水质粪大肠菌群的测定滤膜法征求意见稿.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 环 境 保 护 标 准HJ □ □ □ -201□部 分 代 替 HJ/T347-2007水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 滤 膜 法Water quality-Determination of fecal coliform-Membrane filtration（ 征 求 意 见 稿 ）201□ -□ □ -□ □ 发 布 201□ -□ □ -□ □ 实 施发 布环 境 保 护 部附 件 4i目 次前 言 .............................................................................................................................................ii1 适 用 范 围 .........................................................................................................................................12 术 语 和 定 义 .....................................................................................................................................13 方 法 原 理 .........................................................................................................................................14 干 扰 和 消 除 .....................................................................................................................................15 试 剂 和 材 料 .....................................................................................................................................16 仪 器 和 设 备 .....................................................................................................................................27 样 品 .................................................................................................................................................28 分 析 步 骤 .........................................................................................................................................39 结 果 计 算 与 表 示 .............................................................................................................................410 精 密 度 和 准 确 度 ...........................................................................................................................411 质 量 保 证 和 质 量 控 制 ...................................................................................................................512 废 物 处 理 .......................................................................................................................................5ii前 言为 贯 彻 《 中 华 人 民 共 和 国 环 境 保 护 法 》 和 《 中 华 人 民 共 和 国 水 污 染 防 治 法 》 ， 保 护 环 境 ，保 障 人 体 健 康 ， 规 范 水 中 细 菌 总 数 的 测 定 方 法 ， 制 定 本 标 准 。

本 标 准 规 定 了 测 定 地 表 水 、 地 下 水 和 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 滤 膜 法 本 标 准 是 对 《 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） 》 （ HJ/T347-2007）滤 膜 法 部 分 的 修 订 ， 与 原 标 准 相 比 主 要 修 改 内 容 如 下 ：在 干 扰 与 消 除 、 水 样 、 分 析 步 骤 、 结 果 计 算 与 表 示 、 精 密 度 和 准 确 度 、 质 量 控 制 和 质 量保 证 等 方 面 做 了 具 体 的 要 求 本 标 准 首 次 发 布 于 2007 年 ， 原 标 准 起 草 单 位 为 中 国 环 境 监 测 总 站 等 单 位 本 次 为 第 一 次修 订 自 本 标 准 实 施 之 日 起 ， 《 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） 》 （ HJ/T347-2007） 废 止 本 标 准 由 环 境 保 护 部 环 境 监 测 司 、 科 技 标 准 司 组 织 制 订 本 标 准 主 要 起 草 单 位 ： 辽 宁 省 环 境 监 测 实 验 中 心 。

本 标 准 验 证 单 位 ： 大 连 市 环 境 监 测 中 心 、 丹 东 市 环 境 监 测 中 心 站 、 锦 州 市 环 境 监 测 中 心站 、 辽 阳 市 环 境 监 测 站 、 铁 岭 市 环 境 保 护 监 测 站 、 沈 阳 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 本 标 准 环 境 保 护 部 201□ 年 □ □ 月 □ □ 日 批 准 本 标 准 自 201□ 年 □ □ 月 □ □ 日 起 实 施 本 标 准 由 环 境 保 护 部 解 释 1水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 滤 膜 法1 适 用 范 围本 标 准 规 定 了 测 定 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 滤 膜 法 本 标 准 适 用 于 地 表 水 、 地 下 水 和 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 快 速 测 定 本 标 准 不 适 用 于 浑 浊 度较 高 的 水 体 2 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 2.1 粪 大 肠 菌 群 fecal coliforms又 称 耐 热 大 肠 菌 群 44.5℃ 培 养 24h， 能 发 酵 乳 糖 产 酸 产 气 的 需 氧 及 兼 性 厌 氧 革 兰 氏 阴性 无 芽 孢 杆 菌 。

