液相色谱基础知识简介.ppt

液相色谱基础知识简介液相色谱基础知识简介 •色谱法简介色谱法简介•色谱法的历史色谱法的历史•色谱法的原理色谱法的原理•色谱法的分类色谱法的分类•HPLC简介简介•液相色谱图术语解释液相色谱图术语解释主要内容主要内容l什么是色谱什么是色谱•色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本质是一种分离分析方法•常见的分离方法– 蒸馏– 离心– 电泳– 过滤– 超滤– 色谱：目前最有效的分离方法•Chromatography的由来•100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素时采用的实验方法，他将植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙的直立玻璃管,再加入石油醚使其自由流下,结果色素中各组份互相分离形成各种不同颜色的谱带•Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验方法，即现在的Chromatography(色谱法)•Chromatography的发展•1906年正式命名(见诸文献)•20世纪30年代开始广泛研究和应用 -主要是气象色谱的应用•高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代•Chromatography的原理– 是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离 – 两相中有一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase),有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase),流动相又叫洗脱剂,溶剂相(Phase):– 物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。

各相之间有明显可分的界面•Chromatography的原理•分离是一个物理过程•固定相(Stationary Phase)•流动相(Mobile Phase)•进样 (Injection)•洗脱 (Elution)•相互作用(Interaction)•色谱法的分类•按分离过程的机理分:•吸附色谱(Absorption Chromatography)–根据样品组分对活性固定相表面吸附亲和力的不同实现分离•分配色谱(Partition Chromatography)–分离基于样品组分在固定相和流动相中的溶解度(分配系数)不同•离子交换色谱(Ion Exchange Chromatography)–根据样品组份离子交换亲和力的差异分离,简称离子色谱(IC)•体积排除色谱(Size Exclusion Chromatography)•GPC(Gel Permeation Chromatography)–固定相是疏水性凝胶,流动相是有机溶剂•GFC(Gel Filtration Chromatography)– 固定相是亲水性凝胶,流动相是水溶液•色谱法分类示意图•液相色谱的分类•按流动相和固定相的相对极性分:•正相色谱(Normal Phase Chromatography)：固定相的极性大于流动相•反相色谱(Reversed Phase Chromatography)：固定相的极性小于流动相•有机化合物的极性：分子间作用力(静电引力,偶极力,色散力,氢键力…)综合表现的一种描述•常见有机溶剂的极性示例•高效液相色谱简介•高效液相色谱法 HPLC (High Performance Liquid Chromatography )–是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…•HPLC 流程•液相色谱图名词术语•色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号•峰底(Peak Base):峰的起点与终点之间连接的直线•峰高(Peak Height):峰最大值到峰底的距离•切线峰宽(Peak Width):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离•半(高)峰宽(Peak Width at Half Height):通过峰高的中点作平行于峰底的直线,其与峰两侧相交两点之间的距离•液相色谱图名词术语•峰面积(Peak Area):峰与峰底之间的面积,又称响应值•标准偏差(σ)(Standard Error):0.607倍峰高对应峰宽的一半•拖尾峰(Tailing Peak):后沿较前沿平缓的不对称峰•前伸峰(Leading Peak):前沿较后沿平缓的不对称峰•鬼峰(Ghost Peak):并非由试样所产生的峰,亦称假峰•液相色谱图名词术语•基线(Baseline):在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号•基线飘移(Baseline Drift):基线随时间定向的缓慢变化•基线噪声(N)(Baseline Noise):由各种因素所引起的基线波动•谱带扩展(Band Broadening):由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象•液相色谱图名词术语•死时间(t0)(Dead time):不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的时间 •保留时间(tR)(Retention time):组分从进样到出现峰最大值所需的时间•死体积(V0)(Dead volume):不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的流动相体积•保留体积(VR)(Retention volume):组分从进样到出 现峰最大值所需的流动相体积谢 谢！。