/内内 × C标标–（（R代表峰面积比值）代表峰面积比值）•外标法（同光谱法）外标法（同光谱法）:–标准曲线法标准曲线法–标准对照法标准对照法(一点法一点法)–系统适用性试验系统适用性试验•柱效（理论板数）柱效（理论板数） n=5.54(t n=5.54(tR R/W/Wh/2h/2) )2 2•分离度分离度 R= R= •拖尾因子拖尾因子 T= T= •重复性重复性 取对照品或样品溶液，连续进样取对照品或样品溶液，连续进样5 5次，测得峰面积相对标准差次，测得峰面积相对标准差RSDRSD应小于应小于2.0%2.0%2(t2(tR2R2-t-tR1R1) )W W1 1+W+W2 2W W0.05h0.05h2d2d1 1(R≥ 1.5)(R≥ 1.5)(T=0.95(T=0.95～～1.05)1.05) T=W W0.05h0.05h/2d/2d1 1d1hW W0.05h0.05h0.05h¨ HPLCHPLC测定复方测定复方SMZSMZ片中片中SMZSMZ含量，以含量，以SGSG为内标，测得为内标，测得¨标标准准液液中中：：SMZSMZ峰峰高高14.90cm14.90cm，，浓浓度度8.0mg/mL8.0mg/mL，，SGSG峰峰高高13.80cm13.80cm，浓度，浓度4.0mg/mL4.0mg/mL。

¨样样品品液液中中：：SMZSMZ峰峰高高11.92cm11.92cm，，SGSG峰峰高高16.20cm16.20cm，，浓浓度度4.0mg/mL4.0mg/mL¨求样品液中求样品液中SMZSMZ的浓度为多少？（进样量均为的浓度为多少？（进样量均为5 5 l l））13.8×× 8.014.9×× 4.0F=样品（样品（mg/mLmg/mL）） =11.92×× 4.016.2=1.852×× F =5.45¨用用HPLC法法测测得得某某药药保保留留时时间间为为12.54min，，半半高高峰峰宽宽3.0mm（（纸纸速速5mm/min）），，计计算柱效？算柱效？¨N=5.54（（12.54/3.0））2 ？？¨N=5.54[12.54/（（3.0/5））]2 ？？N=2420¨丙丙酸酸睾睾酮酮含含量量测测定定采采用用高高效效液液相相法法：：取取本本品品对对照照品品适适量量，，精精密密称称定定，，加加甲甲醇醇定定量量稀稀释释成成每每1mL中中约约含含1mg的的溶溶液液精精密密量量取取该该溶溶液液和和内内标标溶溶液液（（1.6mg/mL苯苯丙丙酸酸诺诺龙龙甲甲醇醇溶溶液液））各各5mL，，置置25mL量量瓶瓶中中，，加加甲甲醇醇稀稀释释至至刻刻度度，，摇摇匀匀，，取取10 L注注入入液液相相色色谱谱仪仪，，记记录录色色谱谱图图。

另另取取本本品品适适量量，，同同法法测测定定，，内内标标法法计计算算含含量量已已 知知 对对 照照 品品 溶溶 液液 为为 1.052mg/mL，， 样样 品品 溶溶 液液 为为1.032mg/mL，，测测得得对对照照液液中中丙丙酸酸睾睾酮酮和和内内标标准准的的峰峰面面积积分分别别为为54678和和61258，，样样品品液液中中丙丙酸酸睾睾酮酮和和内内标标准准的的峰峰面面积积分分别别为为52213和和61228，，计计算算丙丙酸酸睾睾酮酮的的含含量量？？¨52213 / 61228¨54678 / 61258×1.052/1.032=？97.4% 第第二二节节 样品样品分析分析的前处理方的前处理方法法vv一、概述一、概述ll含金属药物有：富马酸亚铁、葡萄糖含金属药物有：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等酒石酸锑钾等ll含卤素药物有：泛影酸、三氯叔丁醇、含卤素药物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等碘番酸、磺溴酞钠等ll根据所含金属或卤素在分子中结合的根据所含金属或卤素在分子中结合的牢固程度，分析前采用不同方法进行牢固程度，分析前采用不同方法进行预处理。

预处理v不经有机破坏处理的分析方法l直接测定法l金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中电离，可选用适当方法直接测定例：l富马酸亚铁——在热的稀矿酸中溶解，释放出亚铁离子，用硫酸铈滴定液直接滴定 l葡萄糖酸锑钠——为组成不定的五价锑化合物，采用间接碘量法测定锑的含量，在酸性条件下，葡萄糖酸锑钠与碘化钾试液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定l枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌——EDTA滴定法测定含量l经水解后测定法l本法适合于卤素与脂肪碳链相连者，经加热回流使其水解，有机结合的卤素转变成无机的卤素离子，然后用适当方法进行测定例：l三氯叔丁醇的含量测定CCl3－C(CH3)2－OH + 4NaOH3NaCl然后用银量法测定氯化钠含量回流•注意l沉淀转化（加有机溶剂）lFe3+的水解（酸性中滴定）l硬脂酸镁——与定量硫酸标准溶液共沸，水解生成硬脂酸和硫酸镁，剩余的硫酸标准溶液用氢氧化钠标准溶液回滴l经氧化还原后测定法l碱性还原后测定——当卤素结合于芳环上时，因结合较牢固，需在碱性条件下加还原剂回流，使X-C键断裂，形成无机卤化物后测定。

