山药多糖对葡萄糖苷酶抑制实验设计.docx

山药多糖提取物对葡 萄糖普酶的抑制实验一.所需试剂(1) PBSg冲液称取 8g NaCk 0.2g KCl 1.44g NaHPQ和 0.24g KHPd,溶于 800ml蒸储水中，用HCl调节溶液的pH值至6.8,最后加蒸储水定容至1L称取 NaCl 8g, KCl 0.2g NaHPQ?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于 900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至6.8,加水定容至1L,常温保存备用实际配制500ML即可2) 3 mmol/L谷胱甘肽溶液谷胱甘肽分子量：307.32,称取46.1mg谷胱甘肽定容至50ml蒸储水中，即 为3 mmol/L谷胱甘肽溶液3) 0.01 mol/L PNPG溶液4-硝基苯-eD毗喃葡萄糖甘分子量：301.25，称取150.6mg定容至50ml蒸储水中，即为0.01 mol/L PNPG溶液4) 0.2 mol/L Na2CO 溶液Na2CO3分子量：105.99,称取 2.12g 定容至 100ml，即为 0.2 mol/L N&CO3 溶液一.实验流程11酶活性的测定1 .检测样配置取67 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.8) 1.4 mL、3 mmol/L谷胱甘肽溶液40必L0.01 mg/mL -薪萄糖甘酶溶液60必L37 C保温10 min后，加0.01 mol/L PNPG溶液100 ⑪摇匀,37 C保温继续反应10 min,加入0.2 mol/L NazCQ溶液800 L终止反应，于400 nm波长处测定吸光值.2 .参比配置取67 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.8) 1.4 mL、3 mmol/L谷胱甘肽溶液40必L37 C保温10 min后，加0.01 mol/L PNPG溶液100 ⑪摇匀,37 C保温继续反应10 min,加入0.2 mol/L NmCQ溶液800卜L终止反应, 于400 nm波长处测定吸光值.检测样吸光值为参比吸光值为2】多糖提取物抑制a-葡萄糖甘酶活性的测定1 .待测样配置A配置浓度为2 mg/mL的多糖酸性水提取物分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 娘于10mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -薪萄糖甘酶溶液60必L37 C 保温 10 min加0.01 mol/L PNPG溶液100 ⑪摇匀37 C保温继续反应10 min加入0.2 mol/L NazCQ溶液0.8 mL终止反应于波长400 nm处测定吸光值B配置浓度为2 mg/mL的多糖酸性氯化钠提取物分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 娘于10mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -薪萄糖甘酶溶液60必L37 C 保温 10 min加0.01 mol/L PNPG溶液100 ⑪摇匀37 C保温继续反应10 min加入0.2 mol/L NmCQ溶液0.8 mL终止反应于波长400 nm处测定吸光值C配置浓度为2 mg/mL的多糖中性水提取物分别取溶液20、40、60、80、100、150、200 娘于10mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -薪萄糖甘酶溶液60必L37 C 保温 10 min力口 0.01 mol/L PNPG 溶液 100 u,L 摇匀37 C保温继续反应10 min加入0.2 mol/L Na2CO3溶液0.8 mL终止反应于波长400 nm处测定吸光值2 .空白样配置取水100叱L各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -薪萄糖甘酶溶液60必L37 C 保温 10 min加0.01 mol/L PNPG溶液100 ⑪摇匀37 C保温继续反应10 min加入0.2 mol/L NmCQ溶液0.8 mL终止反应于波长400 nm处测定吸光此空白样吸光度3.参比配置、分别取水20、40、60、80、100、150、200 艰于10mL塑料试管中各加入67 mmol/L pH 6.8的磷酸缓冲液至1.4mL加3 mmol/L谷胱甘肽溶液40 L0.01 mg/mL -薪萄糖甘酶溶液60必L37 C 保温 10 min加0.01 mol/L PNPG溶液100 ⑪摇匀37 C保温继续反应10 min加入0.2 mol/L NmCQ溶液0.8 mL终止反应于波长400 nm处测定吸光值对e葡萄糖甘酶活抑制率计算公式如下：抑制率% = | 1 - 1桂号一」］x 100%注：A样品为加有样品反应后的吸光度；A本底为只加有样品的吸光度；A空白为不加 入样品反应后的吸光度。

本底吸光度（磷酸缓冲液吸光度）酸性水提编号吸光值抑制率IC50 值20406080100150200酸性氯化钠提编号吸光值抑制率IC50 值20406080100150200中性水提编号吸光值抑制率IC50 值20406080100150200 。