不同土壤因子与虎杖主要成分的相关性分析药学论文.doc

不同土壤因子与虎杖主要成分的相关性分析_药学论文 作者：马云桐，万德光，黄清龙【摘要】 　　目的测定不同区域虎杖生长的土壤因子中养分含量及对应虎杖药材中主要成分含量，并对之进行相关比较分析，为虎杖不同产地药材的质量评价及栽培中 科学 施肥提供依据方法采用 文献 方法测定土壤养分及药材中主要成分的含量，并对所测数据进行多重性比较与相关分析结果不同地域土壤养分含量、虎杖主要成分含量间有显著与极显著差异结论 有机质、速效性N，P，K含量高的土壤，药材中主要成分的含量高因此，在虎杖的生育进程中及时补充速效性N，P，K营养元素，保持土壤肥力的均衡供给是确保虎杖品质的基础条件 【关键词】 虎杖 土壤养分 大黄素 虎杖苷 相关分析　　中药虎杖为蓼科虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根及根茎具有祛风利湿、散瘀定痛、治痈肿疮毒等作用［1］虎杖中主要含有蒽醌类、二苯乙烯类、水溶性多糖和鞣质等成分［2］，其中大黄素、虎杖苷是其主要有效成分 现代 药 理学 实验表明大黄素、虎杖苷对人体有许多医疗保健作用［3～5］，主要包括强心扩张血管降压［6］、抗血栓形成［7，8］、降血脂［9］、镇咳［10］、保肝利胆［11］、抗菌［12～14］、抗病毒［15］、抗癌等［16］药理作用。

　　植物中次生代谢物质的形成与积累除了随季节的气候（气温、湿度、日照等）变化外，亦受土壤中矿质营养、肥力等因素的影响近十余年来，国内外对虎杖中大黄素虎杖苷的提取技术、测定方法等进行了大量研究［17～20］，但尚未见有关土壤营养状况差异与虎杖药材主要有效成分间的相关性分析本研究对分布在四川10个不同地区的虎杖材料中大黄素、虎杖苷及生长地的土壤养分含量进行测定，所测数据采用多重比较与相关分析，比较了不同营养状况下的虎杖品质差异，对虎杖的规范化栽培、肥料的合理施用及高品质药材的获得均有一定的指导意义　　 1 器材 　　1.1 材料　　实验土壤、药材由作者于200408～09采自四川的不同地区根据取样的广泛性与代表性原则，每个采样地点选取大小、生长情况基本一致的鲜根茎和分别以五点式掘取土壤样品， 自然 状态下去除表面水分后，均带回室内处理　　土壤样品于室内自然风干，经磨细过筛处理备用；采得的虎杖根及根茎经加工切片后，放置自然通风处风干，于60℃下烘24 h，干后粉碎，并过筛装袋备用　　1.2 仪器与试剂　　Agilent1100高效液相色谱仪，SPD-6AV紫外可见检测器甲醇、乙腈为色谱纯；乙醇、浓硫酸、三氯甲烷为分析纯；水为重馏水；大黄素（批号110756－200110）、虎杖苷（批号111575－200301）均由 中国 药品生物制品检定所提供。

　　 2 方法与结果 　　2.1 测定样品的制备　　2.1.1 大黄素样品的制备　　取前述制备的样品粉末（过3号筛）约0.1 g，精密称定后置于125 ml圆底烧瓶中，加入三氯甲烷25 ml和2.5 mol·L-1硫酸溶液20 ml，称定重量，置80℃水浴中加热回流2 h，冷却至室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀分取三氯甲烷液，精密量取10 ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得　　2.1.2 虎杖苷样品的制备　　取样同上，置于125 ml圆底烧瓶中，加入稀乙醇25 ml，加热回流30 min，冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，过滤即得　　2.2 土壤养分测定　　分别精密称取风干土样（准确到0.001 g），按下述方法测定：全氮用高氯酸-硫酸消化蒸馏法；速效氮用氯化钾提-蒸馏法；全磷用高氯酸-硫酸酸溶-钼锑抗比色法；速效磷用碳酸氢钠-硫酸钼锑抗混合显色法；全钾用氢氧化钠-钾钠离子测定法；速效钾用中性醋酸铵；有机质用重铬酸钾氧化法；pH值用氯酸钾浸提电位测定法结果见表1　　2.3 样品测定　　分别精密吸取5，10 μl上述测定样及预制的对照品，注入液相色谱仪分别测定。

