红细胞免疫功能及其测定方法ppt课件.ppt

红细胞免疫功能及其测定方法红细胞免疫功能及其测定方法 汇报人：王汇报人：王 翀翀在肿瘤的发生发展过程中免疫功能起着重要的作用，过去的在肿瘤的发生发展过程中免疫功能起着重要的作用，过去的观点认为免疫功能主要和白细胞有关，而红细胞在其中所起观点认为免疫功能主要和白细胞有关，而红细胞在其中所起的作用一直未受重视的作用一直未受重视19811981年年siegelsiegel提出了红细胞免疫系统的提出了红细胞免疫系统的新概念，开辟了机体免疫功能研究的新纪元红细胞作为人新概念，开辟了机体免疫功能研究的新纪元红细胞作为人体血液有形成份的主要组成部分与肿瘤细胞的接触机会比其体血液有形成份的主要组成部分与肿瘤细胞的接触机会比其他细胞要大他细胞要大10001000倍红细胞可以通过促吞噬作用、清除循环倍红细胞可以通过促吞噬作用、清除循环免疫复合物免疫复合物( CIC )( CIC )、效应细胞样作用及对淋巴细胞和细胞因、效应细胞样作用及对淋巴细胞和细胞因子的调控作用来达到抑制肿瘤的生长和转移的作用在正常子的调控作用来达到抑制肿瘤的生长和转移的作用在正常情况下，红细胞免疫和白细胞免疫情况下，红细胞免疫和白细胞免疫( (如如T T细胞、细胞、B B细胞、细胞、NKNK细细胞、巨噬细胞胞、巨噬细胞) )在机体内相互联系、密切配合、协同作战，识在机体内相互联系、密切配合、协同作战，识别和清除肿瘤细胞，共同维持机体内环境的平衡和生物功能别和清除肿瘤细胞，共同维持机体内环境的平衡和生物功能的稳定。

的稳定1 红细胞与其它免疫反应细胞的比较红细胞与其它免疫反应细胞的比较 n n红细胞与其它血细胞均来源于骨髓造血干细胞红细胞与其它血细胞均来源于骨髓造血干细胞以往认为虽然它们来源相同，但功能各异，前者以往认为虽然它们来源相同，但功能各异，前者主要是运输气体，而后者则参与免疫和防御机制主要是运输气体，而后者则参与免疫和防御机制目前研究表明，红细胞不仅具有呼吸功能，且同目前研究表明，红细胞不仅具有呼吸功能，且同白细胞一样具有免疫功能白细胞一样具有免疫功能 2 红细胞的免疫功能红细胞的免疫功能 2.1 增强吞噬作用增强吞噬作用 纳尔逊纳尔逊(Nelson)(Nelson)用肺炎球菌和梅毒螺旋体等进行体外实用肺炎球菌和梅毒螺旋体等进行体外实验，发现被相应抗体致敏的肺炎球菌或梅毒螺旋体，只验，发现被相应抗体致敏的肺炎球菌或梅毒螺旋体，只有在含补体、红细胞及白细胞的混合物中，有在含补体、红细胞及白细胞的混合物中，80809595能迅速被吞噬而从液相中消失；若缺少红细胞，则在较能迅速被吞噬而从液相中消失；若缺少红细胞，则在较长时间内仅有少数被吞噬长时间内仅有少数被吞噬19561956年年NelsonNelson又将抗体调理又将抗体调理过的肺炎球菌注入猴体内，获得的结果与体外实验相同，过的肺炎球菌注入猴体内，获得的结果与体外实验相同，100100的肺炎球菌粘附于红细胞。

的肺炎球菌粘附于红细胞 n n粘附的复合物较悬浮于血浆中游离的复合物更易被吞噬粘附的复合物较悬浮于血浆中游离的复合物更易被吞噬某些病毒在体内也能粘附于红细胞，从而被吞噬消灭免某些病毒在体内也能粘附于红细胞，从而被吞噬消灭免疫粘附可以增强吞噬作用疫粘附可以增强吞噬作用4 45 5倍红细胞还能阻止癌细胞倍红细胞还能阻止癌细胞在循环中播散，因在外周血中癌细胞遇到红细胞比遇到白在循环中播散，因在外周血中癌细胞遇到红细胞比遇到白细胞的机会多细胞的机会多50050010001000倍当癌细胞表面结合有抗体与倍当癌细胞表面结合有抗体与补体时，则可通过红细胞表面的补体时，则可通过红细胞表面的C3bC3b受体，使癌细胞粘附受体，使癌细胞粘附于红细胞，故容易被吞噬细胞捕捉与吞噬，从而防止癌细于红细胞，故容易被吞噬细胞捕捉与吞噬，从而防止癌细胞的转移与扩散胞的转移与扩散n n红细胞还有吞噬细胞样的功能，因为在其细胞膜表面具有红细胞还有吞噬细胞样的功能，因为在其细胞膜表面具有过氧化物酶，该酶是典型的溶酶体酶，它可起着巨噬细胞过氧化物酶，该酶是典型的溶酶体酶，它可起着巨噬细胞样的杀伤作用样的杀伤作用 2.2 红细胞的免疫粘附作用红细胞的免疫粘附作用 n n免疫粘附免疫粘附免疫粘附免疫粘附是指抗原是指抗原- -抗体复合物与补体抗体复合物与补体C3bC3b结合后，可粘附结合后，可粘附于灵长目或非灵长目的红细胞与血小板上，这一现象统称于灵长目或非灵长目的红细胞与血小板上，这一现象统称为为“ “血细胞免疫粘附作用血细胞免疫粘附作用” ”。

