临床微生物检验实验课：实验二.ppt

临床微生物学检验临床微生物学检验实验第二周实验第二周实验内容实验内容第一天：生物化学鉴定第一天：生物化学鉴定 葡萄糖、乳糖、葡萄糖、乳糖、VPVP、、MRMR、硫化氢、、硫化氢、 IndolIndol、枸椽、枸椽酸盐、双糖铁酸盐、双糖铁 第二天：生物化学鉴定第二天：生物化学鉴定 苯丙氨酸脱氨酶、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨苯丙氨酸脱氨酶、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、酸脱羧酶、DNADNA酶、硝酸盐还原、氧化发酵酶、硝酸盐还原、氧化发酵（（O/FO/F）） 第三天：生物化学鉴定第三天：生物化学鉴定 氧化酶、触酶试验，第二天试验的结果观察氧化酶、触酶试验，第二天试验的结果观察 目的要求目的要求1. 1. 掌握鉴别细菌常用生化反应的掌握鉴别细菌常用生化反应的原理、原理、结果判定及接种方法结果判定及接种方法2. 2. 掌握鉴别细菌常用的复合生化培养基掌握鉴别细菌常用的复合生化培养基(KIA)(KIA)的原理、结果判定和应用的原理、结果判定和应用第一天实验内容第一天实验内容试剂（微量生化管）：试剂（微量生化管）： 葡萄糖、乳糖、葡萄糖、乳糖、VPVP、、MRMR、硫化氢、、硫化氢、IndolIndol、、 枸椽酸盐、枸椽酸盐、KIA KIA 以上各种生化微量管以上各种生化微量管2 2支支/ /人人（（KIA 1KIA 1支支/ /人）人）菌种：大肠埃希菌、肠沙门菌、阴沟肠杆菌、菌种：大肠埃希菌、肠沙门菌、阴沟肠杆菌、 福氏福氏1a1a志贺菌等志贺菌等其他：砂轮、接种针、酒精灯其他：砂轮、接种针、酒精灯常用指示剂变色范围常用指示剂变色范围指示剂指示剂 颜色改变颜色改变 感应感应pH范围范围 酸酸→碱碱溴甲酚紫溴甲酚紫 黄黄→紫紫 5.2～～6.8 溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝 黄黄→蓝蓝 6.0～～7.6甲基红甲基红 红红→黄黄 4.4～～6.0 酚红酚红 黄黄→红红 6.8～～8.4中性红中性红 红红 黄黄 6.8~8.0碳水化合物代谢试验碳水化合物代谢试验1、糖、糖(醇、苷醇、苷)类发酵试验类发酵试验原理：不同细菌含发酵糖原理：不同细菌含发酵糖(苷、醇苷、醇)类的酶不类的酶不 同，分解糖（苷、醇）能力不同，代同，分解糖（苷、醇）能力不同，代 谢产谢产 物不同，指示剂呈酸性或碱性反物不同，指示剂呈酸性或碱性反 应。

应 指示剂为指示剂为溴甲酚紫溴甲酚紫 结果：结果： 　　　　　　　　　　　　　　 产酸产酸：分解糖：分解糖( (苷、醇苷、醇) )产酸，产酸， 培养基变黄色培养基变黄色＋＋ 产酸产气产酸产气：培养基变黄且出：培养基变黄且出 现气泡现气泡＋＋ 无变化无变化：：－－n n甲基红试验原理：甲基红试验原理：甲基红试验原理：甲基红试验原理：某些细菌在代谢过程中分解葡萄糖产生某些细菌在代谢过程中分解葡萄糖产生丙酮酸丙酮酸，丙酮酸可进一步被分解为乳酸、乙酸、甲酸等，，丙酮酸可进一步被分解为乳酸、乙酸、甲酸等，而使培养基的而使培养基的pHpH值下降至值下降至4.54.5以下，故加入甲基红指示剂出以下，故加入甲基红指示剂出现现红色（阳性）红色（阳性）有些细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生有些细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质如醇、酮、醛、气体和水，则的酸进一步转化为其它物质如醇、酮、醛、气体和水，则培养基的酸碱度仍在培养基的酸碱度仍在pH6.2pH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄以上，故加入甲基红指示剂呈黄色（阴性）色（阴性） 2 2、甲基红试验及、甲基红试验及VPVP试验试验n nVPVPVPVP试验原理：试验原理：试验原理：试验原理：细菌在葡萄糖代谢过程中生成细菌在葡萄糖代谢过程中生成丙酮酸丙酮酸，丙酮，丙酮酸进一步脱羧后可产生乙酰甲基甲醇。

