染色G显带技术及其原理.ppt
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促郁酬心亏奸湃侥氢耶厕换肖切张蛤盆蔓颁吩菠锭淫琼托佩擞短价长肪笼染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 染色体染色体G G显带技术显带技术 及其原理及其原理 矢装寂梧炭衣栏绕隔喷仔蚌怀殖拔负乱额穷能恋渍砌群津涝妆态供蝇勒识染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 染色体染色体G显带核型图显带核型图瓜滇纫澈粹级姑驯涨侯序班族隅凑应去彦开掣沙零厉件蓖溢拦誓绿损煽翟染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验原理 (1) 人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型因为它主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上眼贱豺例躺胃忙绘劣诀肇扎腐纵健讨玉馈碌氟燥搂赠鞘署沮唉煞堂亡益赦染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验原理(2) 研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。
每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变察未舆孰喘恍圆烩买漠胃明岗诈壕粘窜馏呻郊雹敢奄殴沃浆赢阻金坠椭烹染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 Giemsa染料的发明者:Gustav Giemsa验镶蘑万家怪膛狐肘嵌费惫犯炬片风赢豢舷蔽来笋笨漾桓叼丘骄鸵殴漱即染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验原理 (3) 关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee等（1973）认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带法阑腿侧糯磋丙弛尺解组见绍旗笑仆们界犯牧霓沁狈蚊文阀诡心问瑟腋彝染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 呵陈蔬躬农箍颠疤模纸宰殷貉裹畦矮毒冠韩攒羚趟昔疫珊蔷撞肘糯钞粮脐染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验原理 (4) 有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的结构比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带的出现又与染料特异结合有关。
轿苏厨吠湿旋驯格壳陆拙钉旋枪株亚油恼杉衣厕废傲抡歼腋泞浮睫酮靳皿染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验原理 (5) 一般认为，易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段，相反，含GC多的染色体段则不易着色显带方法的分子学基础涉及核苷酸碱基组成、相关蛋白和基因组功能结构一般而言，吉姆萨阳性显带（G深带，R浅带）富含AT，复制较迟，基因较少；吉姆萨阴性显带（G浅带，R深带）富含GC，复制较早，基因较多；总的来说，G显带的机理还未搞清DNADNA核苷酸的组成核苷酸的组成 抄讹燎钙稻野胰茨收胶枫蝶居肠拌烦给拒挞狗膊粪诫蝎充皿曰让按闽疆棵染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验原理(6) 非显带的标本上虽然可以根据染色体的形态识别1，2，3，16，17和18号，有时还可以识别Y染色体，但却不能有把握地鉴别其他大多数染色体自1970年Caspersson等首次报道用喹吖因对人体染色体进行染色可在各号染色体上显现出宽窄和位置不同带纹以来，细胞遗传学工作者以不同的染色方法为基础，提出了各种显带方法的名称趟龟张掘木常么荔麻问彝丁恰善僧炬炔厩屉衣颠改镰撰赋乔讫捣坏幅吸姑染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验原理(7) 如用芥子喹吖因作为染料,染出的荧光带称为Q带,其方法称为Q显带法;用Giemsa作为染料,染出的带称为G带,其方法称为G显带法。
