临床微生物学形态学检验.pps

临床微生物形态学检验 江西省临床检验中心吴茂红 近几年来 我国出台了一系列措施来规范抗生素合理运用 但由于积习甚深 可以说该项工作任重而道远 以往 在检验科中 微生物专业应该是最为滞后的部门 随着抗生素合理运用工作的不断深入 临床微生物专业和业者 获得了一个难得的历史机遇 临床微生物不受重视的原因 1 临床抱怨检验报告时间长 2 3天或更长阴性报告多阳性报告和临床不相符2 检验人员抱怨标本少 收费低不合格标本多人员少 受培训机会低 新知识获取少设备简陋 鉴定手段少 如何解决问题 加强与临床沟通加强形态学检验 采取分级报告制度加强自身业务学习 提高专业技术水平增加人员添置必要器材改善实验室环境 临床微生物形态学作用 评判送检标本质量分级报告后续鉴定培养重要依据 涂片染色优势 提高报告的时效性 可根据不同的标本和不同的病情制定相应的报告时间和规定 与临床科室达成一定的约定 以提高报告的时效 应分两种报告形式 a 危重感染报告 b 常规报告 涂片染色报告 1 革兰染色 危重报告30 分钟报告 报告内容应包括染色反应 是细菌或真菌 细菌形态 有无细胞内吞嗜现象 有无菌丝 2 抗酸染色 报告抗酸染色阳性或阴性 菌量以加号表示 常规报告24h 危重报告1h 2 痰培养 24小时初始报告 报告内容包括痰标本是否合格 优势细菌 金葡菌 铜绿假单孢菌等特征明显细菌的鉴定结果 尿培养 可在24小时报告初始结果 包括菌落计数和可能细菌种类 如氧化酶阴性的革兰阴性杆菌 金黄色葡萄球菌等 分泌物 24h初始报告 有无细菌生长 革兰阳性或阴性细菌或特征明显的细菌名称 根据涂片结果推测致病菌 血液和无菌体液培养的报告 实行三级报告制度 第一级 培养液直接涂片结果 第二级 初步药敏结果和平皿菌落涂片结果 第三级 正式细菌鉴定和药敏报告 一 G染色细菌形态 葡萄球菌 表皮葡萄球菌菌落 链球菌 G阴性杆菌 弧菌 二 培养前涂片G染色 1 下呼吸道感染标本 痰标本 痰标本是临床微生物最常见的标本之一 由于口腔中存在大量正常菌群 因此 判断标本是否合格格外重要 痰涂片染色有常规的G染色和抗酸染色 摘自 下呼吸道感染细菌学检验操作规范 当标本中细菌种类超过3种以上 未见到纤毛柱状上皮细胞 作为不合格标本 如见到数量不等的白血胞或纤毛柱状上皮细胞或两者同在 含1 2种不同细菌 可考虑继续培养 结果可根据病情再作分析 当涂片中见到1 3种细菌 少量的扁平上皮细胞 少量或较多纤毛柱状上皮细胞均可按合格标本继续培养 不合格标本 低倍 合格痰标本 合格痰标本 低倍镜 合格痰标本 吞噬 白细胞上覆盖杂菌 肺炎链球菌 镜检的描述性报告 如镜检见到排列成葡萄状的革兰阳性球菌 可报告 找到革兰阳性球菌 形似葡萄球菌 如见到瓜子仁形成矛头状端相背 成双排列 具有明显荚膜的革兰阳性球菌时 可报告 找到革兰阳性球菌 形似肺炎链球菌 如见到不易识别的细菌时则报告 找到革兰 性 形细菌 如发现其他有意义病原微生物存在时 应主动描述性报告观察结果 并与临床联系和追踪进一步检查 肺炎链球菌肚脐样之菌落 肺炎链球菌肚脐样之菌落 流感嗜血杆菌 流感嗜血杆菌痰涂片G染色镜下见 菌落灰白色 圆形 光滑 半透明 卫星现象 金葡菌 金葡菌 X V因子需求试验 卡他莫拉菌 卡他莫拉菌菌落 痰涂片卡他莫拉菌 白细胞吞噬 有荚膜G阴性杆菌 奴卡菌 涂片镜检 组织液 渗出液或脓液标本直接涂片 如有色素颗粒 用玻片将其压碎涂片 见革兰阳性 有时不定 纤细的菌丝体和长杆菌 抗酸染色弱阳性 可初步定为奴卡菌 脑脊液和痰液中发现抗酸阳性长杆菌 须与结核杆菌区别 星形奴卡菌革兰染色形态 