乙酰甲基甲醇在碱酸进一步脱羧后可产生乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化为二乙酰（丁二酮），进而与性溶液中被空气中的氧氧化为二乙酰（丁二酮），进而与培养基内的蛋白胨的精氨酸所含的胍基发生反应，生成培养基内的蛋白胨的精氨酸所含的胍基发生反应，生成红红色化合物色化合物，即，即VPVP反应阳性反应阳性 VP试验试验 MR试验试验 葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖 丙酮酸丙酮酸丙酮酸丙酮酸 乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇 混合酸混合酸混合酸混合酸( (甲、乙、乳酸、甲、乙、乳酸、甲、乙、乳酸、甲、乙、乳酸、 琥珀酸琥珀酸琥珀酸琥珀酸) ) KOH+ KOH+氧气氧气氧气氧气 甲基红指示剂甲基红指示剂甲基红指示剂甲基红指示剂 丁二烯醇丁二烯醇丁二烯醇丁二烯醇 二乙酰二乙酰二乙酰二乙酰 PH<4.4PH<4.4红色红色红色红色 α α奈酚奈酚奈酚奈酚+ +肌酸肌酸肌酸肌酸 (MR+) (MR+) 红色红色红色红色化合物化合物化合物化合物 (VP+)(VP+) 培养基培养基:葡萄糖蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水nVPVP试剂：试剂：甲液：甲液：6%α-6%α-萘酚酒精溶液。

萘酚酒精溶液 乙液：乙液：40%KOH40%KOH溶液、溶液、0.3%0.3%肌酐 n结果判定：阳性结果判定：阳性: :红色红色 阴性阴性: :黄色黄色/ /棕色棕色（再置（再置35℃0.535℃0.5～～1 1小时后观察）小时后观察）n nMRMRMRMR结果与结果与结果与结果与VPVPVPVP结果相反结果相反结果相反结果相反• 甲基红试剂甲基红试剂： 结果判定：加入甲基红试剂结果判定：加入甲基红试剂1 1滴滴, , 阳性阳性: :红色红色 阴性阴性: :黄色黄色- +3 3、硫化氢试验、硫化氢试验§原理：细菌分解含硫氨基原理：细菌分解含硫氨基酸酸 (胱胱aa、半胱、半胱aa)生成生成H2S，遇醋酸铅或，遇醋酸铅或Fe2+形成形成黑色黑色PbS或或FeS沉淀沉淀§培养基：硫化氢培养基培养基：硫化氢培养基§结果判定：结果判定：培养基变黑培养基变黑 + - 4 4、吲哚试验、吲哚试验 n原理：细菌分解培养基中的原理：细菌分解培养基中的色氨酸色氨酸，生成吲哚，吲哚可，生成吲哚，吲哚可与试剂中的对二甲氨基苯甲与试剂中的对二甲氨基苯甲醛作用，生成醛作用，生成玫瑰吲哚玫瑰吲哚而呈而呈红色红色 n结果：反应结束加试剂数滴，结果：反应结束加试剂数滴，两两液面接触处液面接触处出现出现红色红色为阳为阳性，无色为阴性性，无色为阴性 - +n原理：原理：以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，若细以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，若细菌能利用这些盐作为碳源和氮源而生长，则利用枸橼酸钠菌能利用这些盐作为碳源和氮源而生长，则利用枸橼酸钠产生碳酸盐，与利用铵盐产生的产生碳酸盐，与利用铵盐产生的NHNH3 3反应，形成反应，形成 （（NHNH4 4））2 2COCO3 3，使，使培养基变碱培养基变碱，，pHpH升高，升高，指示剂溴麝香草酚蓝指示剂溴麝香草酚蓝由草绿色变为深蓝色由草绿色变为深蓝色 n结果结果: : 阳性阳性: :蓝色蓝色; ; 阴性阴性: :绿色绿色 n培养基：枸橼酸盐培养基培养基：枸橼酸盐培养基5、枸橼酸盐利用试验、枸橼酸盐利用试验 - + 6.