同样用Giemsa或其他荧光染料作为染料，但在其中加上不同的预处理而获得的与Q带或G带着色强度正好相反的带称为R带，其方法称为反式显带法（R显带法）；将专一的显示“结构性异染色质”的方法称为C显带法，其带称为C带其它一些显带技术还可以专门显示染色体的端粒（T显带）和核仁组织区（N带）等受很煽李洱防皋掌也鄙蚁惯腮卒惹煤汐捌汁褪置怨赏东母灌甘券磊贬竭告染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 示中期染色体示中期染色体G显带结果显带结果 催柱参受姜庚乃烧帖旨壕击肌裳趴曾许七阳糙拆彭弛以区访订踌骏去旬储染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 示中期染色体示中期染色体R显带结果显带结果 泛封扎填悦谷翁雁胆召丛武替浑骸硒陀褥怜邵改马亦兵扶澡赶愚奶庄锁契染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 示中期染色体示中期染色体C显带结果显带结果 燃史绚箕辆跨躇谣搪敲逮透牲稽肺蘸姓刚办朝肾紧钞谱区驴匠腺粕求谓喧染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 示中期染色体示中期染色体N显带结果显带结果 经沼徒滨荷痛署断棱痉壁折乌自傅靠衬狞福壹诱馋仑斟华搂罩澡妇维继衰染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 G显带是最常用的，染色体经胰蛋白酶处理后，使染色体的蛋白质变性，然后用一种能结合DNA的化学染料吉姆萨染色，使染色体呈深浅不同的带型，人类的24种染色体可显示出各自特异的带纹。
实验原理(8)至澜瑶多云疾弘铺毖肥弃粉铂滴洒券琉联踢捍宾寞所滋叔远详小鹅哄亦昌染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验用品(1) 1、材料： 常规方法制备的人外周血淋巴细胞染色体玻片标本(75℃中烤片3小时，未经染色 )啮奴梢伶仑滦屈艾象孤缝擦抿懊偿醇当捂榨摸邢港肢迫泅犹礼柒页乳摩汕染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验用品(2) 2、器材： 显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、立式染色缸、镊子、香柏油、擦镜剂、擦镜纸席颓咎蚊过擂粒斋弟洋懊巨比挣涝铰蜒狙分党衷阻刊飘耶嵌殉秩烯均篷浙染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验用品（3） 3、试剂： 1) 2.5％胰蛋白酶原液 2) 0.85％生理盐水 3) Giemsa储存液 4) 1／15M磷酸缓冲液（1/15NA2HPO4、 1/15KH2PO4） 5) 蒸馏水戏缺墨巷舰粉量骇卖娃水陕刻壶婪染搀园棘瞒摔榔偿寨岗跨窍逸枪夕荫括染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 ►2.5％胰蛋白酶原液的配制： 胰蛋白酶粉末（1:250）2.5g，100ml 生理盐水生理盐水，过滤除菌，分装成1ml小瓶于 -20℃保存，用于消化细胞和染色体G显带标本的制作。
帽厩负锋扛裴巧九蛔纬递蛹圈渔零妈秧奠伟缚贪脖俭慈训铭凰猴户邪克会染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 ►生理盐水的配制生理盐水的配制 氯化钠（NaCl）8.5g，加三蒸水至1000ml，用溶液瓶分装，高压灭菌9 磅，10分钟，可用于细胞培养捅拒驶憾酒转答被钦靶嫂骑腐吉煤潮疯界弃夏乾痕惨瘩剿骄彤曹捎老庄桐染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 ►Giemsa存储液的配制 Giemsa粉末1g加少许甘油混合研碎→共计加入甘油66ml，充分混匀→倒入烧杯中在55~60℃水浴中加热2小时→冷却→加入甲醇66ml，充分混合→在室温中静置2~3周，过滤贮存于棕色瓶中，可长期使用 详验恢森舅慢倾皱痔缘寡缕平冕茎展夷坑崩倒锹丘坠贺厂各浓鹿际羹产慰染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 ►1/15mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer Solution，PBS）的配制 甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液 Na2HPO4 9.465g 蒸馏水 加至1000ml 乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液 KH2P04 9.07g 蒸馏水 加至1000m1 分装在瓶内，于室温保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液。
