病理技术HE染色中的灰染现象和改善方法1.docx

病理技术HE染色中的灰染现象和改善方法 摘要：目的：探讨HE染色中细胞核灰染现象及改善方法,提高HE染色质量方法：收集30例HE 染色发灰的胃镜、肠镜和子宫内膜等不同类型的组织,重新切片,通过调整苏木素染色条件以及染色前对组织进行修复处理,设对照组,比较各种处理方法的染色效果结果：通过延长苏木素染色时间、1%冰醋酸及0.5%盐酸处理、水浴加热和PBS抗原修复液、EDTA抗原修复液分别采用水浴和高压修复处理，均能够不同程度地促进核染色,较好地改善HE 染色细胞核灰染现象,但以PBS高压处理法效果最佳结论：PBS高压处理法是HE染色细胞核灰染现象的一种有效处理方法[关键词] HE染色；细胞核灰染；改善方法；高压修复HE染色是病理形态学诊断最常用的方法一张优质的HE染色切片是正确诊断的前提，其细胞核和细胞质的对比染色必须是清晰的但在常规HE染色过程中，经常出现切片着色困难，细胞核着色淡、不着色或核染色发灰等,这些均属于灰染现象引起这种现象的原因有很多种［1-3］，如：术后新鲜组织未能及时固定导致组织有一定程度的自溶，从而改变细胞内的PH值；固定液种类和浓度的选择有误导致固定不充分；取材的组织块太厚或脱水时间不足引起脱水不彻底从而使组织发白发软；浸蜡时间过短、过久或浸蜡温度过高（特别是在包埋时，如果标本量太大，不能及时包埋极易引起组织块浸蜡时间过久），使细胞中蛋白质的酸、碱性物质均发生变性，同时组织固缩，其中的间隙变小，而不易被碱性染料染色；苏木素陈旧导致染色能力下降等。

经实验，对细胞核着色发灰的30例组织进行重新切片，采用多种不同的方法进行处理，染色后比较发现，PBS高温高压修复处理的切片染色效果最佳1. 材料与方法1. 组织材料 收集浙江大学医学院附属第四医院病理科HE染色细胞核灰染的胃镜、肠镜、子宫内膜等30例标本，重新切片，切片厚度为3-4um1.2 仪器设备 美的电磁炉（1000W）；苏泊尔家用高压锅（内径20cm）；耐高温塑料修复盒1个；耐高温塑料切片架1个1.3 试剂 PBS抗原修复液(PH7.2-7.4)、EDTA抗原修复液(PH8.0)、1%冰醋酸及0.5%盐酸、Harris苏木素、水溶性伊红1.4 方法 具体步骤：（1）石蜡切片3-4um，切片脱蜡至水（2）切片分组处理，A:常规法(对照组),室温下未经任何处理的切片直接浸染Harris苏木素10min；B:延长时间法,室温下将Harris苏木素染色时间延长至30min；C:水浴加热法,将切片置于湿盒内放入37℃水浴箱中, Harris苏木素滴染10min；D: 高压加热法,将切片置于耐高温染色缸内,放入高压锅内, Harris苏木素滴染10min；E:1%冰醋酸处理2min，0.5%盐酸处理2min［3］，Harris苏木素染色10min；F:参照免疫组化抗原修复法［4］取PBS抗原修复液、EDTA抗原修复液，分别煮沸5min和高温高压2min，自然冷却至室温后水洗，Harris苏木素染色10min (3)苏木素染色完毕,依次进行分化、返蓝、伊红染色、脱水、透明、中性树胶封固，显微镜下观察。