克氏双糖铁培养基克氏双糖铁培养基(Kligler Iron Agar,KIA)②②分解葡萄糖分解葡萄糖+乳糖乳糖 产酸产酸(乳糖多，产酸多）乳糖多，产酸多） 上下层均变黄上下层均变黄 组成：无糖培养基组成：无糖培养基+1份葡萄糖份葡萄糖+10份乳糖份乳糖 + 铁盐铁盐 + 酚红酚红 营养营养 底物底物 底物底物 底物底物 指示剂指示剂原理：原理： ①①只分解葡萄糖只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少）产酸（葡萄糖少，产酸量少）上层上层酸氧化、中和酸氧化、中和或挥发，或挥发，红色红色。

下下层缺氧，不氧化，层缺氧，不氧化，黄色黄色③③产生硫化氢产生硫化氢 + 铁盐铁盐 FeS 黑色沉淀黑色沉淀 应用：应用：检测检测肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和对乳糖、葡萄糖的分解和产产H2S能力未接种菌未接种菌的的KIA乳（－）乳（－）葡（＋）葡（＋）H2S(-)乳（乳（-））葡葡（（+））H2S(+)乳（乳（+））葡（产酸产气）葡（产酸产气）H2S(-)各种生化培养基接种的细菌各种生化培养基接种的细菌§葡萄糖：葡萄糖： 大肠埃希菌大肠埃希菌 、、 沙门菌或志贺菌沙门菌或志贺菌§乳糖：乳糖： 大肠埃希菌大肠埃希菌 、、 沙门菌或志贺菌沙门菌或志贺菌§硫化氢：硫化氢： 大肠埃希菌或志贺菌大肠埃希菌或志贺菌 、、 沙门菌沙门菌§VPVP试验：试验： 大肠埃希菌、阴沟肠杆菌大肠埃希菌、阴沟肠杆菌§甲基红甲基红MRMR试验：试验： 大肠埃希菌、阴沟肠杆菌大肠埃希菌、阴沟肠杆菌§吲哚试验：吲哚试验： 大肠埃希菌、沙门菌或志贺菌大肠埃希菌、沙门菌或志贺菌§枸椽酸盐：枸椽酸盐： 大肠埃希菌或志贺菌或沙门菌、大肠埃希菌或志贺菌或沙门菌、 阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌§KIAKIA：： 大肠埃希菌大肠埃希菌 、沙门菌或志贺菌（、沙门菌或志贺菌（1 1支支/ /人人））每种生化试验每人均做，每种生化试验每人均做，每个生化反应每个生化反应两个微量管分别接种两种不同的细菌！两个微量管分别接种两种不同的细菌！！！§复习今天接种细菌的各种生化反应原理与结果§预习第二天的各种生化反应原理及结果观察第二天实验内容第二天实验内容§试剂：苯丙、尿素、（赖氨酸、鸟氨酸、氨对）、试剂：苯丙、尿素、（赖氨酸、鸟氨酸、氨对）、DNADNA酶、硝还、酶、硝还、O/F O/F 以上各种生化微量管以上各种生化微量管 2 2支支/ /人人 O/FO/F管管 4 4支支/ /人人 氨基酸对照氨基酸对照1 1支支/ /人人§菌种：大肠、变形、沙门、志贺、金葡、铜绿菌种：大肠、变形、沙门、志贺、金葡、铜绿§其他：其他：砂轮、接种针、砂轮、接种针、酒精灯酒精灯§观察昨天的生化反应结果并记录观察昨天的生化反应结果并记录- +MR和和VP加试剂后加试剂后观察观察- + +无色无色无色无色 红色红色红色红色VP试验甲基红试验+ -+ -紫红色紫红色紫红色紫红色 