实验六萘、联苯、菲的高效液相色谱分析.doc

实验六 萘、联苯、菲的高效液相色谱分析一、目的要求：(1)了解反相色谱的优点和应用（2）掌握归一化定量方法2．原理在液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相（ODS） ，极性流动相，这种色谱法称为反相色谱法这种分离方式特别适合于同系物，苯并系物等萘、联苯、菲在 ODS 柱上的作用力大小不等，它们的 'k值不等（ 'k为不同组分的分配比） ，在柱内的移动速率不同，因而先后流出柱子根据组分峰面积大小测定的定量校正因子，就可由归一化定量方法求出各组分的含量，归一化定量公式为：'' ' '12%10ii nAfPff式中， iA为组分的峰面积， 'if为组分的相对定量校正因子采用归一化法的条件是：样品中所有组分都要流出色谱柱，并能给出信号此法简便、准确，对进样量的要求不十分严格3．仪器与试剂仪器：Shimadzu LC-10A 高效液相色谱仪；紫外吸收检测器（254nm） ；柱Econo-sphore C18(3μm)； 10cm×4.5mm 微量注射器试剂：甲醇（AR） ；重蒸馏一次；二次蒸馏水；萘；联苯；菲均为 AR 级流动相：甲醇/水=88/12 4．实验步骤（1）按操作说明书使色谱仪运行正常，并将实验条件调节如下：柱温：室温流动相流量：1.0mL/min检测器工作波长：254nm（2）标准溶液配制：准确称取萘约 0.08g，联苯 0.02g，菲 0.01g，用重蒸馏的甲醇溶解，并转移至 50mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

3）在基线平直后，注入标准溶液 3.0μL，记下各组分保留时间，再分别注入纯样对照4）注入样品 3.0μL，记下保留时间，重复两次5）实验结束后，按要求关好仪器5．结果处理（1）确定未知样中各组分的出峰次序2）求取各组分的相对定量校正因子3）求取样品中各组分的百分含量4）计算以萘为标准时的柱效6．注意事项室温较低时，为加速萘的溶解，可用红外灯稍稍加热7．思考题（1）观察分离所得的色谱图，解释不同组分之间分离差别的原因2）高效液相色谱柱一般可在室温下进行分离，而气相色谱柱则必须恒温，为什么？高效液相色谱有时也可以恒温，这又为什么？（3）说明紫外吸收检测器的工作原理。