大肠杆菌生长曲线的制作培训课件.ppt

大肠杆菌生长曲线的制作大肠杆菌生长曲线的制作Ø生长曲线生长曲线 将将少少量量纯纯种种单单细细胞胞微微生生物物接接种种到到定定量量的的液液体体培培养养基基中中，，定定时时取取样样测测定定细细胞胞数数量量，，以以培培养养时时间间为为横横坐坐标标，，以以菌菌数数为为纵纵坐坐标标作作图图，，得得到到一一条条反反映映单单细细胞胞微微生生物物在在整整个培养期间菌数变化规律的曲线个培养期间菌数变化规律的曲线一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期稳定期和衰亡期四个时期二、实验原理二、实验原理 2大肠杆菌生长曲线的制作生长曲线一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期微生物生长曲线示意图微生物生长曲线示意图3大肠杆菌生长曲线的制作微生物生长曲线示意图3大肠杆菌生长曲线的制作大肠杆菌生长曲线的制作培训课件2 2、对数期、对数期 特点：特点：生长速率生长速率最快、代谢旺盛、最快、代谢旺盛、酶系活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、酶系活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、细胞的化学组成形态理化性质基本一致。

细胞的化学组成形态理化性质基本一致 成因成因: :经过调整期的准备，为此时期经过调整期的准备，为此时期的微生物生长提供了足够的物质基础，同时的微生物生长提供了足够的物质基础，同时外界环境也是最佳状态外界环境也是最佳状态5大肠杆菌生长曲线的制作2、对数期5大肠杆菌生长曲线的制作3 3、稳定期、稳定期 特点：活细菌数保持相对稳定、总细特点：活细菌数保持相对稳定、总细菌数达到最高水平、细胞代谢产物积累达到最菌数达到最高水平、细胞代谢产物积累达到最高峰、是生产的收获期高峰、是生产的收获期 成因：营养的消耗使营养物比例失调、成因：营养的消耗使营养物比例失调、有害代谢产物积累、有害代谢产物积累、PHPH值等理化条件值等理化条件不适宜6大肠杆菌生长曲线的制作3、稳定期6大肠杆菌生长曲线的制作4 4、衰亡期、衰亡期 特点特点: :细菌死亡速度大于新生成的细菌死亡速度大于新生成的速度、整个群体出现负增长、细胞开始畸速度、整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细胞死亡出现自溶现象形、细胞死亡出现自溶现象。

成因：主要是外界环境对继续生成因：主要是外界环境对继续生长越来越不利、细胞的分解代谢大于合成长越来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、继而导致大量细菌死亡代谢、继而导致大量细菌死亡7大肠杆菌生长曲线的制作4、衰亡期7大肠杆菌生长曲线的制作 根据微生物的生长曲线可以明确微生根据微生物的生长曲线可以明确微生物的生长规律，对生产实践具有重大的指导意物的生长规律，对生产实践具有重大的指导意义 根据对数期的生长规律可以得到培养根据对数期的生长规律可以得到培养菌种时缩短工期的方法菌种时缩短工期的方法: :接种对数期的菌种接种对数期的菌种, ,采采用最适菌龄，加大接种量，用与培养菌种相同用最适菌龄，加大接种量，用与培养菌种相同组成的培养基组成的培养基 根据稳定期的生长规律，可知稳定期根据稳定期的生长规律，可知稳定期是产物的最佳收获期，也是最佳测定期是产物的最佳收获期，也是最佳测定期，通过，通过对稳定期到来原因的研究还对稳定期到来原因的研究还促进了连续培养原促进了连续培养原理的提出和工艺技术的创建。

理的提出和工艺技术的创建8大肠杆菌生长曲线的制作 根据微生物的生长曲线可以明确微生物的生长规律微生物数量的测定方法微生物数量的测定方法Ø平板菌落计数法平板菌落计数法Ø显微镜直接计数法显微镜直接计数法Ø光电比浊法光电比浊法9大肠杆菌生长曲线的制作微生物数量的测定方法平板菌落计数法9大肠杆菌生长曲线的制作Ø平板菌落计数法平板菌落计数法对样品稀释培养，据形成的菌落数计数对样品稀释培养，据形成的菌落数计数优点：优点：活菌计数方法，对设备要求不高活菌计数方法，对设备要求不高缺点：缺点：操作复杂操作复杂Ø显微镜直接计数法显微镜直接计数法使用血球计数板在显微镜下直接计数使用血球计数板在显微镜下直接计数优点：优点：操作简便，计数直观操作简便，计数直观缺点：缺点：计数结果为活细菌和死菌体的总和计数结果为活细菌和死菌体的总和10大肠杆菌生长曲线的制作平板菌落计数法对样品稀释培养，据形成的菌落数计数显微镜直接Ø光电比浊法光电比浊法光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比的原理当细菌细胞在胞浓度与透光度成反比的原理当细菌细胞在溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收的光线越多。