橘黄色橘黄色橘黄色橘黄色加试剂后观察加试剂后观察乳（乳（+））葡（产酸产气）葡（产酸产气）H2S(-)大肠埃希菌在大肠埃希菌在KIAKIA中结果中结果乳（乳（-））葡葡（（+））H2S(+)伤寒沙门菌在伤寒沙门菌在KIA中结果中结果乳（－）乳（－）葡（＋）葡（＋）H2S(-)志贺菌在志贺菌在KIA中生长结果中生长结果KA-+KA-+KA-+KA-+KA--KA--AA+-AA+-n原理：原理：1、苯丙氨酸脱氨酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验A B + -+ -n原理：若细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，原理：若细菌具有苯丙氨酸脱氨酶， 能将培养基中的苯丙氨酸脱氨变成能将培养基中的苯丙氨酸脱氨变成苯丙酮酸，苯丙酮酸能使三氯化铁苯丙酮酸，苯丙酮酸能使三氯化铁指示剂变为绿色指示剂变为绿色 n加入苯丙氨酸脱氨酶试剂加入苯丙氨酸脱氨酶试剂:10%FeCl3 n阳性阳性:培养基与试剂接触处出现培养基与试剂接触处出现绿色绿色 n阴性阴性:不变色不变色n培养基：苯丙氨酸培养基培养基：苯丙氨酸培养基1、苯丙氨酸脱氨酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验A B + -+ -2、尿素酶试验、尿素酶试验§原理：原理： §培养基：尿素培养基培养基：尿素培养基 －－ ＋＋ A BA B2、尿素酶试验、尿素酶试验§原理：细菌具有的尿素酶分原理：细菌具有的尿素酶分解尿素产生氨解尿素产生氨(氨在溶液中形氨在溶液中形成碳酸铵成碳酸铵)，培养基，培养基pH↑ §培养基：尿素培养基培养基：尿素培养基§指示剂：指示剂：酚红酚红 §结果：结果： 培养基呈碱性培养基呈碱性 指示剂显指示剂显红色红色+－－ ＋＋ A BA Bn n原理原理原理原理：不同细菌对葡萄糖分解能力及代谢产物不同，：不同细菌对葡萄糖分解能力及代谢产物不同，这种能力因是否有氧气的存在而异，仅在有氧条件这种能力因是否有氧气的存在而异，仅在有氧条件下能分解称为氧化型，在有氧无氧条件下均能分解下能分解称为氧化型，在有氧无氧条件下均能分解称为发酵型，两种条件下均不分解称产碱型。

称为发酵型，两种条件下均不分解称产碱型 n n结果判定结果判定结果判定结果判定:仅在没有覆盖石蜡油的一管分解糖产酸或仅在没有覆盖石蜡油的一管分解糖产酸或产酸产气者属产酸产气者属氧化型氧化型；两管均分解糖产酸或产酸产；两管均分解糖产酸或产酸产气者为气者为发酵型发酵型；两管都不生长者为；两管都不生长者为产碱型•指示剂：指示剂：溴麝香草酚蓝或溴甲酚紫溴麝香草酚蓝或溴甲酚紫n n培养基：培养基：Hugh-Leifson培养基培养基3 3、氧化－发酵试验（、氧化－发酵试验（OFOF））氧化－发酵试验（氧化－发酵试验（OFOF））发酵型发酵型 A B C氧化型氧化型 产碱型产碱型4、氨基酸脱羧酶试验、氨基酸脱羧酶试验脱羧酶分解氨基酸使脱羧生成脱羧酶分解氨基酸使脱羧生成脱羧酶分解氨基酸使脱羧生成脱羧酶分解氨基酸使脱羧生成胺胺胺胺、、、、COCO2 2，，，，培养基变碱性培养基变碱性培养基变碱性培养基变碱性 -coo-coo赖氨酸赖氨酸赖氨酸赖氨酸 尸胺尸胺尸胺尸胺 -coo-coo鸟氨酸鸟氨酸鸟氨酸鸟氨酸 腐胺腐胺腐胺腐胺培养基：赖、鸟氨基酸脱羧酶及氨基酸对照培养基培养基：赖、鸟氨基酸脱羧酶及氨基酸对照培养基培养基：赖、鸟氨基酸脱羧酶及氨基酸对照培养基培养基：赖、鸟氨基酸脱羧酶及氨基酸对照培养基结果：结果：结果：结果： 对照管黄色对照管黄色对照管黄色对照管黄色 测定管紫色测定管紫色测定管紫色测定管紫色+ + + + 接种细菌接种细菌后，在培后，在培养基中加养基中加入石蜡油！入石蜡油！n原理：原理：5、硝酸盐还原试验、硝酸盐还原试验n原理：原理：细菌如果能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，细菌如果能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐亚硝酸盐与试与试剂中的剂中的对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸生成对偶氮苯磺酸，对偶氮苯磺酸再与生成对偶氮苯磺酸，对偶氮苯磺酸再与试剂中的试剂中的α-萘胺萘胺反应，生成可见的反应，生成可见的红色红色N-α-萘胺偶氮苯磺酸。