色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱Kromasil ODS C18 (5 μm，4.6 mm×150 mm)；条件分别为：大黄素是以甲醇－0.1%磷酸溶液（80∶20）为流动相；检测波长为254 nm；体积流速为1 ml·min-1；柱温为室温；虎杖苷是以乙腈－水（23∶77）为流动相；检测波长为306 nm；体积流速0.4 ml·min-1；柱温29℃将测定的峰面积，按预制的标准曲线项下的回归方程分别求得大黄素、虎杖苷的质量，再 计算 出虎杖中大黄素、虎杖苷的含量结果见表1表1 各采样点的土壤养分与虎杖中主要有效成分含量（略） 　　2.4 数据处理　　以每个点的土样中全氮、全磷、全钾、速效氮、有效磷、速效钾、有机质；对应点虎杖药材中大黄素、虎杖苷等所测定的结果建立分析数据库，计算后进行多重比较与相关分析　　2.5 不同地域土壤养分与虎杖中主要成分含量比较　　结果见表2虎杖中大黄素的含量是大邑的为最高，邻水其次；马边、巴中最低；虎杖中有效成分虎杖苷的含量是邻水为最高，马边和都江堰其次；宜宾、峨眉最低表2 不同产地土壤养分与虎杖中有效成分含量多重比较（略）　　结果表明，邻水、大邑土壤pH值呈中性，全氮、全磷含量高的土壤中速效性氮和有效磷含量亦高，这有利于植株吸收利用，从而促进次生物质代谢和大黄素的积累；马边、巴中两地土壤pH值显示近酸性（pH﹤6.0），全氮、全磷处于不可利用状态，速效性氮和有效磷含量低而影响了虎杖根系对它们的吸收利用，从而限制了大黄素的积累，速效性钾的含量较高的地方有效成分含量也高，说明虎杖植株在正常的生长发育过程中，次生物质的代谢、大黄素、虎杖苷的合成与积累与K+ 有关，这可能是大黄素、虎杖苷生物合成过程中的酶需要K+作辅助因子或激活剂，尚需深入研究。

　　2.6 不同地域土壤养分与虎杖有效成分含量间的相关分析　　见表3虎杖中主要有效成分与土壤中不同养分间的相关关系分析表明：所测土壤养分中，速效磷与大黄素的积累相关不显著，全氮、速效钾有显著正相关，其余均达极显著水平，有利于促进虎杖植株体内大黄素的积累其中全磷与大黄素的积累呈极显著正相关，而有效磷与大黄素的积累相关不显著分析可见：全磷促进植株对水解氮和有机质的吸收，其正向相关性极显著植株中虎杖苷的积累与土壤中全氮、有机质呈极显著正相关，与其它养分间相关不显著，因此，土壤中全氮、有机质含量增高可促进虎杖苷的形成和积累表3 虎杖有效成分与土壤因子间的简单相关系数（略）　　 3 讨论　　综合表1～3中的数据显示及上述分析：　　虎杖药材大黄素和虎杖苷的含量以邻水产最高，质量为佳，其次是都江堰、大邑、马边，主要是邻水土壤肥力最高（表1和表2），呈中性（pH=7.04）由此可以认为，要获得优质的虎杖药材，必须提高土壤肥力，同时保持土壤中性，才有利于土壤肥效的发挥　　虎杖中虎杖苷、大黄素的同步积累，则应土壤中全氮和有机质含量的同向增高若只要求增加大黄素的含量，则应注重肥力的均衡性，除有效磷之外，所有养分均应同步提高；若只需虎杖苷的积累，有机质、全氮应同向增加。