卷发样 星形奴卡菌抗酸染色形态 星形奴卡菌菌落形态 菌落皱褶 颗粒状 呈黄色或橙色 星形奴卡菌在血平板上菌落形态 2d 星形奴卡菌在巧克力平板上菌落形态 2d 真菌 酵母及酵母样真菌念珠菌隐球菌霉菌 丝状真菌 念珠菌 念珠菌在环境中和人体内均可寄生存在正常人皮肤 口腔 肠道 肛门 阴道中可分离出本菌显微镜下表现为芽孢和假菌丝假菌丝一般与致病相关寄生时一般表现为孢子相 念珠菌 念珠菌 痰涂片 假菌丝 厚膜孢子 芽管 鹅口疮 霉菌 曲霉 粗大 有隔 革兰染色多呈阳性 竹节状或鹿角状合格标本涂片镜检具有价值 但不可作为确诊依据 抗酸染色 生物学特性形态染色 菌体细长微弯 有分枝 排列不规则 多单个散在 易发生L型 抗酸染色阳性 结核分枝杆菌 结核杆菌 为结核病的病原体 痰涂片抗酸染色 结核 生长缓慢 18h分裂一次 2 4W形成R型菌落 菜花样菌落 乳白色干燥不透明 表面呈颗粒结节 边缘不整 2 中段尿标本 尿培养结果直接关系到泌尿道感染的诊断与治疗 但送检标本常常出现污染情况 分离出3种以上的细菌 或分离出凝固酶阴性葡萄球菌 革兰阳性棒状杆菌等非定义为致病菌的细菌 涂片未见到 应在报告中提示可能是污染细菌建议结合临床表现考虑结果的参考价值 G染色见白细胞及G 杆菌 培养 105CFU ml 女性生殖道 尿道分泌物 性病 淋病 细菌性阴道病 霉菌性阴道炎 正常白带 见上皮细胞及大量 杆菌 淋病奈瑟菌 生物学特性形态染色 G 双球菌 有荚膜和菌毛 无芽胞 无鞭毛脓汁标本中 急性期病人 细菌位于中性粒细胞内 慢性期病人 细菌位于细胞外培养特性 与脑膜炎奈瑟菌相似 营养要求高 只能在巧克力平板及专用培养基上生长 形成灰白色细小S型菌落生化反应 氧化酶 只分解葡萄糖 不分解其它糖抵抗力 极弱 淋病奈瑟菌 在革兰染色涂片上可见阳性乳杆菌减少 而呈多形性的革兰阴性或革兰染色性不定小杆菌 弯曲菌 球杆菌等增多 并可见覆盖大量革兰阴性细菌的上皮细胞即线索细胞的存在 阴道分泌物涂片革兰染色记分系统可帮助实验室对涂片所见进行解释 细菌性阴道病 BV 细菌性阴道病的临床诊断标准 乳白色匀质非炎症性分泌物增多 覆盖阴道壁 阴道分泌物pH 4 5 KOH试验因分泌物中胺在碱性环境下变成挥发性氨而呈鱼腥味 脱落的鳞状上皮细胞因革兰阴性小杆菌粘附 而使边缘变得模糊 即所谓的 线索细胞 存在 上述标准满足三条即可诊断 白带G染色 细菌性阴道病 霉菌性阴道炎 脑脊液 胸腹水等无菌部位标本 脑脊液墨汁染色 隐球菌呈圆形或椭圆形的双层厚壁孢子 外有一层宽阔荚膜 边缘清楚完整 菌体内可见出芽 大便 一般不做涂片染色 特殊情况 如02 伪膜性肠炎 中毒性菌痢可做涂片检查 艰难梭菌G 粗大杆菌 有鞭毛 芽胞 卵圆形位于次极端专性厌氧 分离培养困难而故名 须用特殊培养肠道正常菌群 长期应用抗生素时可引起腹泻 假膜性结肠炎 C DifficileColitis therearefluffymembranescausedbyexudateandwhitebloodcells Thisinanadvanced seriouscasecalledpseudomembranouscolitis Itistreatedwithoneoftwoantibiotiecs metronidazole Flagyl orvancomycin From WestShoreEndoscopyCenter C DifficileFrom KenTodar sMicrobialWorld 形态学局限性 不能取代培养与鉴定对操作者技术要求高 需要长期的培养 操作者需要足够的时间和耐心 。