丙型肝炎临床检验技术分析.docx

    丙型肝炎临床检验技术分析    张雪溪摘要：丙型肝炎的首个检测方法是丙肝病毒（HCV）检测法，经过多年发展，HCV检测方法有了极大的进步本文分析总结多种检验技术，为加快HCV检验技术的发展提供参考关键词：丙型肝炎;临床检验;技术分析R446.11    A      2107-2306（2021）17--01丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染引起的传染性疾病HCV传染的途径较多，主要通过血液传播，但仍未能明确一半以上HCV患者的传染途径HCV病毒感染的人数已经破亿，且不断的增加由于乙肝病毒极易变异，尚未研制出专门有效的丙肝疫苗，因此，需要灵敏的检验技术，积极预防及早发现HCV感染，避免丙肝发病影响健康1抗-HCV检验技术该技术是最早的HCV检测技术，可以详细划分为进行间接酶联免疫吸附实验、蛋白质芯片检测法、重组免疫印记法等，其中重组免疫印迹法因灵敏度较高，已成为抗体检测的标准当前抗-HCV检验技术可根据抗原类型和时间分为三代：第一代抗-丙型肝炎病毒IgG盒，该检测技术使用的是病毒基组非结构区，简称C100，该试剂由美国在1900年研发并公布该技术的出现，降低了丙型肝炎病毒输血感染率，总体上降低80%的输血传染。

但因其灵敏度低、检测时间长等缺陷，被二代抗-HCV试剂盒取代第二代抗-HCV试剂盒是在原有基础上，增加新抗原，如肽C22-3和非结构区抗原C33C，抗-C22-3和抗-C33C此种类型的抗-HCV检测技术能很快的检测出丙型肝炎病毒，而且有良好的特异性，增加的新抗原能提升HCV病毒检测率第三代抗-HCV检验试剂盒，减少了核心区抗原比例，提升了非结构区的抗原比例，同时加入了NS5区抗原此种抗-HCV病毒检测技术仍然具有改进潜力随着丙型肝炎研究的深化，发现了其他丙型肝炎病毒蛋白，通过加入外膜蛋白以提升检测灵敏度此种检测方法制作简单，检测有效，有较大的推广价值蛋白质芯片是今年伴随基因芯片发展的新技术该技术通过将蛋白质的分析微缩到小型芯片上，利用荧光或酶显色进行检测，用电脑分析结果蛋白质芯片是将HCV混合抗原、核心区抗原、NS3、NS4、NS5区抗原分别固定在玻璃载体上，用样本稀释液将检测血清稀释10倍，加入蛋白微阵列反应孔中，37℃环境静置30分钟，洗涤后加入Cy3荧光标记的兔抗人IgG加样检测后，玻璃片用激光共聚扫描仪扫描成型，对比同样处理的标准品，得出检测结果此种方法具有较高的特异性和敏感性，具有高度扩充整合能力，但需要用较昂贵的激光扫描仪，增加了应用成本。

2丙肝病毒核酸（HCV-RNA）扩增检测技术若患者感染丙型肝炎病已超过两周，则能在血清中检测到HCV-RNA在感染完全恢复之前，血清中的HCV-RNA呈现第一个高峰，所以非常有必要应用丙肝病毒核算扩增检测技术该技术按照常规PCR方式进行体外基因扩增，通过荧光探针与被扩增片段中的特异区域结合，当引物沿模板延伸至结合处时，荧光报告集团沿耐热DNA聚合酶的3～5′外切酶活性将探针切下来，即释放激光荧光仪器根据实时检测到的数据和荧光化学合为一体，PCR扩增和产物分析的全过程在单管封闭条件下进行，减少产物污染和不能定量分析的问题，通过微机控制，实时进行动态检测扩增产物并自动分析结果，确保检测结果的准确因HCV-RNA在早期就会出现，并且HCV-RNA扩增检测技术具有非常高的灵敏性，可以用于早期诊断，降低丙型肝炎病毒感染的风险在血清学指标不确定，无法得出准确结论时，可以运用该技术，增加了临床确诊的准确性血清学方法只能检测该病原体的表型，无法明确诊断，而有些情况免疫学指标不能完全的反应病原体的感染状况，医院人员可以使用HCV-RNA扩增检测技术进行检测，查看患者是否存在病原体，为医生准确判断病人病情提供相应的准确数据。

病毒在样品中稳定性较差，血清在采集后应立即检测或快速冷冻，避免样品失活或分解，减少其他影响因素一般HCV-RNA检测应用的是聚合酶链反应技术，该技术的检测灵敏度高，而且全自动定量测量3丙肝病毒抗原检测技术丙肝病毒核心抗原蛋白中有191个氨基酸，其中氨基酸序列非常严格，与丙型肝炎病毒中的氨基酸序列相比，有95%以上是同源，这一现象完全可以作为丙型肝炎病毒感染的典型标志通过检测丙型肝炎病毒抗原，有利于患者及早发现病情HCV病毒抗原检测分为以下两种：一种是肝组织中HCV病毒抗原检测，以单克隆抗-HCV-N33直接酶標记法测定石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒抗原，该抗体系应用于基因重组，表达丙肝抗原，具有简便、快速、稳定、特异性和灵敏性高的特点但做肝脏穿刺对病人有一定损伤，难以推广另一种是血液中HCV核心抗原（HCV-cAg）检测，HCV核心抗原是HCV基因编码的结构蛋白质之一，其中21～61位氨基酸区域是高度保守免疫活性区HCV-cAg是感染者体内最早出现的血清标志物，与HCV-RNA出现的时间相同已知有两种检测HCV-cAg的双抗体夹心法ELISA试剂，一种是在抗体产生之前直接检测血清HCV游离核心抗原，另一种是在窗口期和抗体产生后的病毒复制期检测总HCV核心抗原。

后者不受检测样品中的抗HCV抗体影响，检测结果准确可靠，可用于HCV血清学转换前的早期急性丙型肝炎的诊断HCV-cAg ELISA检测法具有较高的敏感度和精密度，不受其他疾病的影响，在感染初期即可检测出HCV-cAg缩短“窗口期”它和HCV-RNA核酸检测技术具有较高的关联性，操作简便，敏感性好、特异性高、不需要特殊设备，费用低廉，具有较高的应用价值4结束语综上所述，丙型肝炎病毒检测技术要遵守灵敏度高、准确、有效的原则所有检测技术中抗-HCV病毒检测因制作成本低、具有普遍性，适用于一般检测HCV-RNA核酸扩增检测因灵敏度高、测定时间长，适用于早期诊断和无法判断的情况，病情能有准确的判定HCV-cAg检测因操作简便、灵敏度高，适用于急性丙型肝炎的诊断HCV病毒检测技术的发展方向是做到迅速、准确、具有较高灵敏性;同时监测患者治疗和后期疗效观察Reference：[1]申明莉.丙型肝炎患者的临床检验研究[J].中国医药指南，2016，14（23）.[2]唐翠.不同检验方法用于丙型肝炎检验临床对比[J].中国实用医药，2015，10（35）.  -全文完-。