121分解纤维素的微生物的分离.ppt

课题课题3专题专题2 2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用纤维素是地球上含量纤维素是地球上含量最丰富最丰富的多糖类物的多糖类物质，是质，是天然有机高分子化合物天然有机高分子化合物：自然界：自然界中纤维素中纤维素含量最含量最高高的天然产物是的天然产物是棉花棉花，，含量达含量达9292％～％～9595％，％，亚麻达亚麻达8080％，此外木％，此外木材、作物秸秆也富含材、作物秸秆也富含纤维素纤维素纤维素C C1 1酶、酶、C CX X酶酶纤维二糖纤维二糖葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纤维素酶纤维素酶思考：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，但却不会在地球上大量的积累，为什么？筛选菌株：刚果红染色法筛选菌株：刚果红染色法刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖成红色复合物，而不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应当纤维素被纤维和葡萄糖发生这种反应当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红素酶分解后，刚果红——纤维素复合物就无纤维素复合物就无法形成，培养基中就会出现以纤维素分解法形成，培养基中就会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈菌为中心的透明圈原理原理筛选菌株：刚果红染色法筛选菌株：刚果红染色法方法常用的刚果红染色法有两种，常用的刚果红染色法有两种，一种一种是先培养微生物，再加入刚果红进是先培养微生物，再加入刚果红进行染色反应，另一种是在倒平板时行染色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红就加入刚果红讨论：这两种方法各有哪些优点与不足？答：方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加答：方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。

作用方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂的问题，缺方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂的问题，缺方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂的问题，缺方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂的问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应，但这可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应，但这可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应，但这可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应，但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分的透明圈相区分的透明圈相区分。

的透明圈相区分方法二的另一缺点是：有些微生物具方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间的有降解色素的能力，它们在长时间的培养过程中会降解刚果红形成明显的培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分透明圈，与纤维素分解菌不易区分实验设计实验设计一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、所需仪器、材料、用具和药品三、所需仪器、材料、用具和药品四、实验的方法和步骤四、实验的方法和步骤五、分析结果五、分析结果实验设计实验设计一、实验目的一、实验目的1 1、利用特定的选择培养基和鉴别培养、利用特定的选择培养基和鉴别培养基从土壤中分离分解纤维素的微生物基从土壤中分离分解纤维素的微生物2 2、掌握刚果红染色的机理和操作掌握刚果红染色的机理和操作实验设计实验设计三、所需仪器、材料、用具和药品三、所需仪器、材料、用具和药品1 1、实验仪器与用具、实验仪器与用具除了分离分解尿素的细菌中用到的除了分离分解尿素的细菌中用到的外，还需要恒温振荡培养箱外，还需要恒温振荡培养箱2 2、材料与药品、材料与药品四、实验的方法和步骤四、实验的方法和步骤实验设计实验设计1 1、、配培养基配培养基2 2、灭菌、灭菌3 3、、土壤取样土壤取样5 5、样品稀释、样品稀释6 6、涂布接种、涂布接种4 4、、选择培养选择培养7 7、、筛选菌落筛选菌落课题延伸课题延伸本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选。

本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选但是这还只是分离纯化的第一步为确定得到是纤维但是这还只是分离纯化的第一步为确定得到是纤维素分解菌，还需要进行素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶的实验，纤的实验，纤维酶的发酵方法有维酶的发酵方法有液体发酵液体发酵和和固体发酵固体发酵两种1 1、固体发酵：指微生物在没有或几乎没有游离、固体发酵：指微生物在没有或几乎没有游离水的固态的湿培养基上发酵的过程水的固态的湿培养基上发酵的过程2 2、液体发酵：呈液体的微生物发酵过程液体发酵：呈液体的微生物发酵过程现代微生物工业多为液体发酵，因适用面广，现代微生物工业多为液体发酵，因适用面广，可精确调控、效率高、可机械化和自动化可精确调控、效率高、可机械化和自动化3 3、纤维素酶的测定、纤维素酶的测定一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定生的葡萄糖进行定量的测定4 4、葡萄糖的测定、葡萄糖的测定葡萄糖分子结构中含有还原性基团，可与斐林葡萄糖分子结构中含有还原性基团，可与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀试剂发生作用，生成砖红色沉淀       采用新鲜牛肉经剔除脂肪、消化、过滤、采用新鲜牛肉经剔除脂肪、消化、过滤、浓缩得到的一种棕黄色至棕褐色膏状物。

有浓缩得到的一种棕黄色至棕褐色膏状物有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色     牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类的水溶性物质广泛应用于生物及维生素类的水溶性物质广泛应用于生物制药发酵及各种培养基的制备制药发酵及各种培养基的制备     在当中它起的主要作用是补充蛋白胨以在当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及其它氮源的营养不足一般的用量为及其它氮源的营养不足一般的用量为0.3%0.3%～～0.5%0.5%1 1、、牛肉膏牛肉膏     是微生物培养基的主要基础成分，是微生物培养基的主要基础成分，蛋蛋白胨白胨是由蛋白质经酶、酸、碱水解而获得是由蛋白质经酶、酸、碱水解而获得的一种胨、肽、氨基酸组成的水溶性混合的一种胨、肽、氨基酸组成的水溶性混合物主要作用提供氮源物主要作用提供氮源, ,除此处，还可以除此处，还可以提供提供C C源和生长因子其来源由：动物组源和生长因子其来源由：动物组织蛋白、植物组织蛋白、微生物蛋白质。

织蛋白、植物组织蛋白、微生物蛋白质2 2、、蛋白胨蛋白胨       酵母膏实际上是膏状的酵母抽提物，酵酵母膏实际上是膏状的酵母抽提物，酵母抽提物是国家行业标准的规定名称母抽提物是国家行业标准的规定名称     酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法或加酶水解法工艺，经分离、脱色（或精制或加酶水解法工艺，经分离、脱色（或精制浓缩、喷雾干燥）而成的，含氨基酸、肽、浓缩、喷雾干燥）而成的，含氨基酸、肽、多肽及酵母细胞水溶性成分的产品包含粉多肽及酵母细胞水溶性成分的产品包含粉状、与膏状的产品状、与膏状的产品     酵母膏可以有食品调味与生物发酵培养酵母膏可以有食品调味与生物发酵培养基两大类用途在生物发酵行业应用还有一基两大类用途在生物发酵行业应用还有一种习惯叫法是酵母浸膏种习惯叫法是酵母浸膏3 3、、酵母膏酵母膏l微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白水解得到，常见商品名称为水解酪素或水解得到，常见商品名称为水解酪素或酶解酪素酪蛋白水解后富含酶解酪素酪蛋白水解后富含2121种氨基种氨基酸，氨基酸种类齐全因此常用于制备酸，氨基酸种类齐全。

因此常用于制备培养基4.4.酪素酪素。