特殊显微镜结构及操作技术ppt课件.ppt

实验实验1 特殊显微镜结构及操作技术特殊显微镜结构及操作技术【目的】 了解TE2000-U型倒置显微镜的基本组件、原理，掌握其基本操作资料】 1．高等动、植物各类组织永久制片； 2．培养皿〔瓶〕中的活细胞或微生物； 3．口腔上皮细胞的临时装片 【实验用品】1．试剂：10μg/mL罗丹明123的磷酸缓冲液〔PBS〕荧光染料2．器材：倒置显微镜，相差显微镜附件〔相差物镜、转盘聚光器、对中环形光阑和绿色滤色镜等），微分干涉显微镜附件〔起偏镜、检偏镜和渥拉斯顿棱镜等），荧光显微镜附件〔荧光发射器、激发滤片和阻断滤片等），载玻片，盖玻片，牙签，滤纸条，擦镜纸，镊子，滴管 【实验原理和方法】 倒置显微镜是一种用于生物组织细胞离体培养观察的光学显微装置，能直接对培养皿、培养瓶的标本进行显微观察由于它的物镜、物体和光源位置刚好与立式显微镜颠倒，被称为倒置显微镜倒置显微镜的物镜在下，聚光器在上，被观察样品置于位于上方的聚光器之下，聚光器具有远大于物镜的工作距离因此，适应于培养皿或培养瓶中样品的观察高档倒置显微镜可根据不同观察要求，增加相差、微分干涉反差物镜或荧光发射装置，构建成相差显微镜、微分干涉显微镜或荧光显微镜。

一、倒置显微镜的构造与使用一、倒置显微镜的构造与使用（一〕倒置显微镜的构造倒置显微镜由目镜、透射照明器、聚光器、载物台、物镜和显微镜机体等部件构成，以TE2000-U显微镜为例介绍TE2000-U 显微镜配有：T-DH 100W 透射照明器、LHS-H100P-1 12V100W 灯室、12V100W 卤素灯、TE2-PS100W 电源、T-SR 矩形载物台、T-TD 双目镜筒D、CFI 10X 目镜、T-N6 六孔物镜转换器，系统聚光器、物镜、电源线等1. 目镜筒及目镜目镜筒及目镜 A:屈光度调节环屈光度调节环 B:目镜目镜 C:目镜筒转盘目镜筒转盘O:开开 B:勃氏镜勃氏镜(带有聚焦螺钉带有聚焦螺钉) C:关关(光闸光闸) M:2.5 倍放倍放大大2. 显微镜机体显微镜机体3. 透射照明器透射照明器: 透射照明器必须根据规定使用灯透射照明器必须根据规定使用灯泡泡(12V100W 或或6V30W)T-DH 100W 透射照透射照明器需灯室明器需灯室A： 视场光阑调节杆 B： 滤色片滑片C： 聚光器再聚焦制动器 D： 聚光器调焦旋钮E： 聚光器固定螺钉 F： 聚光器安装定位孔G： 聚光器安装定位槽 H： 聚光器转动指紧螺钉I： 聚光器调中螺钉 J： 聚光器安装(可转动)支架K： LHS-H100P-1 12V100W 灯室 L： 灯室固定螺钉M： 灯室盖指紧螺钉 N： 聚光器支架(可移动)O： 聚光器支架指紧螺钉 P： 灯室线Q： 聚光器支架下降定位螺钉T-DS 30W 透射照明器透射照明器 A：： 防尘滑片防尘滑片(可移动可移动) B：： F 堵口滑片堵口滑片(可移动可移动) C：： 聚光器安装支架聚光器安装支架 D：： 6V30W 灯室灯室 E：： 滤色片滑片滤色片滑片 F：： 安装附加装置安装附加装置M4 螺纹孔螺纹孔系统聚光器系统聚光器T-DH 100W 透射照明器 A： 聚光器孔径光阑B： 聚光器模块C： 聚光器模块固定螺钉D： 聚光镜(有三种可选：ELWD、LWD、HMC)E： 环形光阑调中螺钉(仅用于相差模块中)T-DS 30W透射照明器(霍夫曼观察) ELWD-S 聚光器聚光器A：调中杆指紧螺钉B：调中杆 C：转盘SLWD 聚光器聚光器T-SR矩形载物台矩形载物台A：载物环湾 B：载物台Y 轴方向移动控制旋钮 C：载物台X 轴方向移动控制旋钮（二〕由TE2000-U，100W 透射照明器，系统聚光器，以及T-TD 目镜筒D 组成的显微镜系统。

明视场明视场(BF)镜检镜检关键点：关键点： 从光路中卸下其它形式观察需要从光路中卸下其它形式观察需要的所有光学组件，聚光器调节好〔调节的所有光学组件，聚光器调节好〔调节聚焦和对中），转动孔径光阑调节好像聚焦和对中），转动孔径光阑调节好像的清晰度的清晰度1. 复位复位1） 逆时针转动，松开透射照明器中的“聚光器再聚焦指紧螺钉”2） 把“目镜筒转盘〞设置到＜O＞位3） 把显微镜右侧的“中间放大倍数刻度盘〞打到＜1X＞4） 逆时针转动，松开显微镜右侧粗∕微调旋钮后面的“物镜再聚焦定位环”2. 打开透射照明器打开透射照明器1） 把电源后部的“外部开关〞打到开的位置；2） 把电源“电源开关〞翻开把开关拨至│)；3） 按下显微镜左侧的“照明器开关〞接通灯泡3. 调节灯泡亮度保证色彩真实调节灯泡亮度保证色彩真实1） 把显微镜左侧的“亮度调节盘〞设置成＜12V100W＞；2） 把透射照明器中的“NCB11 滤色片〞插入光路中；3） 把透射照明器中的“ND4 滤色片〞插入光路中4. 调节光路调节光路1） 把10X 物镜转到光路中2） 把显微镜右侧的“光路转换盘〞转到＜1＞的位置100%光到观察口）3） 向上推透射照明器上的“视场光阑杆〞完全打开视场光阑。

