血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告.docx

血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告实验名称 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量实验日期 实验地点 xx 实验室合作者 xxx 指导老师 xxx评分 教师签名 批改日期一、实验目的1.1. 学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；1.2. 了解电泳技术的一般原理；1.3. 掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法二、实验原理2.1. 血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于 pH7.4它们在 pH8.6 的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％清蛋白4.6469,00057～ 72α1－球蛋白5.06200,0002～ 5α2－球蛋白5.06300,0004～ 9β－球蛋白5.1290,000～150,0006.5～12γ－球蛋白6.85～7.3 156,000～950,00012～ 20缓冲液 pH=8.6，pI ＜pH血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动预测血清蛋白电泳区带图血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α 1、α 2、β、γ五个区带2.3. ①膜条经过氨基黑 10B 染色后显出清晰色带； ②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。

三、材料与方法：3.1. 实验材料：实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥 - 巴比妥钠缓冲液（ pH8.6，离子强度 0.06mol/L ）；③氨基黑 10B 染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH 溶液实验器材： ①V-1100 分光光度计（× 1）；②恒温水浴箱（× 1）；③试管（×6）、试管架（× 1）；④ 1000μ L 加样枪（× 1）、加样枪架（× 1）；⑤醋酸纤维薄膜（ 2cm*8cm，厚度 120μ m）；⑥培养皿（× 5）；⑦点样器或载玻片（× 1）；⑧平头镊子（× 2）；⑨剪刀（× 1）；⑩电泳槽（× 1）； ? 直流稳压电泳仪（× 1）3.2. 实验步骤1．准备与点样：①取 2×8cm的膜条；②亚光面距一端 1.5cm 处取一点样线；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样点样示意图：注意：点样线尽量点得细窄而均匀8cm +—小组标记 点样线m点样区 (粗面） 2cm样品标记1.5cm2. 电泳：①放置膜条（点样面向下，点样端置于阴极）；②膜条贴紧滤纸，拉直膜条；③平衡五分钟；④通电（调节电压 120v/ 电流，时间： 45~60 min ）；③关闭电源。

电泳槽解剖图：3. 染色、漂洗：①通电完毕；②取出膜条；③浸于染色液（氨基黑 10B）中，5min；④取出膜条，浸于漂洗液；⑤反复漂洗 2 次，直至漂净；⑥滤纸吸干薄膜4. 定量（洗脱比色法）（因实验室等原因，未做）四、结果与讨论：图一 染色后的膜条4.1. 结果分析本次实验得到的图谱只能够清晰的看出清蛋白和γ－球蛋白的区带，其余无法区别原因可能如下：①醋酸纤维薄膜质量不足②薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不成区带③点样太少，区带显色不明显④电泳时间不足⑤薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足⑤取出电泳后的薄膜过程中曾不慎将薄膜掉到地上⑥染色时，因为现场混乱，可能导致醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染色液的，在染色固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜上还未固定的血清蛋白彼此粘连4.2. 课后思考题1. 电泳时，点样端置于电场的正极还是负极？为什么？答：点样端置于电场的负极因为人体血清的蛋白质会因电槽中溶质呈碱性而带负电，要成功分离出各类各类蛋白质，理应将点样端置于电场的负极2. 电泳后各区带应明显分开 , 如分离不清或不整齐 , 试分析其可能存在的原因答：①醋酸纤维薄膜质量不足；②薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不成区带；③点样太少，区带显色不明显；④染色时，醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染色液的，在染色固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜上还未固定的血清蛋白彼此粘连。

⑤电泳时电压，电流或电泳过小或时间不够，造成区带未分离。