HPLC常见问题和解决方法总汇.doc

压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法A、 没有压力显示，没有流动相流动原 因 解决方法1、电源问题 1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏 2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败 3、a、采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断 4、更换柱塞杆5、泵头内有空气 5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足 6、a、补充流动相b、更换入口滤头7、单向阀损坏 7、更换单向阀8、漏液 8、拧紧或更换手紧接头B、 流动相流动正常，但没有压力显示原 因 解决方法1、仪表损坏 1、更换仪表2、压力传感器损坏 2、更换压力传感器C、 压力持续偏高原 因 解决方法1、流速设定过高 1、调整流速设定..2、柱前筛板堵塞 2、a、在允许情况下反冲色谱柱b、更换筛板c、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀 3、a、使用恰当的流动相b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀6、柱温过低6、提高温度7、控制器失常7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱9、过滤器阻塞9、清洗或更换过滤器D、压力持续偏低原 因解决方法1、流速设定过低1、调整流速2、系统漏液2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高4、降低温度5、控制器失常5、维修或更换控制器E、 压力不断上升原 因 解决方法1、见列表 C 1、见列表 CF、 压力降为零..原 因 解决方法1、见列表 A、B 1、见列表 A、BG、 压力不断下降，但不回零原 因 解决方法1、见列表 D 1、见列表 DH、 压力波动原 因 解决方法1、泵中有气体 1、a、溶剂脱气b、从泵中除去气体2、单向阀损坏 2、更换单向阀3、泵密封损坏 3、更换泵密封4、脱气不充分 4、a、溶剂脱气改变脱气方法（使用脱气法等）5、系统漏液 5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱 、由于流动相粘度的变化引起的压力波动漏 液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损 如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下， 检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉A、 接头处漏液..原 因 解决方法1、接头松动 1、拧紧2、接头磨损 2、更换3、接头过紧 3、a、拧松，再重新拧紧b、更换4、接头被污染 4、a、拆下清洗b、更换5、部件不匹配 5、使用同一品牌的配件B、 泵漏液原 因 解决方法1、单向阀松动 1、 a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）b、更换单向阀2、接头松动 2、拧紧接头（不必拧的过紧）3、混合器密封损坏 3、 a、更换混合器密封b、更换混合器4、泵密封损坏 4、维修或更换泵密封件5、压力传感器损坏 5、维修或更换压力传感器6、脉冲阻尼器损坏 6、更换脉冲阻尼器7、比例阀损坏 7、 a、检查隔膜，如果漏液立即更换b、检查手紧接头，损坏的立即更换8、放空阀的损坏 8、 a、拧紧放空阀b、更换放空阀..C、 进样阀漏液原 因 解决方法1、转子密封损坏 1、重新安装或更换进样阀2、定量环阻塞 2、更换定量环3、进样口密封松动 3、调整4、进样针头尺寸不合适 4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸 5、保持废液管高于废液液面6、废液管阻塞 6、更换或疏通废液管D、 色谱柱漏液原 因 解决方法1、尾端接头松动 1、拧紧接头2、卡套内有填料 2、拆下、清洗卡套、重新安装3、筛板厚度不合适 3、使用合适的筛板（参考下表）筛板选择指导物质粒径 筛板孔径3-4u 0.5u5-20u 2uE、 检测器漏液原 因 解决方法1、流通池垫片损坏 1、 a、避免过大的背景压力（压力降）b、更换垫片2、流通池窗破碎 2、更换窗口..3、手紧接头漏液 3、拧紧或更换4、废液管阻塞 4、更换废液管5、流通池阻塞 5、重新安装或更换液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决； 而其他的问题必须通过修改操作程序来解决 对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键A、 峰拖尾原 因 解决方法1、筛板阻塞 1、 a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷 2、填充色谱柱3、干扰峰 3、 a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相 PH选择错误 4、调整 PH值对于碱性化合物，低 PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点 5、 a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂发生反应图 b、更改色谱柱B、 峰前延原 因 解决方法1、柱温低 1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当 2、使用流动相作为样品溶剂..3、样品过载 3、降低样品含量4、色谱柱损坏 4、见 A1、A2C、 峰分叉原 因 解决方法保护柱或分析柱污染 1、取下保护柱再进行分析如果必要图 更换保护柱如果分析柱阻塞，拆下来清洗如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染， 运用适当的再生措施如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱2、样品溶剂不溶于流动相 2、改变样品溶剂如果可能采取流动相作为样品溶剂D、 峰变形原 因 解决方法1、样品过载 1、减少样品载量E、 早出的峰变形原 因 解决方法1、样品溶剂选择不恰当 1、 a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因 解决方法1、柱外效应 1、a、调整系统连接（使用更短、内径..更小的管路）b、使用小体积的流通池G、 K’增加时，脱尾更严重原 因 解决方法1、二级保留效应，反相模式 1、 a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式 2、 a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对 3、加入三乙胺（或碱性样品）H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾原 因 解决方法1、缓冲不合适 1、 a、使用浓度 50-100mM的缓冲液b、使用 Pka 等于流动相 PH值的缓冲液I 、 额外的峰原 因 解决方法1、样品中有其他组份 1、正常2、前一次进样的洗脱峰 2、 a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速..3、空位或鬼峰3、 a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积J、保留时间波动原 因解决方法1、温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化原 因解决方法1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当3、 a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移原 因解决方法1、柱温波动。

即使是很小的温度变化1、控制好柱子和流动相的温度，在检都会引起基线的波动 通常影响示差检测器之前使用热交换器测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外图检测器或其它光电类检测器 ）2、流动相不均匀流动相条件变化引2、使用 HPLC级的溶剂，高纯度的盐和..起的基线漂移大于温度导致的漂移 ）添加剂流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池如有需要，可以用 1N的硝酸不要用盐酸）4、检测器出口阻塞高压造成流通池4、取出阻塞物或更换管子参考检测窗口破裂，产生噪音基线）器手册更换流通池窗5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改时流动相时，在分析前用 10-20 倍体积的新流动相对柱子进行冲洗7、流动相污染、变质或由低品质溶剂7、检查流动相的组成使用高品质的配成化学试剂及 HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高 K’值）8、使用保护柱，如有必要，在进样之以馒头峰样被洗脱出， 从而表现出一个间或在分析过程中， 定期用强溶剂冲洗逐步升高的基线。

柱子9、使用循环溶剂，但检测器未调整9、重新设定基线当检测器动力学范围发生变化时，使用。