实验常用培养基及基本特性.docx

常用培养基及基本特性1、ＲＰMI-16４０　MeｄiｕmﻫRPMＩ-1６４0广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基重要用于悬浮细胞培养其他像K-５62、HL-60、Juｒkat、Daudi、IＭ-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HＣＴ-15上皮细胞等均可参照使用2、Ｍinimuｍ Ｅssｅｎｔial Ｍeｄｉum(MEM）也称最低必需培养基，它仅具有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和８种维生素成分简朴，可广泛适应多种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养MＥM－Ａlpｈａ一般用于培养某些难培养细胞类型，而其他没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养ﻫ3、ＤＭＥM－高糖（原则型)是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养合用于附着性较差,但又不但愿它脱离本来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养4、DMEM-低糖(原则型)是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别合用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。

ﻫ５、DＭEM/Ｆ１2DMEM/Ｆ１2培养基适于克隆密度的培养F1２培养基成分复杂,具有多种微量元素,和DMＥM以1：1结合,称为DMＥＭ/F1２培养基(DME/F１2meｄium),作为开发无血清配方的基本，以运用F1２具有较丰富的成分和ＤMEM具有较高浓度的营养成分为长处该培养基合用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在DＭＥＭ/Ｆ12（1:１）中加入1５mMHＥPＥＳ缓冲液6、McCoy’s 5Aﻫ McCoy’s 5Ａ Medｉum 重要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，重要用于作组织活检培养、某些淋巴细胞培养以及某些难培养细胞的生长支持例如Jｅｎｓen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT－２9、BHL－1０0等上皮细胞7、Ｉscoｖe’ｓ Ｍodifiｅｄ　Duｌbeｃｃｏ Meｄｉｕm　(IＭDＭ）ﻫＧuｉｌbｅｒ 和Iscｏｖe将Dｕlbeｃcｏ’Mediuｍ 改良为 Iｓcoｖe’ｓ Ｍeｄiｕｍ,用于培养红细胞和巨噬细胞前体此种培养液具有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HＥPES。

并用硝酸钾取代了硝酸铁IMDM还可以增进小鼠Ｂ淋巴细胞，LPＳ刺激的B细胞,骨髓造血细胞，T细胞和淋巴瘤细胞的生长ＩMDM为营养非常丰富的培养液，因此可以用于高密度细胞的迅速增殖培养8、Ｍ－１99　Medium1９５0年,Morgan成功研制出具有拟定化学成分的细胞培养液，即Ｍ-199，重要用于鸡胚成纤维细胞培养此培养液必须辅以血清才干支持长期培养M-1９9可用于培养多种种属来源的细胞,并能培养转染的细胞ﻫ９、Leiｂovｉtｚ　Medｉｕm （Ｌ－15）ﻫL-15培养液合用于迅速增殖瘤细胞的培养,用于在CＯ2缺少的状况下培养肿瘤细胞株此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸构成进一步改良，并由半乳糖替代了葡萄糖10、Hａm’s Ｆ-１0培养基:适应小鼠细胞、人类二倍体的培养11、Haｍ’s Ｆ－１2培养基：可以在加入很少血清的状况下应用，特别适合单细胞培养和克隆化培养，是无血清培养中常用的基本培养液12、Wｉｌlｉam’s　Mediuｍ E:用于大鼠肝上皮细胞的长期细胞培养ﻫ1３、MCＤB 131 培养液：用于培养内皮细胞ﻫ１4、Ｏｐti－MＥM I Rｅduｃeｄ Serum Ｍeｄia:用于培养造血细胞。

