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3T3-L1 前体脂肪细胞诱导分化小结 3T3-L1 前体脂肪细胞诱导分化小结 1、诱导液配制 先配母液： 先配母液： IBMX（（0.5 mM）） 碱性溶液或乙醇溶解，由于下面的 Dex 需要用乙醇溶解，所以这里建议用碱性 溶液溶解，因为乙醇对细胞分化有影响（可以查到相关文献） 100×母液配制：0.0115 g IBMX + 940 µl dd H2O + 60 µl 1 M KOH（0.22µm滤膜过 滤除菌，如果偷懒的话，也可省略，一般细菌很难在这么强的碱性溶液中存活） 这只是 1 ml 体积，你可以按照比例多配些保存温度我记不清了，你自己查一 下 Dex (1 µM) 配制成 1000×母液，98%乙醇溶解无需过滤除菌20 ℃保存 Insulin (10 µg/ml, 比文献中报道的浓度高， 可能是我买的胰岛素是分装的， 效价 比他们的低些，你可以稍微摸索一下) 配制成 300×母液 溶于 pH 2-3 稀盐酸或稀醋酸溶液，溶解后 0.22µm 滤膜过滤除菌，用 PCR 小管 分装，-20 ℃冻存，避免反复冻溶 以上母液配好后，下面来配诱导液：以上母液配好后，下面来配诱导液： 诱导液Ⅰ： 59 ml DMEM（10% FBS）+ 600 µl IBMX + 200 µl Insulin + 60 µl Dex 再加 140 µl DMEM 补齐到 60 ml 诱导液Ⅱ：59 ml DMEM（10% FBS）+ 200 µl Insulin 再加 800 µl DMEM 补齐到 60 ml 注：“59 ml DMEM”可以用 20 ml 或 30 ml 注射器加比较方便。

最终浓度： IBMX 0.5 mM Dex 1 µM Insulin 10 µg/ml 2、、 诱导分化程序诱导分化程序 按照经典的“鸡尾酒” 法进行诱导分化，稍微改动点，具体细节自己把握 一般第 5 天可以看到明显脂滴，第 8-10 天左右，能有 90%左右的分化率 未分化的 3T3-L1 第 5 天 以上所述，仅供参考许多细节自己可以根据实验结果来摸索调整 提前大家实验顺利，新年快乐！ xiaoma44 。