β连环素在原发性肝细胞癌中的异常表达及其意义.doc

临床医学论文连环素在原发性肝细胞癌中的异常表达及其意义作者：申海军顾红光金世龙【摘要】 目的探讨B 连环素(B cntcnin)在原发性肝细胞癌发生及发展过程中的异常表达及其意义方法应用免疫组织化学法检测20例正常肝组织、 20例肝炎后肝硬化组织和40例原发性肝细胞癌组织中/3 catenin的表达结果 正常肝组织中的仔catenin几乎全部定位表达于细胞膜，细胞质中非常少 见31例患者细胞膜上B catenin表达缺失，缺失率为77.5%(31/40)，26例 细胞质中有异位表达，异位表达率为65%(26/40)4例肝炎后肝硬化患者细胞膜 表达缺失，缺失率为20%(4/20)，9例细胞质中有异位表达，异位表达率为 45%(9/20)结论/3 catenin异常表达对原发性肝细胞癌的发生及发展可能具有重耍作用关键词】B连环素原发性肝细胞癌免疫组织化学[Abstract 】 Objective To invest igate the ectopic expression of the/3 catenin and iIs significance in development of primaryhepatocellular carcinoma. Methods The expression of B catenin on mucosa of normal hepat ic t i ssues (20 cases), hepat i t ic ci rrhosi s (20 cases) and primary hepatocellular carcinoma (40 cases) was detected by means of immunohi stochemi st ry technique. Results In normal hepat ic t issues, Bcatenin expressed mainly on the cellular membrane, wi th little expression in cytoplasm. In 40 cases with primary hepatocellular carcinoma, there found decreased expression of /3 eaten in on cellular membrane in 31 cases, wi th decrease rate of 77.5% (31/40), and ectopic expression of (3 eaten in in mucosa in 26 cases, wi th ectopic expression rate of 65% (26/40). Whi 1 e in 20 cases wi th hepat ic ci rrhosi s, decreased expression of 13 catenin on mucosa was detected in four cases, with decrease rate of 20% (4/20), but ectopic expression was found in nine cases, wi th ectopic expression rate of 45% (9/20), both of which were 1 ower than that of normal hepatic tissues but higher than that of primary hepatocellular carcinoma t i ssues. Conclusions During development of primary hepatocellular carcinoma, there is ectopic expression of /3 catenin on cel lular membrane and cytoplasm, which may play a pivotal role in development of primary hepatocellular carcinoma.[Key words】 仔 catenin; Primary hepatocellularcarcinoma; Immunohi slochemi sIry原发性肝细胞癌是严重威胁人民群众健康的常见恶性肿瘤之一〔1〕，而肝 炎后肝硬化又被视为肝细胞肝癌的癌前病变。

近年来，许多硏究发现卿｛信号通 路与原发性肝细胞癌的发生发展有密切关系，B连环索(B catenin)是wnl 信号通路中重要的蛋白因此，B catenin可能在原发性肝细胞癌的发生发展中冇重耍作用本实验采用免疫组化染色方法检测正常肝组织、肝炎后肝硬化组织和原发性肝细胞癌组织中B catenin的表达情况，旨在探讨B catenin在原发性肝癌的形成、发展中的作用1材料与方法1.1临床资料收集2004年10月至2005年12月我院手术切除的40例原发性肝细胞癌患 者组织，其中男性28例，女性12例；平均年龄52.4岁正常肝组织20例取自 无肝炎病史、肝功能正常患者，行单纯胆囊切除术所取肝脏活检组织，女性12 例，男性8例；平均年龄45.3岁肝硬化组织取自20例肝炎后肝硬化、门静脉 高压症行脾切除术、门 奇断流术患者，其中男性14例，女性6例；平均年龄 52.3岁上述组织均经病理学证实1.2主要试剂鼠抗人B catenin单克隆抗体，购自Sigma公司，工作浓度为1 ： 100 ；二抗为Power VisionTM（IgG抗体 HRP多聚体）复合物，购自北京中山生物制剂 有限公司1.3方法采用免疫组化Power VisionTM二步法：收集标本后甲醛固定，石蜡包埋， 切片厚度为4 “m，烤干，二甲苯脫蜡，经100%，95%，80%酒精梯度脫水，自来 水漂洗‘ 3%双氧水孵育10 min ‘ PBS漂洗5 minx3 ‘浸入0.001 mol/L（pH6.0）枸掾酸盐缓冲液中'置于微波炉内中火（92〜98 °C）抗原热修复15 min，冷却，PBS漂洗5 minx3，滴加一抗（1 : 100），4 °C过夜，PBS漂洗5 minx3，滴加增敏 剂，37 °C热孵30min，加二抗，37 °C热孵30min，DBA显色剂显色5〜30min， 苏木精复染10 s 饱和碳酸锂10 s 依次经95%〜100%酒精脫水，吹干，封片， 镜下观察，照相，以PBS作阴性对照。