4） 将系统聚光器上的“孔径光阑杆〞转至右侧极限处把“孔径光阑〞完全打开5） 转动聚光器调焦旋钮把聚光器调至最低位置5. 明视场观察时对显微镜的调整明视场观察时对显微镜的调整n把“聚光器转盘〞转到＜A＞位置6．调节视度及瞳距．调节视度及瞳距1〕将显微镜前部的“摄影取景框转盘〞逆时针旋转，使摄影取景框进入光路2〕用左眼对着左侧目镜，转动目镜 “屈光度调节环”，使取景框中的双十字线清晰成像3〕用右眼对着右侧目镜，转动目镜 “屈光度调节环”，使取景框中的双十字线清晰成像4〕将显微镜前部的“摄影取景框转盘〞顺时针旋转，使其退出光路5〕调节目镜瞳距，将两目镜视场所见的影像重合在一起7. 调焦调焦1〕将样品放置载物台中2〕转动同轴粗微调旋钮，将标本对好焦8. 聚光器中心调节聚光器中心调节1〕确信10X 物镜在光路中2〕将“视场光阑调节杆〞降低直到能从目镜看到视场光阑像3〕转动“聚光器调焦钮〞升降聚光器，使视场光阑像清晰地成象在标本面上4〕转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在视场中心5〕更换40X 物镜6〕调理“视场光阑调节杆”，使视场光阑的象与视场大致相同7〕转动两个“聚光器中心调节螺钉”，使视场光阑像在视场正中。

9. 进行观察进行观察1〕选择要使用的物镜2〕移动系统聚光器上的“孔径光阑调节杆”，使孔径为物镜数值孔径的70－80%把目镜筒转盘〞设到＜B＞位置，转动勃氏镜调焦螺钉使其聚焦，当观察到物镜的出瞳和孔径光栏的象时，调节其大小3〕调理“视场光阑调节杆〞使视场光阑像与视场相大致相同4〕把透射照明器里的“ND 减光片〞进入或退出光路以调节视场亮度10. 更换样品更换样品n利用显微镜主体上的“物镜再聚焦定位环”，照明器上的“倾斜装置”，“聚光器再聚焦指紧螺钉，可容易更换样品11. 显微镜操作结束后显微镜操作结束后n1) 关闭电源开关(开关拨至O)n2) 灯室冷却后，把显微镜上的聚乙烯防尘罩盖好相差〔相差〔PH〕显微术〕显微术n 观察透明细胞或其他透明样品，需配相衬聚光器、相衬物镜、相衬环等附件相衬板将衍射光推迟1/4波长，振幅相减，样品暗，背景亮，称正反差或暗反差，分正低〔DL）、正低低〔DLL〕和中型暗相差〔DM）折光率较强的样品用后者相衬板将直射光推迟1/4波长，振幅相加，样品亮，背景暗，称负反差或明反差，分负中〔NM〕和负高〔NH）折光率较小的样品用后者n关键点：将有ph 标记的物镜与物镜相同ph 标记的聚光器模块一起送入光路，在进行显微术前，校正(对中)物镜里的相差板及聚光器模块里的环形光阑。

1. 用明视场〔用明视场〔BF〕显微术对样品聚焦〕显微术对样品聚焦2. 相差观察时对显微镜的调整相差观察时对显微镜的调整n1) 将ph 物镜转入光路n2) 转动“聚光器转盘”，使其与在光路中的物镜(步骤1中所安置的)具有相同的ph 标志n3) 向右转动聚光器上的“孔径光阑调节杆”，完全打开孔径光阑3. 对中环形光阑对中环形光阑n1) 把“目镜筒转盘〞设到位置，转动勃氏镜聚焦螺钉，使环形光阑像清晰n2) 用六角起子转动聚光器模块中的两个“环形光阑对中螺钉”，使环形光阑像与物镜中的相差板环形像同心n3) 把目镜筒转盘位置再转到上调中心手轮4. 进行观察进行观察n1) 把聚光器“孔径光阑〞完全打开n2) 移动透射照明器上的“视场光阑调节杆”，使视场光阑像大小与视场大小接近n3) 把透射照明器上的“NCB11 滤色片〞从光路中移开，把“GIF 滤色片〞移进光路提高反差)n4) 可通过把“ND 滤色片〞移进或移出光路来调节视场亮度5. 使用不同放大倍数的物镜进行观察使用不同放大倍数的物镜进行观察n1) 把所需放大倍数的相差物镜移入光路n2) 转动“聚光器转盘”，使其与在光路上物镜〔步骤1中所安置的〕具有相同的ph 标志。