甲肝抗体作业指导书.doc

55文件编号：LAB－OP－MY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411乙甲肝抗体1. 分析原理竞争法：总检测时间18分钟· 第1步孵育：50µl标本；标本中的抗-HAV与HAV抗原结合· 第2步孵育：加入生物素化的和钌标记的抗HAV抗体以及链霉亲和素包被的微粒，HAV抗原上仍然游离的位点被占据形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上· 反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定· 检测结果由机器自动从标准曲线上查出此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得2. 标本要求标本只有按照下列方法收集、检测才能被接受血清标本采集用标准样本试管或含分离胶的试管血浆：肝素(Li-,Na-)、K3－EDTA或枸橼酸钠抗凝关于使用含分离胶试管的血清的稳定性的资料,要注意试管制造商提供的资料标准:血清值的批内回收率 90-110%或斜率 0.9-1.1 + 相关系数>0.95 + 批内干扰±2×分析灵敏度(LDL)）。

标本在2－8℃可稳定7天，-20℃可稳定3个月标本可冻融6次9冻融样本和含沉淀的标本使用前需离心不要加热灭活标本标本和质控品禁用叠氮钠作稳定剂确保病人样本、定标物、质控物在测试前温度达到室温20-25℃.因为可能挥发的影响,放在分析仪上的样本、定标物、质控物应在两小时内测试完3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml：链霉亲和素包被的微粒：0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng生物素/mg微粒含防腐剂R1：HAV抗原（灰盖），1瓶，10ml：HAV抗原(人)：40U/ml（罗氏单位），HEPES缓冲液50mmol/l，pH7.2，含防腐剂R2：生物素化的抗HAVAg抗体；Ru(bpy) 32+标记的抗HAV Ag－Ab（黑盖），1瓶，10ml：生物素化的抗HAVAg单克隆抗体(鼠)：0.25ug/ml；Ru(bpy) 32+标记的抗HAVAg单克隆抗体(鼠)：0.15ug/ml；HEPES缓冲液50mmol/l，pH7.2，含防腐剂 校准品：· Cal 1 定标液1（白盖），2瓶，1.0ml/瓶：抗HAV阴性人血清, 含防腐剂。

Cal 2 定标液2（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶, 抗HAV（人）浓度约46IU/L在人血清中, 质控品：Elecsys 抗HAV质控品1和2，每个8×1.0ml, 货号11876350其他所需材料：· Elecsys 甲型肝炎稀释液，2×15ml样本稀释液，货号11361252· Elecsys 定标液小瓶，2×56带盖空瓶，货号 11776576· 常用实验室设备· Elecsys 2010或MODULAR ANALYTICS E170Elecsys2010分析仪需要:· Elecsys 系统缓冲液（ProCell）,6×380ml，货号11662988· Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），6×380ml，货号11662970· Elecsys 添加剂液（SysWash），1×500ml，货号11930346· Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean），货号11933159· Elecsys 2010反应杯（Assay Cup），60×60， 货号11706802· Elecsys 2010吸样头（Assay Tip），30×120，货号11706799MODULAR ANALYSIS E170分析仪需要:· Elecsys 系统缓冲液（ProCell M）,1×2L,货号12135019· Elecsys 测量池清洗液（CleanCell M）,1×2L,货号12135027· Elecsys 系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）,50个,货号03023141· Elecsys 清洗液（ProbeWash M），12×70ml，用于最终清洗和试剂转换试剂针 清洗反应管/滴头，货号03005712· Elecsys 反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M),48× 84，货号12102137· Elecsys 废物盒(wasteliner)，货号03023150· Elecsys 系统清洗液支架(SysClean Adapter M)，货号03027651各种分析仪均适用的材料4. · Elecsys 系统清洗液（SysClean），5×100ml，货号11298500仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：Elecsys Anti-HAV 以NIBSC(National institute for Biological Standard and control)的甲肝抗体(人,免疫球蛋白)、NIBSC编码:97/646 第二个国际标准作为标准定标。

定标频率：每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗HAV Cal 1,Cal 2定标一次（如：试剂包在仪器上登记后不超过24小时）另外，以下情况需要再次定标：· 同一批号试剂一个月后（28天）· 7天后（放置仪器上的同一试剂盒）· 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时· 根据规定进行多次标定定标确认:不需要分析仪的软件会自动检查定标曲线的有效性及偏离5. 操作方法按仪器操作说明进行操作检查试剂与消耗品是否充足使用前需混匀微粒仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字E170/Elecsys2010：将冷藏试剂预温到20℃后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖将定标液1和定标液2放在分析仪的标本测试区只在标定时打开瓶盖条形码自动提供定标所需的数据资料定标完成后，将定标液1和定标液2放回2－8℃保存或丢弃(E170)6. 质量控制Elecsys Anti-HAV质控品质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后或每个试剂盒测定一次质控间隔期应适用于各实验室的具体要求检测值应落在设定的范围内。