测定时所吸收的光线越多优点：优点：简便快速，适合于自动控制简便快速，适合于自动控制 缺点：缺点：测定结果受培养液成分影响；某些样品测定结果受培养液成分影响；某些样品 样品不适合用此法样品不适合用此法 11大肠杆菌生长曲线的制作光电比浊法光电比浊法是利用在一定的范围内，微生物细胞浓度与透 利用一系列菌悬液测定光密度和利用一系列菌悬液测定光密度和菌数，制作标准曲线，再根据被测样的光菌数，制作标准曲线，再根据被测样的光密度计算出含菌量密度计算出含菌量12大肠杆菌生长曲线的制作 利用一系列菌悬液测定光密度和菌数，制作标准光合细菌菌株光合细菌菌株NSNS的生的生长曲线长曲线13大肠杆菌生长曲线的制作光合细菌菌株NS的生长曲线13大肠杆菌生长曲线的制作三、实验器材三、实验器材Ø菌种菌种 培养不同时段的大肠杆菌培养不同时段的大肠杆菌Ø仪器或其他用具仪器或其他用具 分光光度计，比色皿等分光光度计，比色皿等14大肠杆菌生长曲线的制作三、实验器材菌种 14大肠杆菌生长曲线的制作四、实验步骤四、实验步骤Ø开开电电源源，，仪仪器器预预热热20 20 minmin，，将将波波长长调调至至600 600 nmnm处。

处Ø打打开开样样品品室室，，将将挡挡光光体体插插入入比比色色皿皿架架，，将将其推或拉入光路其推或拉入光路Ø盖好样品室盖，按盖好样品室盖，按0%0%键调零透射比键调零透射比Ø取出挡光体，按取出挡光体，按100%100%键调键调100%100%透射比1.1.样品测试前的调试样品测试前的调试15大肠杆菌生长曲线的制作四、实验步骤开电源，仪器预热20 min，将波长调至600 2.2.样品测定样品测定Ø将将参参比比溶溶液液（（未未接接种种的的LBLB液液体体培培养养基基））以以及及被测溶液倒入比色皿中被测溶液倒入比色皿中Ø打打开开样样品品室室盖盖，，将将参参比比溶溶液液放放在在样样品品架架的的第第一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位Ø将参比溶液推入光路，按将参比溶液推入光路，按100%100%键调满度键调满度Ø将将测测试试方方式式调调至至吸吸光光度度方方式式此此时时, ,显显示示器器显显示示““0.000”0.000”Ø将将被被测测溶溶液液推推入入光光路路，，显显示示器器显显示示为为被被测测样样品的吸光值品的吸光值16大肠杆菌生长曲线的制作2.样品测定将参比溶液（未接种的LB液体培养基）以及被测溶液 在在600 600 nmnm波波长长下下，，用用未未接接种种的的LBLB液液体体培培养养基基作作空空白白对对照照，，分分别别对对培培养养了了0 0、、4 4、、8 8、、1212、、1616和和20 20 h h的的大大肠肠杆杆菌菌培培养养液液，，进进行行光光电电比比浊浊测测定定。

对对于于高高浓浓度度的的大大肠肠杆杆菌菌培培养养液液, ,要要用用未未接接种种的的LBLB培培养养基基进进行行稀稀释释，，使使其其吸吸光光值值在在0.1-0.650.1-0.65范围内 比比色色皿皿经经蒸蒸馏馏水水清清洗洗后后，，必必须须经经待待测测样样品品润润洗洗比比色色皿皿的的毛毛面面用用吸吸水水纸纸擦擦干干，，而而光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破 比色皿之间吸光度进行比较比色皿之间吸光度进行比较17大肠杆菌生长曲线的制作 在600 nm波长下，用未接种的LB液体培养基作五、作业五、作业1 1、结果、结果 P88 P88记录不同大肠杆菌培养液的记录不同大肠杆菌培养液的ODOD600600值，并绘制大值，并绘制大肠杆菌的生长曲线肠杆菌的生长曲线 2 2、思考题、思考题 第第1 1题题18大肠杆菌生长曲线的制作五、作业1、结果18大肠杆菌生长曲线的制作。