3 结果8种方法对HE灰染切片处理效果的比较处理方法组织清晰度细胞核染色核浆对比情况对照组不清晰差差延迟苏木素时间较清晰较好稍差1%冰醋酸和0.5%盐酸不清晰差较差水浴加热不清晰较差较差高压加热较清晰稍差稍差PBS水浴加热较清晰好好EDTA水浴加热较清晰良好较好PBS高压加热清晰好好EDTA高压加热较清晰良好较好对照组常规法HE染色的切片，细胞核出现明显的灰染现象，组织结构模糊不清，核浆比不清晰，细胞核内结构难以观察清楚延长苏木素染色时间及水浴加热的方法均在不同程度上促进了细胞核的着色，苏木素染色加深，但核浆对比还是不够清晰，切片略发灰尤其腺体部位发白，增加了组织学诊断的困难以1%冰醋酸与0.5%盐酸处理后，组织结构模糊不清，无法辨认，且切片染色偏红直接高温高压处理后的切片苏木素着色加深，但核浆对比不够理想，未能完全达到诊断医生阅片的要求以PBS（PH7.2-7.4）抗原修复液、EDTA（PH8.0）抗原修复液煮沸修复和高温高压修复的切片，均能较好的改善细胞核的灰染现象，使整个组织细胞的基本形态清晰可见，核、质染色形成鲜明对比，透明度佳其中以PBS为修复液，用高温高压处理细胞核灰染的效果最明显，HE染色最好，与未进行处理的HE相比，HE染色效果明显改善。

具体见图1、21. ②图1：HE染色不良 HE*20图2：PBS高温高压处理 HE*204 讨论染料与被染物质结合后着色的过程是相当复杂的，应该说大多数染色的原理至今仍为完全搞清楚目前大家比较认同的观点是：在染色过程中，染料与被染物质间既有物理作用，又有化学作用，是两者共同作用的结果苏木精-伊红染色简称HE染色，是细胞与组织学中应用最为广泛的染色方法组织细胞内的物质一般分为酸性和碱性，部分酸性物质能与溶液中的阳离子结合，部分碱性物质能与溶液中的阴离子结合在细胞核中，特别是核内染色质，一般由酸性物质组成，故与碱性染料的亲和力强，如HE染色中的苏木精染料常规病理活检组织制片HE染色常出现细胞核染色发灰，呈局部或成片淡染发白，核浆对比对差等问题，这些均属于灰染现象本实验中，关于HE染色细胞核灰染的处理方法有延长苏木素染色的时间、水浴加热法、高温高压处理法、加酸处理法及PBS、EDTA修复液水浴和高温高压修复法，对各种不同的处理方法进行综合比较，结果发现延长苏木素染色时间能够使细胞核着色加深，但核灰染现象未能全部改善；水浴加热和高温高压加热均提高了苏木素与细胞核的着色能力，但核浆对比仍然不够鲜明，腺体染色略灰；加酸处理的方法改变了细胞内的PH值，组织结构模糊不清，无法辨认，且切片染色偏红；PBS、EDTA、柠檬酸修复液分别通过水浴和高温高压处理均能不同程度地改善细胞核灰染现象，尤其是PBS 高温高压处理法效果最好。

且PBS 相比EDTA更好地提供了一个PH 适中的缓冲水环境，使组织细胞内的酸、碱性物质部分恢复或接近原带电荷状态[5],促进与染色基团的结合,使核浆染色更接近原来的水平综上所述，改善灰染现象有许多方法，但以PBS高温高压修复效果最佳HE染色良好是制片的关键步骤，也是医生正确诊断的基础，所以，在日常工作中，我们要做好切片的质控工作，预防灰染等不良现象的发生，即使发生了也要做好解决善后工作，该实验的灰染现象处理方法较为迅速简单，可以应用与病理的日常工作［1］马恒辉，周晓军，HE染色常见问题与对策［J］.临床与实验病理学杂志，2008，24(4):478-81.［2］宋平，张世华，杨淑云，等,HE染色切片染色质量差的原因及处理方法［J］.诊断病理学杂志，1995，2(1):52.［3］孙晓荣，陈宇,HE染色细胞核发灰的补救处理［J］齐鲁医学检验，2005，16(4):68.［4］陈龙，周晓春，齐洁敏，等,抗原修复技术在免疫组化中的应用［J］,承德医学院学报，2004，21(4):325-7.[5]汪晓军,高凌云.一种处理HE 染色细胞核灰染的新方法.临床与实验病理学杂志,2011,27(11):1253-1254.-全文完-。