试验三 动物剖杀与取材.docx

实验三 小鼠剖杀与取材一. 实验目的1. 掌握小鼠摘眼球取血技术2. 掌握小鼠解剖技术3. 掌握血清及肝匀浆制备技术二. 主要仪器及试剂1.5mlEP管；弯头镊子；台式离心机（1.5ml转子）；移液枪；乙醚；棉球；电动 匀浆机；生理盐水；冰块；烧杯（50ml）;冰盒；三. 实验步骤1•麻醉：瓶中放一些棉花，再加入乙醚，将小鼠放入瓶中10S左右进行麻醉2. 取血：摘眼球采血，要点如下1 ）左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部；（2 ）中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血 侧眼部皮肤，使眼球充血突出；（3 ）用弯头镊夹取眼球；（4 ）根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管；（5 ）同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；（6 ）当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠血清制备3. 制备分离血清（1 ）将离心管中的血置371温箱或水浴1小时，也可室温2小时；（2 ）再置41冰箱内3~4小时或过夜；（3 ）待血液凝固血块收缩后，4000rpm离心10分钟；（4 ）取上清于干净的离心管中，保存于-201，置41冰箱中保存备用。

4. 肝脏取材及其 10%匀浆制备（1 ）取肝脏1g，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5或10ml 的小烧杯内（2 ）用移液管量取0.86%冷生理盐水，生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍， 用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组 织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织的小烧杯放入冰水中）（3 ）电动匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲 洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有 冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，充分研碎，使组织匀浆化4 ）将制备好的10%匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10 - 15 分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀5. 贮存制备的血清、肝匀浆做好标记冻存在-201四. 数据记录：1. 处死体重：2. 肝脏重量3. 取样（肝脏）：五. 注意事项1. 采血前，可给小鼠喂点水；2. 摘眼球采血取血量能达0.8 ~ 1.2ml，但老年和疾病小鼠血量会降低；3. 采血场所有充足的光线；室温夏季保持在25 ~ 28°C，冬季，15~20€为宜；4•防止血液浸入眼部周围毛发，否则会造成污染和溶血；5. 按压心脏时，用力一定要适度，若用力过度，一是会造成动物采血中途死亡，使采 血不完全，二是有可能引起溶血现象发生，影响实验结果；6. 采血用的器材和试管必须保持清洁干燥；7. 采血时要防止小鼠挣扎，否则会损失比较多的血样；六. 讨论1. 小鼠取血及制备血清过程中如何防止溶血；2. 溶血对指标测定的影响。