2.2 菌 落 形 成 单 位 Colony-Forming Units, CFU单 位 体 积 中 的 细 菌 群 落 总 数 3 方 法 原 理水 样 通 过 孔 径 为 0.45μm 的 滤 膜 过 滤 ， 细 菌 被 截 留 在 滤 膜 上 ， 然 后 将 滤 膜 置 于 含 有 乳 糖的 培 养 基 上 ， 在 特 定 的 温 度 （ 44.5℃ ） 培 养 24h， 在 此 培 养 温 度 ， 不 利 于 来 自 自 然 环 境 的 大肠 菌 群 生 长 ， 而 粪 大 肠 菌 群 能 生 长 并 发 酵 乳 糖 产 酸 产 气 ， 在 滤 膜 上 呈 蓝 色 或 蓝 绿 色 ， 其 它 非粪 大 肠 菌 落 呈 灰 色 、 淡 黄 色 或 无 色 通 过 颜 色 判 断 是 否 产 酸 产 气 ， 从 而 确 定 是 否 有 粪 大 肠 菌群 存 在 ， 并 通 过 呈 蓝 色 或 蓝 绿 色 菌 落 计 数 ， 来 测 定 水 样 中 粪 大 肠 菌 群 浓 度 4 干 扰 和 消 除氯 具 有 氧 化 性 ， 较 高 浓 度 的 重 金 属 离 子 具 有 毒 性 ， 它 们 都 能 破 坏 微 生 物 细 胞 内 酶 的 活 性 ，最 终 导 致 细 胞 死 亡 。

可 分 别 加 入 硫 代 硫 酸 钠 和 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 排 除 氯 或 重 金 属 的 干 扰 5 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明 ， 分 析 时 均 使 用 符 合 国 家 标 准 的 分 析 纯 化 学 试 剂 5.1 MFC 培 养 基成 分 ：胰 胨 10g蛋 白 胨 5g2酵 母 浸 膏 3g氯 化 钠 5g乳 糖 12.5g胆 盐 三 号 1.5g1%苯 胺 蓝 水 溶 液 10ml1%玫 瑰 色 酸 溶 液 （ 溶 于 8.0g/L 氢 氧 化 钠 液 中 ） 10ml制 法 ： 将 上 述 培 养 基 中 的 成 分 （ 除 苯 胺 蓝 和 玫 瑰 色 酸 外 ） ， 溶 解 于 1000ml 蒸 馏 水 或 去 离子 水 中 ， 调 节 pH 值 到 7.4， 分 装 于 小 烧 瓶 内 ， 每 瓶 100ml， 于 115℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min，储 存 于 冷 暗 处 备 用 临 用 前 ， 按 上 述 配 方 比 例 ， 用 灭 菌 吸 管 分 别 加 入 已 煮 沸 灭 菌 的 1%苯 胺蓝 溶 液 1ml 及 1%玫 瑰 色 酸 溶 液 （ 溶 于 8.0g/L 氢 氧 化 钠 液 中 ） 1ml， 混 合 均 匀 。

加 热 溶 解 前 ，加 入 1.2%～ 1.5%琼 脂 可 制 成 固 体 培 养 基 如 培 养 物 中 杂 菌 不 多 ， 则 培 养 基 中 不 加 玫 瑰 色 酸亦 可 MFC 培 养 基 可 选 用 市 售 成 品 培 养 基 5.2 无 菌 滤 膜 ： 孔 径 0.45μm， 按 无 菌 操 作 要 求 包 扎 ， 经 121℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min， 晾干 备 用 ； 或 将 滤 膜 放 入 烧 杯 中 ， 加 入 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 ， 煮 沸 灭 菌 3 次 ， 15min/次 ， 前 2 次煮 沸 后 需 更 换 水 洗 涤 2～ 3 次 5.3 无 菌 水 ： 新 制 备 的 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 经 121℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min， 备 用 5.4 硫 代 硫 酸 钠 （ Na2S2O3•5H2O） 5.5 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 （ C10H14N2O8Na2•2H2O） 5.6 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 ： ρ（ Na2S2O3•5H2O） =0.10g/ml称 取 硫 代 硫 酸 钠 10g， 溶 于 。