高效液相色谱仪Agilent1100仪器结构和操作.pdf

Agilent 1100 型高效液相色谱仪[美国 Agilent 公司] 一．仪器原理及结构高效液相色谱（简称HPLC）是色谱法中最重要的一个分支与气相色谱相比，HPLC的分离模式更为多样化，适用样品范围更广它不仅能分离高沸点、强极性和热不稳定的化合物，而且适合于离子性、大分子及具有生物活性的化合物的分离据估计，自然界20%的已知化合物能用气相色谱直接分析，而70%以上都可用HPLC 分析另外，经HPLC 分离后的样品组分很容易收集，故能用于制备分离HPLC 有多种分离模式， 但其仪器结构都基本相同，仪器流程如下： 流动相置于储液瓶，由四元泵输入系统， 样品用自动进样器从进样阀引入，经色谱柱分离后进入检测器进流动池，吸光度信号经放大后由记录仪记录检测器则主要有UV-VIS 、二极管阵列、示差折光、荧光、电化学及质谱等图3-4 为 Agilent 1100 HPLC仪器的结构示意图，它主要由下面几部分组成：（1）真空脱气机：高性能脱气，避免了烦琐的操作，可提高仪器的稳定性2）四元输液泵：Agilent 1100 泵是采用新的单向结构的活塞泵流量设定范围从0.2至 10mL·min-1，精度 0.1mL·min-1。

该泵可自动监测压缩性补偿值，保持高压条件下的流量准确度其压力上限可在0-4×104kPa(0-6000psi) 的范围内调节3）自动进样器： 样品盘容量100×2mL ， 样品进样体积为0.1-1500 μ L具有操作简便，准确度高，重现性好的特点4）柱温箱：控温范围：低于室温10℃-80℃，可容纳30cm 长的色谱柱，样品在此分离根据样品类型和分离模式，可选用各种不同的液相色谱柱1. 溶剂柜2. 真空脱气机3. 排液阀4. 四元泵5.自动进样器6. 柱温箱7. 检测器图 3-4 Agilent 1100 HPLC 仪器结构示意图（5）DAD 检测器：波长范围190-950nm，可变狭缝，可进行自动峰检索，利用紫外谱图进行峰确认检测最高灵敏度为± 1×10-5AU ( 满量程为吸光度单位)6) 计算机化学工作站用于记录色谱图及处理数据 二．仪器操作（1） 流动相准备 液相色谱对所用流动相要求纯度高，所有溶剂， 包括水，均须是 HPLC级的 若仪器配有多元泵和梯度装置，则可将不同溶剂分别置于不同的储液瓶若仪器时单泵时， 只能进行等度操作，故当流动相不是单一溶剂时，必须在使用前混合好，然后进行过滤和脱气处理。

溶剂过滤通常用专用过滤器常用滤膜孔径有0.45 和 0.22 μm 两种，使用常规色谱柱（2.1~4.6 mm I.D. ）时用前者即可，使用微径柱时则应用后者注意，滤膜有水相和有机相之分， 分别用于相应的溶剂若流动相不经过滤就使用，一些可能存在于流动相中的固体颗粒物质将会损坏HPLC 泵及堵塞色谱柱溶剂脱气有多种方法，如加热脱气、真空脱气、超声波脱气和通氦气脱气现在很多HPLC 仪器都有内置脱气装置，但仍须在使用前除去流动相中溶解的气体（主要是空气和氧气） ，因为如不除去这些气体，就会在液路中形成气泡，干扰仪器的正常工作此外，流动相中的氧气还可能与固定相或样品反应，这对分析都是不利的这里我们建议使用超声波脱气方法，该法简便、易行，成本低注意：样品一般也应过滤处理，尤其是系统没有保护柱时2）四元泵的操作Agilent 1100 四元泵采用四个进口，一个出口的可编程比例阀设定流量，操作简便直观操作过程中应注意的问题是：① 接通电源之前， 将流量设为0.0mL ·min-1先用 10mL 专用注射器从排液阀（purge）抽去泵前管路中可能有的气泡，然后，接通电源，再按分析要求设定流量② 分析样品之前应设定上限，以保护色谱柱。

一般一根长25cm 的色谱柱其压力上限可设为 400bar，这样当液路堵塞，压力超过上限值时，泵就会自动停止工作发生这种情况时，操作者应找出压力升高的原因并排除故障然后再启动泵重新工作3）手动进样器的操作：① 将进样阀手柄置于“Load” （右边）位置；② 将样品保持手柄置于开启（垂直）位置；③ 取下样品保持塞，并将其插入进样阀门手柄上的孔中，这样可防止未加塞而进样④ 将已吸取样品的注射器插入进样口（插到底），把所需体积的样品注入进样阀的样品环中；⑤ 拔出注射器，将样品保持塞插回原位；⑥ 将样品保持手柄旋回关闭（水平）位置，再将进样阀手柄置于“Inject（进样）”位置，与此同时，按一下检测器上的标记按钮，开始记录色谱图这样就完成了进样操作进样后（一般需数秒钟时间，样品环中的样品溶液可进入色谱柱），进样阀门手柄的位置应按以下原则放置：如果是梯度洗脱、或者是等度洗脱时下一个样品尚未准备好，则让手柄留在“Inject ”位置； 如果是循环分析、或者是下一个样品已准备好，一旦此次样品分析完便可进样，则将手柄置于“ Load”位置4）检测器操作Agilent 1100 DAD检测器的操作是在化学工作站上进行，只要设置合适的检测波长、狭缝大小等操作参数，就可记录下所需的色谱图。

DAD 检测器还具备内部自检功能以及多种信号控制功能，详细操作方法及注意事项请参看仪器操作手册。