如出现质控值落在范围以外，每个实验室应建立操作指南以采取校正措施如果需要，样本需要重新测试7. 计算方法E170/Elecsys2010免疫分析仪会自动机算每个样本中Anti-HAV的浓度结果单位为IU/L结果解释：使用Elecsys Anti-HAV检测，样本浓度<20IU/L为无反应性.使用Elecsys Anti-HAV检测，样本浓度≥20IU/L为有反应性浓度>20IU/L表示甲肝病毒感染现在或过去感染过或者注射甲肝疫苗后存在抗体注意！使用不同的Anti-HAV检测方法检测结果是有区别的因此使用不同制造商的试剂每个样本的检测结果是变化的如果在疫苗注射后监测免疫保护过程中，如因检测方法改动引起Anti-HAV的含量变化，用新的检测方法获得的Anti-HAV的测定值必须用两种方法同时平行测定核实8. 参考范围各实验室应对各自地区人群的维生素B12正常值波动范围进行调查，最好自己测定一个参考值范围9. 分析性能【检测范围】3.00-60IU/l(由master定标曲线的最低检测限与最高检测限决定)如果测定值低于最低检测限,报告为＜3.00IU/l. 如果测定值高于检测范围,报告>60IU/l或者必需稀释。

特殊情况下,含抗HAV IgM的样本稀释后会出现非线性性能评估资料】精密度:下面为从Elecsys分析仪上获得的评估资料不同的实验室获得的资料可能会不同用Elecsys试剂、人血清、质控物(批内n=21,批间n=10) 检验它的重复性；在E170上检测总的精密度，根据国际临床试验室标准协会(National Committee for Clinical laboratory Standards)的修改草案(EP5-A)来检验:每日试验6次共进行10天实验(n=60);下面为得到的实验结果:Elecsys2010批内精密度批间精密度样本平均值IU/lSDIU/lCV%平均值IU/lSDIU/lCV%HS,阴性<3.00.29-<3.00.69-HS,cut-off 域值17.60.221.218.40.744.0HS阳性41.90.481.242.31.232.9质控A-HAV120.90.401.921.70.813.7质控A-HAV235.80.842.336.51.022.8E170批内精密度总精密度样本平均值IU/lSDIU/lCV%平均值IU/lSDIU/lCV%HS，阴性<3.00.34-<3.00.83-HS,cut-off 域值21.80.110.529.20.893.0HS阳性55.20.300.551.31.122.2质控A-HAV121.10.170.821.00.572.7质控A-HAV235.20.230.734.80.561.6HS=人血清分析灵敏度:(最低检测限)<3.0IU/lAnti-HAV最低检测限代表能够区别于零的最低检测分析水平。

它的计算值依赖于最低标准值的两倍标准差master标准物，标准1+2SD，批内精密度，n=21)临床灵敏度:存在甲肝病毒感染(Anti-HAV-IgM,阳性)或过去曾有甲肝病毒感染的97例病人样本使用Elecsys Anti-HAV和商业提供的比较法检测抗体浓度（>20IU/L）46例注射甲肝疫苗的病人中取165个样本使用Elecsys Anti-HAV和购买到的比较法检测抗体浓度所有样本的抗体浓度均在域值以上 临床特异性:特异性研究，共1301例未被筛选过的鲜血者、住院病人、孕妇和透析病人(没有甲肝感染的症状)，使用Elecsys Anti-HAV和商业提供的比较法检测抗体浓度，没有检测到HAV阳性用Elecsys Anti-HAV方法,1286例结果<20IU/L在这个研究中,特异性为98.85%95%的可信区间为98.11-99.35%分析特异性:与HBV、HCV、HIV、CMV、EBV、HSV、弓形虫、风疹和密螺旋体没有交叉反应共计140个Anti-HAV阴性的、上述抗原或抗体阳性的血清和血浆样本接受检验评估（ANA、AMA）10. 干扰因素该方法不受黄疸（胆红素<50mg/dl）、溶血（血红蛋白<1.2g/dl）、脂血（内脂<1000mg/dl）和生物素<50ng/ml等干扰(标准:最初值的批内。