例泛影酸的含量测定NaI＋ AgNO3→ AgI↓ 曙红钠指示剂 l酸性还原后测定l例碘番酸，JP采用冰醋酸酸性条件下用锌粉还原，硝酸银滴定液滴定，以四溴酚酞乙酯为指示剂，终点时沉淀由黄色变为绿色lUSP，BP，ChP均采用氢氧化钠碱性条件下用锌粉还原，然后用硝酸银滴定液滴定，但指示终点方法不同， ChP采用吸附指示剂曙红钠， USP采用吸附指示剂四溴酚酞乙酯，BP采用电位法指示终点 v经有机破坏的分析方法l湿法破坏lHNO3-HClO4——破坏力强，反应激烈，注意勿将内容物蒸干，以免爆炸适用于生物样品的破坏，所得无机金属离子为高价态对含氮杂环药物不适宜lHNO3- H2SO4 ——适用于大多数有机药物的破坏，所得无机金属离子为高价态对碱土金属药物不适用，可改用HNO3-HClO4 法lH2SO4-SO42-——本法所得金属离子为低价态，常用于含砷或锑有机药物的破坏若用本法破坏低碳药物时，宜添加适量淀粉等多碳化合物，以保证破坏过程中将金属离子转变为低价态l其他湿法破坏lHNO3- H2SO4 -HClO4lH2SO4 –H2O2lH2SO4 –KMnO4l湿法破坏的仪器一般为凯氏烧瓶。

l干法破坏l将有机物置坩埚中，加Ca(OH)2或无水 Na2CO3或轻质氧化镁，灼烧灰化，先小火加热，然后高温灰化l注意：温度应控制在420℃ 以下本法所得灰分往往不易溶解，但不能丢弃l本法适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环），以及不能用硫酸破坏的有机药物，不适用含挥发性金属的有机药物l氧瓶燃烧法（Oxygen flask bustion method）l仪器装置铂金丝硬质玻璃燃烧瓶样品l称样l燃烧分解操作（通O2 1-2 min，燃烧）l吸收液l水-NaOH（含碘、氯药物）l例盐酸胺碘酮、碘苯酯、甲状腺粉l水- NaOH -H2O2（含溴、含硫药物）l例磺溴酞钠l水（含氟药物）l硝酸溶液（含硒药物）l注意注意：l防爆，燃烧瓶应洗涤干净；l氧气要充足，燃烧应完全；l测定含氟药物应用石英燃烧瓶l燃烧分解后的测定方法l滴定法l银量法——含氯、溴药物（例磺溴酞钠）l碘量法——含碘药物（例盐酸胺碘酮）l分光光度法——含氟药物l例氟尿嘧啶含氟量测定：取15mg样品，经氧瓶燃烧破坏后加水稀释至100ml要求含氟量应为13.1% -14.6%l氟尿嘧啶M=130.08l氟的原子量为18.9984l理论含氟量为：l18.9984/ 130.08*100%=14.61%l测定含量时以标准氟化钠（20ugF/ml）为对照，置2cm比色皿中，以试剂为空白，于610nm波长处测定对照和样品的吸收度。

计算含氟量第三节第三节 药品药品质量标准质量标准分析方法验证分析方法验证l准确度准确度l表示测定结果与真值的符合程度，表示测定结果与真值的符合程度，用回收率表示用回收率表示l要求要求绝对回收率绝对回收率≥95%≥95%l精密度精密度————一组数据之间彼此接一组数据之间彼此接近的程度近的程度l①    ①    一般要求一般要求样本量样本量n≥5n≥5    l ②  ② 日内（批内）、日间（批日内（批内）、日间（批间）精密度间）精密度l③ RSD③ RSD一般一般≤2%≤2%l特异性（专属性）特异性（专属性）l是复杂样品分析时相互干扰程度的是复杂样品分析时相互干扰程度的量度量度, ,是指样品中有其他组分共存时是指样品中有其他组分共存时该方法对供试物质准确而专属的测该方法对供试物质准确而专属的测定能力可取空白样品试验可取空白样品试验l灵灵敏敏度度————表表示示一一种种方方法法可可以以检检测测出出有关化合物的最小量有关化合物的最小量, ,常用表示方法有：常用表示方法有：l检检测测限限（（LODLOD））————表表示示药药物物的的最最低低可测度，不必定量可测度，不必定量l定定量量限限（（LOQLOQ））————指指准准确确度度、、精精密密度度达达到到要要求求的的前前提提下下，，分分析析方方法法能能定定量测出样品中药物的最低值量测出样品中药物的最低值l标准曲线与线性范围标准曲线与线性范围l指物质浓度与测定响应值的相关性，用回归指物质浓度与测定响应值的相关性，用回归方程来评价，相关系数方程来评价，相关系数r≥0.99r≥0.99。

标准曲线的高标准曲线的高低浓度范围即为线性范围，在该范围内浓度测低浓度范围即为线性范围，在该范围内浓度测定结果必须符合精密度和准确度要求定结果必须符合精密度和准确度要求l标准曲线的制备：标准曲线的制备：l1 1个空白样品个空白样品l5 5～～8 8个系列浓度标样个系列浓度标样l耐用性耐用性——测定条件有较小的变动时，测定条件有较小的变动时，测定结果不受影响的承受程度测定结果不受影响的承受程度样品的稳定性、样品提取次数和时间、色样品的稳定性、样品提取次数和时间、色谱柱、不同厂家的试剂所配制的流动相的谱柱、不同厂家的试剂所配制的流动相的差异、流动相的差异、流动相的pH值、不同的操作者、天值、不同的操作者、天气、气温等气、气温等。