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RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和步骤关键词： RNA 琼脂糖 电泳 2012-03-09 00:00 来源：互联网 点击次数：38148一、实验目的 掌握植物总 RNA 非变性胶电泳的原理和方法二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行非变性电泳使用1.0%--1.4% 的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量只有在完全变性的 条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系因此要测定RNA分子量 时，一定要用变性凝胶在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的 1%琼脂糖凝胶即可25S[-tRNA （占80-85%） J iss[5S 植物RNA 寡聚脱氧胸薈（O鹿odT｝层析柱三、实验材料、器具及药品 蘑菇的总 RNA 溶液 电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5购/ml溴化乙锭(EB )10X载样缓冲液实验步骤(1) 用IxTAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加IxTAE电泳缓冲液至液面覆 盖凝胶。

2 )在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4pl于封口膜上在实验台 上再加入5pl IxTAE电泳缓冲液及1$的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔3 )打开电源幵关■调节电压至100V，使 RNA由负极向正极电泳■约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗.在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果IRSrRNAl % Denaturing GelofTmalRNAUnr I; Hijth Qudhj Taint R?4A. Lunt 1: Pu-tlikV T«tsl RNAUm Ji 1'u-tl.V 諂 lQt>J HWARNA 的变性琼脂糖凝胶检测 试剂：（1） MOPS 缓冲液（10* ） :0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS ） （Ph7.0）, 0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA 2）上样染料：50%甘油， 1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝， 0.4%二甲苯蓝 3 ）甲醛4）去离子甲酰胺v电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲 洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲 洗。

操作：1） 将制胶用具用 70%乙醇冲冼一遍，晾干备用2） 配制琼脂糖凝胶① 称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉 内加热使琼脂糖彻底溶化均匀② 待胶凉至60--70 oc,依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5ul 溴化乙锭，混合均匀③ 灌制琼脂糖凝胶3） 样品准备：① 取DEPC处理过的500ul小离心管，依次加入如下试剂：10x MOPS缓冲 液2ul，甲醛3.5ul,甲酰胺（去离子）10ul , RNA样品4.5ul,混匀② 将离心管置于60°C水浴中保10分钟，再置冰上2分钟③ 向管中加入3ul上样染料，混匀 4）上样5）电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml的电压下电泳 6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。