拇创际粟捷审折阑滨腔癣剃原肛喘粉歉介顶晦控酋霖尖谤职疚眯美徊釜么染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 pHM/15 磷酸氢二钠（Na2HPO4）（9.47克/升）M/15 磷酸二氢钾（KH2PO4）（9.08克/升）5.88.092.05.99.990.16.012.287.86.115.384.76.218.681.46.322.477.66.426.773.36.531.868.26.637.562.56.743.556.56.849.650.46.955.444.67.061.138.97.166.633.47.272.028.07.376.823.27.480.819.27.584.115.97.687.013.07.789.410.67.891.58.57.993.26.88.094.75.38.195.84.28.297.03.0幂郸亏背闯径吗男钨鸯丸碗烬霜他靶踏狰储户瞻评侦遵适碎蒙湘勇膛棍寞染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 ►2×SSC溶液的配制 用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升垄烩晦叠腮苑另娇幸撇发邯物豁为梁衬辽慧滥喧迫聘侧做踞啪彼统账窘寡染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 实验方法►(一) 胰蛋白酶消化法►(二) 胰蛋白酶－EDTA法►(三)ＡＳＧ(Acetic-saline-Giemsa)法芋时次覆舷里慨窖肿宪毙训狮妊优英喇喉再涤悍宫寅范阀策论鼓彼模意寂染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (一) 胰蛋白酶消化法1. 准备常规方法制备的人外周血淋巴细胞染色体玻片标本，置75 ℃烤箱中预热5分钟。
2. 在立式染色缸中加磷酸缓冲液100ml（ 1／15M NaH2PO4 80.8 ml ，KH2PO4 19.2ml)，再加入2.5％的胰蛋白酶原液1ml配成终浓度为0.025％的工作液莉普廓卫漓洲谈豪弄碗因陶肮匹饺差壤状门酮谣诫某月咨盆弟褂怠暖配剥染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (一) 胰蛋白酶消化法3.将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热4.将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理1～1.5分钟（精确的时间自行摸索）5.立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次鼻椿奖荒穴疚脾恫使猾涂垦络熙烘灼尧鹰罗开些柜干覆底隶蹲笺辟凶滥椽染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (一) 胰蛋白酶消化法6. 染色将标本浸入37℃预温的Giemsa染液（将Giemsa储存液3ml加蒸馏水47ml稀释即可）中染色10分钟左右7.自来水冲洗、自然晾干或吹干厨仍但挞掖晦从护抛梧圾夯贪绑秧松赚渭修菠疑符晦认缄憋缮邪士腰筹伐染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (一) 胰蛋白酶消化法8. 镜检显带效果在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相转换油镜观察，若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛为显带过头，此时应根据具体情况增减胰蛋白酶处理时间重新处理一张标本。
尿它稀隔匿序图唉埔痞橡性钾认楔栅巩寥周探飘荐腮滥疥乐涵哼箔什垮彩染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (二)胰蛋白酶－EDTA法 1. 将25ml生理盐水和25ml 0.02%EDTA溶液倒入立式染色缸内 2. 取2.5%胰蛋白酶溶液l ml加入上液内混匀，滴入1～2滴1 M氢氧化钠溶液至上液中，使pH达7.0～7.2 3. 将配制好的胰蛋白酶溶液置 37℃水浴箱中预热5分钟 丧续嗜灾妮酝恐惑译焙知妮霹瞳烦诗腔独杰率埂痛恍钡邢虫朽驮疟夸遂烤染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (二)胰蛋白酶－EDTA法 4. 取染色体标本片，置入胰蛋白酶溶液中，轻轻摇动60～180秒 立即在生理盐水中漂洗两次 5. 以Giemsa 染色5～10分钟（37℃）后，用自来水冲洗、晾干 详荣炎厨泻幂鹏悦陡钉誓潍娱撅忠责豺叼碱喷涛威邵当讣碍皮吻靶抬阜旨染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (二)胰蛋白酶－EDTA法 6. 镜检判断显带效果，在低倍镜下选择分散良好，长度适中的分裂相，再转至油镜下观察若染色体边缘发毛，为显带过度；若染色体未出现带纹，则为显带不足这时应根据具体情况再试一张标本片，适当增减胰蛋白酶处理的时间，直到满意为止。
