羚羊角方剂对震颤大鼠癫痫小发作的作用硕士论文.pdf

中国医科大学硕士学位论文羚羊角方剂对震颤大鼠癫痫小发作的作用姓名：李景申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：蔡际群20060601中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任论文作者签名：奎翌日期：如口7 、机，毕中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。

论文作者签名：指导教师签名：日期：·中文论著摘要·羚羊角方剂对震颤大鼠癫痫小发作的作用癫痫是一种反复发作的神经元异常放电所致的神经障碍性疾病其病因复杂，临床上主要以药物治疗为主，中药抗癫痫以其疗效稳定同益引起医药界的关注近年来，神经肽Y ( n e u r o p e p t i d eY ，N P Y ) 在癫痫中的作用成为研究的热点本实验观察羚羊角方剂给药前后脑电[ ] ( e l e c t r o e n c e p h a l o g r a m ，E C G ) 和震颤大鼠脑海马内N P Y 的表达，来研究羚羊角方剂对震颤大鼠癫痫小发作的作用目的l 、观察羚羊角方剂给药前后震颤大鼠的E C G 和脑海马内N P Y 的表达，确定羚羊角方剂对震颤大鼠癫痫小发作的作用2 、丙戊酸钠( S o d i u mv a l p r o a t e ，s v ) 作为阳性对照药，比较两者的抗癫痫差异，进一步探讨药物的治疗作用方法l 、将震颤大鼠随机分为E C G 组和免疫组织化学( i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ，I H C )组，再随机分为低、中、高剂量复方中药( t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n a lc o m p o u n d ，T C M C ) 组，S V 组，模型组。

I H C 组还包括正常组震颤大鼠脑皮质和海马内慢性安插电极，连续记录给药前前后不同时段的E C G 2 、给药后震颤大鼠脑海马S P 法I H C 染色结果l 、低、中、高剂量T C M C 组在停药ld 后对震颤大鼠癫痫小发作均显著有效，以给药前作为1 0 0 ％，每次癫痫小发作平均持续时间分别降至给药前的( 4 4 士8 ) ％，( 5 2 士1 8 ) ％，( 4 2 士6 ) ％( ， 0 ．0 5 ) 如表1 所示，低剂量T C M C 组在绘药5d 后对其有效( P 0 ．0 5 ) 9表1 ，各给药组震颤大鼠每次癫痫小发作平均持续时间的变化( 一X ．4 - s ，n ：6 )( g ／k g )9 0 - ±77 9 * 9 ’5 9 士9 ‘+5 3 ±I I ’’△△6 2 ±1 2 ’△△T C M C1 9 ．3 87 ．5 8 ±0 ．9 76 ．7 1 ±- 0 ，5 4 + 4 ．9 9 ±1 ．2 0 ‘‘41 1 ±0 ．7 7 ”3 ．6 1 ．．±0 ．7 4 “△△4 ．7 0 * 0 2 1 ·．△△8 9 ±6 ‘6 5 * 8 ’‘5 4 * 8 ‘’4 8 ．1 1 ’‘△66 3 士7 ‘’△△。

3 8 ．7 66 ·9 5 ±0 ·5 74 ·9 3 ±0 —3 0 ”3 ．9 5 * 0 ．4 8 ”3 ．4 2 - - b 0 ．3 5 ”2 ．9 2 ±02 6 ‘△厶3 ．3 2 ±02 7 ”△△7 l ±6 ”5 7 ±6 ”4 钍4 ”4 蜥’‘△A4 8 ±5 ”△△s v0 ，1 5⋯∞·3 88 ·9 6 ±3 ·5 8 ”6 ．5 3 ±4 ．6 9 ”4 ．1 3 ±I ．8 6 ”1 0 ．7 2 ：1 ：3 ．9 0 ‘1 4 ．7 1 ：1 ：3 ．2 1 6 0 M 7 ”4 3 ±2 3 ‘‘2 8 ．1 0 ‘+7 2 - ±1 5 +1 0 0 士1 0——————————一—————一—————一一—————- 一一———————一沣：与给药前比较·+ P O ．0 5 ) ；如表2 所示，低、中剂量T c M c 组在给药5d 后对其有效( P 0 ．0 5 ) 表2 ，各给药组震颤大鼠1 5 m i n 内癫痫小发作总持续时间变化( ；士s ，n = 6 )( g ／k s )⋯8 8 ．1 57 5 - 1 2 ’6 4 ：1 ：1 5 ”5 蛀】6 ．．7 4 ±1 6 - 6T C M C1 9 ．3 83 0 9 f 4 ±9 8 t 22 5 0 钍4 0 ·12 3 2 ．5 ：￡5 6 ．5 ‘1 7 7 ．1 ：k 4 28 ”1 5 9 础7 ．3 “1 7 7 ．5 4 “ 3 1 ．5 ‘68 6 ±2 07 7 4 - 9 ‘5 9 士9 ”5 5 ±1 4 ‘‘6 “3 0 ‘△3 8 ．7 63 4 4 J 3 士5 l ·O2 3 1 ，1 ．5 9 4 ‘2 1 4 9 “ ±7 48 ’1 7 2 ．9 士5 8 ．0 ”1 2 4 ．5 * 3 1 ．2 ”1 6 9 牲2 2 ．3 ’+ △△7 0 * 2 5 ’6 5 ±2 7 ‘5 2 ±2 3 ”3 8 ．1 5 ”5 0 士9 ”△△S VO ．I s4 6 2 缸1 1 8 43 6 6 8 ±1 0 4 ·22 8 3 t 5 ±2 3 081 6 79 i ' 9 60 “3 4 4 1 ±1 3 7 ，7 ‘4 7 17 “ - ' - 1 2 8 ．88 1 ±1 96 0 ±3 63 8 * 2 1 ’’7 3 ．1 5 ’] 0 2 a ：l1’‘—_-一‘—’_。