　　因此，在虎杖规范化种植过程中，首先要选择土质肥沃、有机质含量高的土壤，并加以改良；其次在虎杖的正常生长发育过程中，应及时补充土壤供肥之不足，尤其是补充速效性的N，P，K肥料三要素，增施有机肥，改善土壤质地，确保虎杖商品的质量 参考 文献 】 　　［1］国家药典委员会. 中国 药典，一部［S］.北京：化学 工业 出版社，2005：145.　　［2］伍晓春，陆豫.虎杖的药理作用及临床应用研究进展［J］.中医药信息，2005，22（2）：22.　　［3］Burkhardt S, Reiter RJ, Tan DX,etal.DNA oridatively damaged by chromium (Ⅲ) and H2O2 is protected by the antioxidants melatonin.N(1)-acetyl-N(2)- fomyl-5-methoxykynuramine, resveratrol and uric acid［J］. Int J Biochem, Cell Biol,2001,33(8):775.　　［4］Jang M,Cai L,Udeani G O,etal.Cancer chemopreventive activity of resveratrol,a natural product derived from grapes［J］.Science,1997,275(1):218.　　［5］Ganini S.J,Hiranthi J.Eung-Seok L.etal.Kinase inhibitors from Plygonum cuspidatum J［J］.Natral Prod,1993,56(10):1805.　　［6］骆苏芳.虎杖结晶4号对兔血管的舒张作用［J］.第一军医大学学报,1992，12(1)：10.　　［7］刘连噗.虎杖晶4号对兔血小板超微结构的影响［J］.第一军医大学学报，1998，18(2)：105.　　［8］顾月卿.虎杖晶Ⅳ对培养人脐静脉内皮细胞释放前列腺素及形态学的影响［J］.中药药理与临床，1991，7(5)：17.　　［9］中国人民解放军广字173部队化学教研室、药理教研室.复方阴阳莲的实验研究［J］.新医学杂志，1973，12：31.　　［10］唐望先.肝炎平对急性肝损害时脂质过氧化作用的实验研究［J］.同济医科大学学报，1998,27(1):5.　　［11］洪照友，高毅，詹兴海.中药虎杖对大鼠肝脏缺血性损伤保护的形态学观察［J］.世界华人消化杂志，1981，8(1)：25.　　［12］朱廷儒,王素贤,裴月湖,等.中药虎杖抗菌活性成分的研究［J］.中草药,1985，10(3)：21.　　［13］Wang H .H. Antitrichomonal action of emodin in mice［J］.Ethnophan-nacol. 1993，40(2 )：11.　　［14］张长生，曾志良，李骊.复方虎杖液对四种致病性真菌的抑制菌试验报告［J］.湖北中医学院学报，2000，2(2)：50.　　［15］王志浩，黄铁牛，郭淑芳，等.虎杖大黄素对豚鼠皮肤I型人疱疹病毒感染的 治疗 作用［J］.安徽中医学院学报，2003，22(4)：36.　　［16］胡凯文，侯丽，陈信义，等.大黄酸、大黄素抗多药耐药肿瘤细胞研究［J］.中国中医基础药学杂志，1998，4（11）：19.　　［17］肖凯，宣利江，徐亚明，等.虎杖的化学成分研究［J］.中国药学杂志, 2003,38(1)：12.　　［18］Langcake P，Pryce R J.the production of resveratrol and the viniferins by grapevine in response to ultraviolet irradiation［J］.Phytochemistry，1997,16(8)：1193.　　［19］王文俊，吴咸中，姚智.大黄素、丹参素对单核细胞分泌炎性细胞因子的调节［J］.中国免疫学杂志，1995,11(6)：370.　　［20］Schrodeer G，Brownj W，Schroder J.Molecular analysis of resveratrol synthase: C: DNA，genomic clones and relationship with chal come sy。