【最新word论文】HPLC测定复方杏香兔耳风颗粒中绿原酸的含量【医学专业论文】.doc

1HPLC 测定复方杏香兔耳风颗粒中绿原酸的含量作者：梁兆昌，杨建平，郭艳萍 【关键词】复方杏香兔耳风胶囊；绿原酸；HPLC 法；含量测定 0 引言 复方杏香兔耳风颗粒由杏香兔耳风、白术二味中药组成，用于湿热下注所致慢性宫颈炎、子宫内膜炎、阴道炎、白带等症.其质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第 14 册，该标准未收载含量测定项目，为了控制其质量，我们参考文献［1］用 HPLC 法测定该制剂中绿原酸的含量. 1 仪器和试药 日本岛津 LC10ATvp 液相色谱仪，N2000 色谱数据工作站；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号 110753200326 ） ，甲醇（色谱纯） ，其他试剂均为分析纯. 2 方法和结果 2.1 色谱条件 DiamonsilTMC18ODS 色谱柱(5μm,200×4.6mm)；流动相：甲醇 水 冰醋酸 三乙胺(18∶85∶1∶0.3)；检测波长：327nm；流速：1.0mL/min. 2.2 供试溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品 2.52mg，置于 50mL 棕色量瓶中，加 500mL/L 甲醇并稀释至刻度，摇匀.精密量取 4mL 置 10mL 棕色量瓶中，加 500mL/L 甲醇至刻度，摇匀，即得(20.16mg/L). 2.2.2 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，取约0.5g 精密称定，置 50mL 棕色瓶中，加 500mL/L 甲醇 40mL,超声处理 30min，放冷，用 500mL/L 甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得. 2.2.3 缺杏香兔耳风阴性供试品溶液的制备取杏香兔耳风阴性对照品0.15g，照 2.2.2 项下的方法同法制成缺杏香兔耳风阴性对照品溶液. 2.3 系统适应性试验精密吸取上述三种溶液与空白溶剂各 20μL 注入液相色谱仪测定，记录色谱图，结果见图 1.可见供试品溶液主峰保留时间与缺杏香兔耳风阴性对照品保留时间一致，阴性对照溶液在此时无吸收峰.即本试验条件下绿原酸与其他组分完全分离，其他组分对测定无干扰. 2.4 线性关系考察分别精密量取绿原酸对照品溶液（50.40mg/L）1.0，2.0，4.0，6.0，8.0mL 置于 10mL 容量瓶中，用 500mL/L 甲醇稀释至刻度，摇匀.即得 5.04,10.08,20.16,30.24,40.32mg/L 的绿原酸对照品溶液.分别精密吸取 20μL，依次注入液相色谱仪测定，结果以浓度（mg/L）对峰面积进行线性回归，得回归方程：Y=26536X-11023,r=0.9997.结果表明绿原酸在5.04～50.40μg 范围内呈良好的线性关系. A：对照品溶液；B：样品溶液；C：阴性对照液. 图 1 绿原酸 HPLC 色谱图（略） 2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液 20μL,重复进样 5 次，测定结果RSD=1.18%.可见本方法具有较高的精密度，所选定的色谱条件系统稳定.2.6 重现性试验取同一批号复方杏香兔耳风颗粒样品 5 份，按 2.2.2 项下方法制备供试品溶液，分别依法测定.结果，绿原酸含量 RSD=1.48%.表明本方法重现性好. 22.7 稳定性试验按照含量测定条件，对同一批样品（20060108）在0，2，4，8，12，24，48h，分别进样 20μL，测定绿原酸峰面积，计算绿原酸含量，RSD=2.08%.说明样品稳定性好. 2.8 回收率试验精密称取已知含量的样品（批号 20060108，含量1.60mg/g）6 份，分别精密加入绿原酸对照品 500mL/L 甲醇溶液（87.6mg/L）适量，照绿原酸含量测定方法测定其含量，计算回收率，结果见表 1. 2.9 样品含量测定按上述绿原酸含量测定方法对 3 批样品（20060107，20060106，20060109） ，绿原酸含量分别为 0.38，0.26，0.45mg/g. 2.10 不同批次杏香兔耳风药材中绿原酸含量测定参考文献［1-2］测定不同批次杏香兔耳风药材中绿原酸的含量.结果为0.85，0.21，0.42，0.63，1.34，0.26.不同批次杏香兔耳风药材的含量测定结果显示，杏香兔耳风药材中绿原的含量差异较大，为 0.21%～1.34%.提示投料前应对杏香兔耳风药材的绿原酸含量进行控制. 表 1 绿原酸回收率试验结果（略） 3 讨论 用紫外分光光度法分析比较绿原酸对照品及样品溶液在 200~400nm 波长间的紫外吸收光谱，结果表明在本实验条件，绿原酸在 327nm 波长处有最大的吸收峰，故选择 327nm 为检测波长.我们曾考察了不同色谱柱及不同甲醇含量（10%～50%）下，绿原酸与杂质间的分离度.结果表明，选择DiamonsilTMC18ODS 色谱柱(5μm,200×4.6mm)，绿原酸与杂质可达到完全基线分离.同时甲醇比例的减少，绿原酸与杂质分离度逐渐增大，但分离时间也相应延长.当甲醇含量为 18%时即可达完全分离，为保证方法的耐用性，将甲醇 水调整为 18∶85.我们采用 HPLC 法测定绿原酸含量，操作准确简便、灵敏度高、重现性好，有利于该品种质量的控制，确保药物的临床疗效. 【参考文献】 ［1］国家药典委员会.中国药典一部［M］.北京：化学工业出版社，2005:152-153. ［2］王静，常新全，刘俐纯，等.HPLC 法测定感冒止咳颗粒剂中绿原酸和绿原酸的含量［J］.中成药，2004，26(3):206.。