⋯—____________——____-——～注：’』给药前比较，．P O ．0 5 ) 如表3 所示，高、中、低剂量T C M C 组对震颤大鼠1 5r a i n 内癫痫小发作总次数无明显抑制作用泸> 0 ．0 5 ) ；S V 组对1 5m i n 内癫痫小发作总次数无明显抑制作用( P > O ．0 5 ) 表3 ，各给药组震颤大鼠1 5 m i n 内癫痫小发作总次数的变化( ；士s ，n = 6 )( 四) T C M C 各组与S V 组对震颤大鼠各指标影响的比较如表1 、2 所示，高剂量T C M C 在各时段对震颤大鼠每次癫痫小发作平均持续时间抑制作用显著强于低剂量T C M C ( P 0 ．0 5 ) ，高、中剂量T C M C 对其的抑制作用亦无显著性差异( P > O ．0 5 ) ，但有随剂量增加抑制作用逐渐增强趋势高、中、低剂量T C M C 对震颤大鼠癫痫小发作总持续时间的抑制作用无显著性差异( P > O ．0 5 ) ，但有随剂量增加抑制作用逐渐增强趋势高、中、低剂量T C M C 组在停药1 、2d 后对震颤大鼠每次癫痫小发作平均持续时间抑制作用显著强于S V ( 尸 0 ．0 5 ) ，并且S V 的毒副作用较多，对胎儿有致畸作用。

『F 常大鼠海马D G 、C A 3 及C A l 区均有N P Y 表达，其中D G 区较C A 3 、C A l区NP Y 表达多¨7 】有资料表明，N P Y 在癫痫动物模型脑内是有变化的：边进东等”研利用匹罗卡品诱发的癫痫大鼠动物模型，发现其脑组织中N P Y 含量比对照组高( P < O ．0 1 ) ；娄燕等【1 9 】诱导大鼠癫痫持续状态( s t a t u se p i l e p t i e u s ，s E ) ，发现大鼠脑海马N P Y 的m R N A 表达上调( P < 0 ．0 5 ) ；S a d a m a t s uM 等Ⅲ发现震颤大鼠的I R - N P Y( i m m u _ o o r e a e t i v en e u r o p e p t i d eY ，I R - N P Y ) 有变化另外，有研究表明N P Y 在抗癫痫过程中发挥了作用：K a n g T C 等【2 1 】在研究两种遗传性大鼠模型时发现，在惊厥耐受性( s e i z u r e —r e s i s t a n t ，S R ) 大鼠的N P Y F B 性细胞分布在海马的齿状回和下脑脚；相反，在惊厥敏感性( s e i z u r e —s e n s i t i v e ，S S ) 大鼠在海马的齿状回和下脑脚却缺乏N P Y 的表达；W o l d b y eD P 等吲将N P Y 及其类似物分别注射入大鼠脑室中，然后作K A 腹腔内注射，与单纯K A 致痫的大鼠进行比较，观察N P Y 对癫痫活动、丽电图及相关指标表达的影响。

发现N P Y 均能在不同程度上抑制癫痫活动酮野等f 2 3 1观察清丌灵干预后戊四氮致痫大鼠脑内N P Y 的改变，发现清开灵干预组阳性反应神经元则明显增多，海马组织匀浆N P Y 的放射免疫水平与点燃模型组相比明显升高( P < 0 ．0 5 ) ；魏洪妍等【卅探讨托毗酯( t o p i r a m a t e ，T P M ) 对戊四氮致痫大鼠脑内N P Y 表达的影响时发现，T P M 治疗组的N P Y = } O 经元表达比空白组和模型组升高( J P < 0 ．0 5 ) ；封艳辉等【2 5 】用具有抗癫痫反复发作作用蝎毒耐热蛋白( s c o r p i o nv e n o mh e a t - r e s i s t a n tp r o t e i n ，S V H R P ) 作用于原代培养海马神经元，发现S V H R P 可诱导原代培养海马神经元N P Y 阳性反应和N P Y 的m R N A 的表达关于N P Y 抗癫痫作用的机制，目前通过对新鲜制备的海马脑片的研究中发现，N P Y 可以减少由谷氨酸盐介导的突触兴奋传递[ 2 6 1 K a g aT 等[ 2 7 】认为N P Y 通过与相应受体结合抑$ } J C a 2 +通道，减少神经元突触前术端的c a 2 + 内流，从而抑制谷氮酸释放到锥体细胞。

N P Y对调节谷氨酸神经递质运输和惊厥现象的抑制作用，表明他在海马的其中一个生理作用可能是通过抑制谷氨酸的释放调节神经元的兴奋性[ 2 8 】1 5本实验应用I H C 法观察各给药组震颤大鼠脑海马N P Y 的分布与表达，结果发现给药前后及不同剂量T C M C 组大鼠脑海马N P Y 的分布与表达不同I H C 法是用标记的抗体和细胞或组织内的相应抗原特异性结合，并经过一系列高亲和性物质的放大作用进行定性、定位及定量检测，经过组织化学的呈色反应之后，用显微镜观察，图像分析仪进行定量分析因为此方法不但有高度的特异性及敏感性，更是一种综合定性、定位和定量密切结合，形态、机能和代谢密切结合为一体的研究和检测技术本实验发现，模型组脑海马各区N P Y 的I O D 和阳性细胞数均比正常组高( P < O ．0 1 ) ，说明N P Y 表达增加与震颤大鼠癫痫发作有关；高剂量T C M C 组大鼠脑海马各区N P Y 的I O D 和阳性细胞数均比模型组高( P < 0 ．0 5 ) ，中、低剂量T C M C 。