萘胺偶氮苯磺酸n硝酸盐还原的过程可因细菌的不同而异，硝酸盐还原的过程可因细菌的不同而异， ①①有的细菌可使其有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；还原为亚硝酸盐和离子态的铵；②②有的细菌使硝酸盐还原为有的细菌使硝酸盐还原为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解成为氮，此时加入硝酸亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解成为氮，此时加入硝酸盐还原试剂盐还原试剂不显色不显色，但可以在培养基的小倒管中出现气泡，，但可以在培养基的小倒管中出现气泡，如假单胞菌等硝酸盐或亚硝酸盐如果被还原成气体的终未如假单胞菌等硝酸盐或亚硝酸盐如果被还原成气体的终未产物如氮或氧化氮，就称为脱产物如氮或氧化氮，就称为脱硝化或脱氮化作用硝化或脱氮化作用 5、硝酸盐还原试验、硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 A B A B-/-/+ + + +加锌粉加锌粉+ + - -加试剂后加试剂后n甲液：甲基甲液：甲基α-萘胺萘胺 n乙液：对氨基苯磺酸乙液：对氨基苯磺酸 n培养后加试剂：甲液、乙液各一滴培养后加试剂：甲液、乙液各一滴n阳性阳性:红色红色 n阴性阴性:无色无色 在无色的培养基中再加入在无色的培养基中再加入锌粉锌粉，，变成红色为变成红色为阴性阴性，，不变色为阳性不变色为阳性。

 6 6、、DNADNA酶试验酶试验 DNA酶 原理：原理： 长链长链DNA DNA 寡核苷酸链寡核苷酸链 （可被酸沉淀）（可被酸沉淀） （可溶于酸）（可溶于酸） 方法：点种方法：点种- +DNA平板平板2块块/5人（组）人（组）实验内容：各种培养基接种细菌实验内容：各种培养基接种细菌§苯丙：苯丙： 大肠埃希菌、变形杆菌大肠埃希菌、变形杆菌§尿素：尿素： 大肠埃希菌、变形杆菌大肠埃希菌、变形杆菌§赖氨酸：伤寒沙门菌、奇异变形杆菌赖氨酸：伤寒沙门菌、奇异变形杆菌§鸟氨酸：伤寒沙门菌、奇异变形杆菌鸟氨酸：伤寒沙门菌、奇异变形杆菌§对照管：接种伤寒沙门菌或奇异变形杆菌对照管：接种伤寒沙门菌或奇异变形杆菌§DNADNA酶：酶： 金葡菌、大肠埃希菌或铜绿假单胞菌金葡菌、大肠埃希菌或铜绿假单胞菌§硝还：硝还： 大肠埃希菌或变形杆菌、铜绿假单胞菌大肠埃希菌或变形杆菌、铜绿假单胞菌§O/FO/F：： 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌大肠埃希菌、铜绿假单胞菌每种生化反应的两个生化管每个同学均做并分别接种两种不同的细菌！！第三天实验内容第三天实验内容§试剂：氧化酶、触酶、试剂：氧化酶、触酶、1%盐酸盐酸§菌种：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、菌种：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、 金黄色葡萄球菌、肠球菌金黄色葡萄球菌、肠球菌§其他：砂轮、接种针、其他：砂轮、接种针、酒精灯酒精灯§观察昨天的生化反应结果观察昨天的生化反应结果OF试验试验 发酵型发酵型 氧化型氧化型苯丙氨酸脱胺酶试验苯丙氨酸脱胺酶试验 ＋＋ －－加入试剂后观察尿素酶试验尿素酶试验 －－ ＋＋为什么有些尿素培养基刚接种菌时接种处会变成红色？硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 －－ ＋＋在无色的培养基在无色的培养基中再加入锌粉中再加入锌粉红色红色 （－）（－）不产氮气不产氮气无色（＋）无色（＋）产氮气产氮气氨基酸脱羧酶氨基酸脱羧酶 ＋＋ －－ ＋＋ －－ 颜色与对照管一致的为阴性，颜色与对照管一致的为阴性，颜色不同的则为阳性颜色不同的则为阳性§为什么氨基酸脱羧酶试验管要加石蜡油？§为什么氨基酸脱羧酶试验设对照管？为什么氨基酸脱羧酶试验管要加石蜡油？①氨基酸脱羧酶在厌氧环境下活性更好。

②防止氨基酸脱羧后产生的胺挥发§对照管主要成分：蛋白胨、葡萄糖和溴甲酚紫指示剂（不含氨基酸）为什么氨基酸脱羧酶试验设对照管？§试验管主要成分：蛋白胨、葡萄糖、氨基酸和溴甲酚紫指示剂§肠杆菌科细菌均分解葡萄糖产酸，此酸可中和细菌可能分解培养基中蛋白胨所产生的碱性物质保证试验阳性管显示的碱性反应是细菌对氨基酸脱羧后产生的胺所致而不是细菌分解蛋白胨所致 －－ ＋＋DNADNA酶试验结果酶试验结果加加1%盐酸盐酸适量使其适量使其覆盖住覆盖住DNA平板平板上的菌落上的菌落1 1、氧化酶试验、氧化酶试验原理：原理： 盐酸二甲基对苯二胺（无色）盐酸二甲基对苯二胺（无色） 紫红色紫红色的醌类化合物的醌类化合物 OR OR 盐酸四甲基对苯二胺（无色）盐酸四甲基对苯二胺（无色） 蓝色蓝色的醌类化合物的醌类化合物 方法：直接法、间接法（方法：直接法、间接法（滤纸法滤纸法、试剂纸片法）、试剂纸片法） 结果：在结果：在1010秒内呈紫红色－－阳性秒内呈紫红色－－阳性 注意事项：注意事项：①①不宜用生锈的接种针或接种环不宜用生锈的接种针或接种环 ② ②不宜用热的镊子夹取纸片不宜用热的镊子夹取纸片 ③ ③避免接触氧化性或还原性物质避免接触氧化性或还原性物质 ④ ④试剂应新鲜配制，避光保存试剂应新鲜配制，避光保存 ⑤ ⑤设置阴阳性对照设置阴阳性对照氧化型细胞色素C 细胞色素C 氧化酶氧化氧化oxidase test ＋＋ －－2 2、过氧化氢酶（触酶）试验、过氧化氢酶（触酶）试验 catalase testcatalase test 触酶触酶原理：原理：H H2 2O O2 2 H H2 2O+ OO+ O2 2试剂：试剂：3%3%的的H H2 2O O2 2，，用于绝大多数触酶试验用于绝大多数触酶试验操作：玻片法操作：玻片法注意事项注意事项：：①①避免挑取血琼脂避免挑取血琼脂 ② ②避免接触氧化性或还原性物质避免接触氧化性或还原性物质 ③ ③试剂应新鲜配制，避光保存试剂应新鲜配制，避光保存触酶试验：玻片法触酶试验：玻片法 ＋＋ －－触酶试验：试管法触酶试验：试管法§思考题思考题 §1.为什么氨基酸脱羧酶试验要接种氨基酸对为什么氨基酸脱羧酶试验要接种氨基酸对照管？对照管阴性为何呈黄色？照管？对照管阴性为何呈黄色？§2.氨基酸脱羧酶试验管加石蜡油的原因是？氨基酸脱羧酶试验管加石蜡油的原因是？§3.本次生化反应试验有哪些影响因素？本次生化反应试验有哪些影响因素？§大肠埃希菌：大肠埃希菌：§伤寒沙门菌：伤寒沙门菌：§福氏志贺菌：福氏志贺菌：§阴沟肠杆菌：阴沟肠杆菌：§金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌：§铜绿假单胞菌：铜绿假单胞菌：§奇异变形杆菌：奇异变形杆菌：4. 归纳总结以下各菌在本次实验中各生归纳总结以下各菌在本次实验中各生化反应试验结果化反应试验结果。