红细胞的免疫粘附活性是通红细胞的免疫粘附活性是通过过I I型补体受体（型补体受体（complement receptor type Icomplement receptor type I，CR1 )CR1 )为基础为基础实现的血循环中免疫复合物实现的血循环中免疫复合物( IC )( IC )的清除主要由红细胞的清除主要由红细胞CR1CR1携带至肝脾网状内皮系统交给巨噬细胞消灭携带至肝脾网状内皮系统交给巨噬细胞消灭CR1CR1成成簇分布，人类每个红细胞大约表达簇分布，人类每个红细胞大约表达200200500500个个CR1CR1分子，分子，主要配体为主要配体为C3bC3b该受体为糖蛋白，分子量为该受体为糖蛋白，分子量为205 205 ，000000红细胞上的红细胞上的C3bC3b受体占血循环中受体占血循环中C3bC3b受体总数的受体总数的9595以上因此，血循环中的抗原因此，血循环中的抗原- -抗体复合物遇到红细胞比遇到白抗体复合物遇到红细胞比遇到白细胞的机会多细胞的机会多5005001 0001 000倍2.3 防御感染防御感染 n n红细胞与细菌、病毒等微生物免疫粘附后，不仅可以通过红细胞与细菌、病毒等微生物免疫粘附后，不仅可以通过过氧化物酶对它们产生直接的杀伤作用，而且还可以促进过氧化物酶对它们产生直接的杀伤作用，而且还可以促进吞噬细胞对它们的吞噬作用。

因此，红细胞的免疫功能可吞噬细胞对它们的吞噬作用因此，红细胞的免疫功能可以看作是机体抗感染免疫的因素之一以看作是机体抗感染免疫的因素之一n n小结：小结：小结：小结：目前已知红细胞具有以下免疫功能：目前已知红细胞具有以下免疫功能：(1)(1)识别携带识别携带抗原；抗原；(2)(2)清除循环中免疫复合物；清除循环中免疫复合物；(3)(3)增强增强T T细胞依赖反细胞依赖反应；应；(4)(4)效应细胞样作用；效应细胞样作用；(5)(5)促进吞噬作用而这些免疫促进吞噬作用而这些免疫功能的生理学基础即为红细胞免疫粘附作用功能的生理学基础即为红细胞免疫粘附作用3 红细胞免疫功能异常与疾病红细胞免疫功能异常与疾病n n近年研究证实在某些病理状态下，红细胞的免疫粘附活性近年研究证实在某些病理状态下，红细胞的免疫粘附活性可发生改变可发生改变SiegelSiegel等检查了等检查了2323名宫颈癌、胃癌和直肠癌名宫颈癌、胃癌和直肠癌患者的红细胞免疫粘附功能，发现这些患者的红细胞粘附患者的红细胞免疫粘附功能，发现这些患者的红细胞粘附抗原抗原- -抗体抗体- -补体复合物的能力较正常人显著降低这一资补体复合物的能力较正常人显著降低。