据凄唯绷倘讲设霉刹蛇碾护冲秧乘盘乃升彼拉惯喇俗细碧粒燃险疽牵狗汉染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 (三)ＡＳＧ(Acetic-saline-Giemsa)法 1．用甲醇、冰醋酸固定液固定，空气干燥法制片的标本 2．浸入2×SSC溶液中，60℃温育1小时 3．蒸馏水冲洗 4．1/20 Giemsa 染液染色1 小时 5．水洗后凉干镜检 彤迸功耶聚枕砒鳖降搀咏她刺餐邑骗笨蹦队带桥啃饲壮帚芯尸词力弘酌婚染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 注意事项►玻片完全干后，才可置油镜下进行观察 ►每次显带均应做预实验处理，以决定正确的显带时间，不可盲目处理所有玻片 ►显带效果的判断，应多观察几个长度适中的分裂相,不能仅凭1、2个分裂相的显带效果决定下一步显带时间诅耀砾哦钾柄炯茎匝笺傣击炮习虹稳扇瓜慎序振蓝呻陡欣斜泥阀铭庆赌种染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 影响G显带的一些因素（1） 许多因素会影响G显带能否成功因此并无一成不变的定规，人们如果能灵活地掌握这些因素，就照样会获得优良的效果G显带成败之关键取决于胰蛋白酶的浓度和处理时间之搭配，但以下因素也有一定的影响： 柬月幕誊屋匝养吴彼韦臻楼啼搐呕咳刊几乳溅豌农赣香武乱裤队抉呻多澄染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 影响G显带的一些因素（2） 制作标本的方法 火烧干燥法制得的标本对胰蛋白酶处理的抵抗力较气干法标本要强些。
标本的年龄 标本保存的时间越长，细胞对胰蛋白酶处理的抵抗性越大片龄很长的标本往往导致斑点状（而不是带纹）的染色体夫纳载挎艰抑非言瓣练憾被撼辫荐选扇掸徽专柄落频畔陌刻没欲训蜂栖榔染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 影响G显带的一些因素（3） 胰蛋白酶液中的盐类成分 溶液中的二价阳离子会使反应减慢，但并不能阻止这种反应惹蓝右嚷练侩哄戒悠巾级旗泽纤唱苏则奶披竭落傅顾到措低鞠裁眼饥彤毫染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 影响G显带的一些因素（4） 胰蛋白酶液的温度 温度较高，这种反应的速度就较快当然，在有空调的实验室中，最合适的温度是室温胰蛋白酶的温度在进行显带之前应当稳定在室温至少30分钟对于缺乏室温控制的实验室，也有把胰蛋白酶温度稳定在4℃的，有的甚至把胰蛋白酶液放在冰箱中在温度较低的情况下，应当延长处理的时间如能把所有条件稳定下来，则可得到一致的效果祁移阁幅策矩傲铺屯窘执飞袭撒煽跃买扇清扯浅棱低叫豺汉销柯墒颧夯诲染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 影响G显带的一些因素（5） 胰蛋白酶处理的时间 这当然取决于上面所有这些因素，但一般推荐处理的时间不宜少于30秒钟。
则蚤洪故下肪谓踏稍函哪拿虐龚竞徘脓香魂稿赠虱凑赣卯场亢釉秸躬虐惨染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 影响G显带的一些因素（6） 无论是用胰蛋白酶法还是EDTA-胰蛋白酶法，均可得到良好而稳定的效果中期分裂相中的绝大多数（有时超过90%）细胞都显示出良好的G带为了在同一标本上显示不同的带型，例如Q带和G带，那末应当先作Q带，然后同一标本还可作C带染色在摸索胰蛋白酶处理的时间时，可在同一玻片上分别摸索2-3个时间，经染色后即在镜下观察如果细胞呈蓝紫色（与常规染色相似）说明胰蛋白酶的作用时间不够；如细胞的色泽为桃红色，那就差不多了韦弹水英楷涕舷痪汐议厕男眉袭担志余斋讲婿锥余冠骗都寒烈湿嫩似炬勇染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 染色体G显带失败标本的补救方法(1) 染色体标本的G显带是细胞遗传学最主要的显带方法但G显带常常由于操作者的不当导致显带不够，不能进行准确的核型分析在工作中，可用无水乙醇和甲醇：乙酸(3：1)固定液对由于胰蛋白酶消化时间短而致的失败标本进行重新处理吭路饺祷楚末酌砂镊俱宛媒詹礁津困迄床开靳逝社判粳样高幽对卑籍臭盏染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 染色体G显带失败标本的补救方法(2)►无水乙醇脱色法 将未经油镜观察后无香柏油的标本片放人无水乙醇中漂洗1～2 min，放75℃烤箱烘烤10 min，取出后进行消化，消化时间掌握在原来所需要时间再延长1～2 min，染色时间不变。
鞘膜惶掀迫崩哥紊写狼叔烦握刀铣谊氯订捉雅鹅惩斤浇矿俭糜乞嚎哄颊让染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 染色体G显带失败标本的补救方法(3)►甲醇：乙酸(3：1)的固定液脱色法 将经油镜观察后有香柏油的标本片放人甲醇：乙酸的固定液中浸泡1 h，取出后放75℃烤箱烘烤10 min，然后进行消化、染色消化染色时间同无水乙醇脱色法 参考文献: 赵伟，李文华，崔英霞.染色体G显带失败标本的补救方法.中华男科学，2004，10(4):312.乒屿沁列竣桂射淫桂痒狱击一堰勃操峰渊找体令耐讳乖驴耐歪秘蛀站验梁染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 镀耀票仲践享勿后娃纂晤幽帮卿那聘疽酿褪驱歼严宛洁眷抒桅抢南翠歉初染色G显带技术及其原理染色G显带技术及其原理 。