以细胞膜、细胞质出现棕黄色颗粒为阳性 表达判断标准按Maruyama等〔2〕方法，观察细胞膜、细胞质表达情况，当细胞 膜阳性表达＞77%为正常表达，反之为异常表达（异位表达或者有膜缺失），细胞质 阳性表达＞10%为斤位表达申海军，等./3连环素在原发性肝细胞癌中的异常表达及其意义1.4统计学处理采用SPSS 10.0统计软件进行无2检验n 幺士里2.1 B calenin在正常肝组织中的表达正常肝组织中，细胞膜出现明显的棕黄色染色，细胞膜清晰可见，仅个别细 胞的细胞质中出现较浅的棕黄色染色（图1）图1细胞膜清晰可见，细胞膜出现明显的棕黄色染色，细胞质中未出现棕 黄色染色 （Power VisionTM 染色 x200）肝炎后肝硬化组织中，可见完整的细胞膜，大部分细胞的细胞膜上有明显的 棕黄色染色，部分细胞的细胞质中出现棕黄色染色（图2）肝炎后肝硬化组织20 例111有4例细胞膜表达缺失，缺失率为20%，9例细胞质中有异位表达，异位表 达率为45%，均低于正常肝组织，高于原发性肝细胞肝癌组织图2细胞膜上有明显的棕黄色染色，部分细胞的胞质111出现棕黄色染色（Power VisionTM 染色 x200）2.3 B catenin在原发性肝细胞癌组织中的表达原发性肝细胞癌组织几乎所有的细胞膜未现棕黄色染色，细胞膜表达有明显 的缺失，细胞膜结构因未着色几乎看不清楚，而大部分细胞质中出现清晰的深棕 黄色染色（图3），细胞质的异位表达明显增加。

在原发性肝细胞癌40例中31例 的细胞膜上B catenin表达缺失，缺失率为77.5%，26例的细胞质中有异位表 达，表达率为65%，明显高于肝炎后肝硬化组织图3细胞膜结构因未着色，儿乎看不清楚，细胞质中出现清晰的深棕黄色 染色（Power VisionTM 染色 x200）/3 catenin在3种组织细胞质的表达：肝硬化组织高于正常肝组织 （P<0.05），肝癌组织明显高于肝硬化组织（P<0・05）catenin在3种组织细 胞膜缺失率差异有统计学意义（表1），肝硬化组织高于正常肝组织（P<0.05），肝 癌组织明显高于肝硬化组织（P<0.05）表1 /3 catenin在3种肝组织中表达情况3讨论近年来的硏究发现在成年脊椎动物中wnt基因与内坏境和肿瘤的发生冇密 切关系〔3〕o Wnt信号通路是一条控制动物胚胎发育及细胞命运的重要信号通 路wnt基因控制wnt蛋白合成，wnt蛋白到达靶细胞时与靶细胞中的跨膜受体 卷曲(fTizzled)蛋白特异性结合，将信息传到细胞内，进入细胞內后，经DSH 蛋白传至GSK 3并与其结合使其去磷酸化GSK 3主要功能是降解/3catenin，使其在细胞质中的浓度降低，保持在低水平，不能进入细胞核调控相 关基因表达〔4〕。

当GSK 3被抑制后，/3 catenin降解中断，细胞质中游 离的B catenin增多，增多到一定水平与T细胞因子4(Tcf 4)结合形成复合物，然后进入细胞核与 Tcf/Lef(T cel 1 transcripronal factor/Lymphoid enhancer factor)族含有HMG盒(hight mobi 1 ity group,DNA结合区)的转录活 化因子作用，调节c myc、cycl in D1等靶基因的转录，推动细胞周期发展｛吏 细胞增殖加快和导致异常蛋白质产生，进而加速肿瘤形成和细胞癌变因此B catenin是wnt信号传导途径中的关键因子最近的硏究〔5〕表明仔catenin基因的突变在人类多种肿瘤中出现，/3catenin基因突变导致B catenin的降解中断，在细胞质中积聚，导致肿瘤 的发生/3 catenin在细胞质中异位表迖与大肠癌〔6〕、卵巢癌〔7〕发生发 展有密切关系，大肠癌、卵巢癌中/3 catenin「［i普遍存在B catenin的异位 表达在正常细胞中B catenin分布于细胞膜上，勻细胞间的黏附有关，同上皮钙黏蛋白(E cadherin)-致〔8〕。

在肝部分切除的动物模型中观察到B catenin有所上调，为了增加细胞间的粘附〔9〕，其上调恰好与E cadherin 的下调一致，即B catenin 下调则 E cadherin _L调〔10〕° /3 catenin 在细胞中勻E cadherin形成复合物并插入细胞膜，很少能游离于胞质中，在 细胞质中保持低水平本硏究观察从正常肝组织-肝炎后肝硬化-原发性肝细胞癌的发展过程111B catenin表达改变，结果显示在正常肝组织中/3 catenin几乎全部定位于细胞膜上，细胞核未见表达肝硬化组织中B catenin细胞膜的缺失率和细胞质的局位表达率均高于正常肝组织(P<0.05)在原发性肝细胞癌组织中B catenin在细胞膜的缺失率和细胞质的异位表达率均高于正常肝组织和肝硬化 组织(P<0.05)这些结果表明在原发性肝细胞癌的形成过程中，B catenin 逐渐由细胞膜转移至细胞质，并在细胞质中聚集，胞质聚集到一定水平进入细胞 核激活。