这一资料提示在肿瘤的发展过程中，除可抑制白细胞免疫功能外，料提示在肿瘤的发展过程中，除可抑制白细胞免疫功能外，还可抑制红细胞的免疫功能还可抑制红细胞的免疫功能n n系统性红斑性狼疮（系统性红斑性狼疮（SLESLE）、类风湿性关节炎等自身免疫）、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病，是因为患者体内针对自身组织发生免疫反应所致性疾病，是因为患者体内针对自身组织发生免疫反应所致一般认为，自身免疫病患者的细胞免疫和一般认为，自身免疫病患者的细胞免疫和/ /或体液免疫功或体液免疫功能处于相对增强状态通过对此类病人红细胞免疫系统的能处于相对增强状态通过对此类病人红细胞免疫系统的研究结果表明，其免疫功能亦明显增强，且与白细胞免疫研究结果表明，其免疫功能亦明显增强，且与白细胞免疫系统的功能改变相平行，这可能与自身免疫病患者血清中系统的功能改变相平行，这可能与自身免疫病患者血清中存在着红细胞存在着红细胞C3bC3b受体活性抑制因子有关受体活性抑制因子有关 n n目前认为原发性癫痫和银屑病的发病也与自身免疫有关目前认为原发性癫痫和银屑病的发病也与自身免疫有关郭峰等曾观察到这两种疾病患者的红细胞免疫功能的变化郭峰等曾观察到这两种疾病患者的红细胞免疫功能的变化与与 SLE SLE 等其它自身免疫病患者是一致的。

等其它自身免疫病患者是一致的 n n另外，再生障碍性贫血的患者，其红细胞的免疫粘附作用另外，再生障碍性贫血的患者，其红细胞的免疫粘附作用降低，可能是由于患者造血功能障碍，所产生的红细胞数降低，可能是由于患者造血功能障碍，所产生的红细胞数量少而且质量低劣，致使红细胞膜上的量少而且质量低劣，致使红细胞膜上的C3bC3b受体生成不足受体生成不足慢性布氏菌病患者，其红细胞免疫功能亦降低，致使清除慢性布氏菌病患者，其红细胞免疫功能亦降低，致使清除感染因子的能力减弱，这种现象可能是引起该病经久不愈感染因子的能力减弱，这种现象可能是引起该病经久不愈的原因之一的原因之一 4 红细胞免疫功能的检测及其临床意义红细胞免疫功能的检测及其临床意义 4.1 红细胞红细胞C3b受体的测定受体的测定n n原理：原理：原理：原理：红细胞膜上的红细胞膜上的C3bC3b受体受体(CR1)(CR1)可与补体致敏可与补体致敏的酵母菌粘附形成花环的酵母菌粘附形成花环( RBC-C3bR( RBC-C3bR花环花环 ) )；同时；同时红细胞膜上粘附的红细胞膜上粘附的ICIC中中C3bC3b分子或抗原补体复合物分子或抗原补体复合物中的中的C3bC3b分子可与未致敏的酵母菌的酵母多糖粘附分子可与未致敏的酵母菌的酵母多糖粘附形成花环（形成花环（ RBC-ICRBC-IC花环花环 ）。

n n意义：意义：意义：意义：RBC-C3bRRBC-C3bR花环率和花环率和RBC-ICRBC-IC花环率可作为红细胞天花环率可作为红细胞天然免疫粘附功能的指标然免疫粘附功能的指标1 1）若两项指标都低下，判为原发性红细胞免疫功能低下，）若两项指标都低下，判为原发性红细胞免疫功能低下，为红细胞膜为红细胞膜C3bC3b受体受到破坏或遗传基因缺陷及其他影响受体受到破坏或遗传基因缺陷及其他影响所致2 2）若）若RBC-C3bRRBC-C3bR花环率降低，而花环率降低，而RBC-ICRBC-IC花环率增高，则花环率增高，则为继发性红细胞免疫功能低下，是由于红细胞为继发性红细胞免疫功能低下，是由于红细胞CR1CR1上免疫上免疫复合物或补体调理的抗原量增加所致复合物或补体调理的抗原量增加所致3 3）若这两项指标都上升，判断为红细胞天然免疫功能亢）若这两项指标都上升，判断为红细胞天然免疫功能亢进与紊乱进与紊乱4.2 红细胞红细胞CR1数量的测定数量的测定 4.2.1 4.2.1 红细胞红细胞红细胞红细胞CR1CR1密度相关基因多态性测定方法密度相关基因多态性测定方法密度相关基因多态性测定方法密度相关基因多态性测定方法 DNADNA提取提取 PCRPCR扩增扩增 限制性片段长度多态性酶切分析（限制性片段长度多态性酶切分析（RFLPRFLP分析）分析） 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳4.2.2 4.2.2 红细胞红细胞红细胞红细胞CR1CR1流式细胞仪测定方法流式细胞仪测定方法流式细胞仪测定方法流式细胞仪测定方法 n n原理：单个红细胞原理：单个红细胞CR1CR1数量比白细胞数量比白细胞CR1CR1低，为低，为了提高试验的敏感度，采用间接免疫荧光染色了提高试验的敏感度，采用间接免疫荧光染色法流式细胞仪检测技术。

用鼠抗人红细胞法流式细胞仪检测技术用鼠抗人红细胞CR1CR1单单抗与一定量待。