ﻫ15、植物血凝素(PＨA):增长细胞转化和DNA合成ﻬ如何对的选择细胞培养基细胞培养是实验室里最常用和最基本的实验了，但却不是最简朴的别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问有时候细胞状态不好,转染、药筛这些实验主线就没措施做影响细胞培养的因素诸多,让我们先从培养基和血清说起典型的培养基有诸多种，Invitrogen(GIBCO)、thermo ｆisher(ＨyClone）、Sigma等公司都可以提供其中DMＥM、RPMI １64０、MEＭ、ＤMＥM/F１２都是应用最广泛的培养基其她如M199、IMDM、L１5培养基等也用于某些细胞的培养◆ MEＭ是由Eaglｅ’ｓ基本培养基(BME)发展而来的，其中增长了组分的范畴及浓度◆ Dulｂecco改良的ＢEM(ＤMEＭ)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，目前常用于贴壁细胞的培养DMEM的氨基酸浓度是MＥＭ的两倍，维生素浓度是MEＭ的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用最初的配方中葡萄糖含量为１0０0 mｇ/L,后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调节为450０ mg／L,这就是人们常说的低糖和高糖了◆ aMEM具有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于多种细胞类型，涉及对营养成分规定苛刻的细胞。

◆　Hａm’s Ｆ１2是为在低血清浓度下克隆CHＯ细胞而设计的,目前也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养Ｆ12还可以与ＤMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养◆ ＲＰMI １６40培养基是专为淋巴细胞培养而设计的,目前已广泛应用于悬浮细胞的培养此前常常听到有人问,这种细胞该用哪一种培养基呢？其实这个问题的答案可以很简朴,也可以好复杂此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或其她的细胞库,那很简朴，问供应商就行了或者找到有关的文献，作为参照Iｎｖitrogeｎ网站上有一种Cｅll　Lｉne Databaｓｅ的工具，也较好用选择你感爱好的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等,有时尚有优化好的转染环节,很以便Sigmａ网站上也有一种Media　Expert,涉及了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参照文献等,它还是一种解决问题能手，对于细胞培养中的常用问题,如细胞贴壁不好、培养基变色等，它都会列出也许的因素,并提供补救措施这个Expｅrt果然不简朴!但如果你是着手建立一种全新细胞的培养体系，主线找不到任何参照,那你就得花点时间自己实验了。

万事开头难嘛由于没有一种原则答案在ＭＥＭ中培养的细胞,很也许在DMEＭ或M１99中同样很容易生长总之，首选ＭEM做贴壁细胞培养、ＲPMI 1640做悬浮细胞培养会是一种好的开始你也可以购买几种培养基来,然后花大概两周的时间做一种简朴的细胞生长实验,来选择其中最适合的有时候你会惊讶地发现你的最佳培养条件与文献报道的不同，就算是同一种培养条件,细胞的生长状态也时好时坏，这是很正常的由于试剂、水、不同批号的血清之间都存在着差别要提高培养基的稳定性，可以从培养基和血清两方面入手此前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中也许会产生某些浓度误差，并且有些实验室的水质并不抱负,因此培养的效果会有差别如果使用液体培养基,这种人为的误差会减少,由于毕竟是大批量工业化生产的,批间差会很小人们是不是感觉液体培养基会贵诸多，此前是这样,但目前非也HyClｏｎe和Invitｒogen都在国内建立了液体培养基的生产基地,生产和运送成本大幅减少，因此目前的价格也只是50-６０元/500ｍl，比干粉培养基贵不了多少，并且还帮你省了过滤器和时间血清具有生长因子可增进细胞的繁殖，具有附着因子可增进细胞的贴壁，同步还具有抗胰酶活性。

血清同步也是矿物质、脂类及激素的来源最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等牛血清是按照采血时间的早晚来分类的采血时间越早,营养物质越丰富,所含抗体也越少,因而胎牛血清适合规定高的细胞系和克隆化培养由于疯牛病的因素,到目前为止,国内政府仍然严禁从北美洲、欧洲和日本等地区进口牛血清,因此市面上的牛血清大多来自澳洲、南美洲，或是国产的而血清批次间的差别就是不可避免的,这种差别来源于不同的制备措施和除菌措施、动物的年龄差别及血清的储存条件等，并且与取血动物的来源关系密切不同的牧场、不同的气候天气及其她环境因素都也许影响血清的质量因此选好了一种血清就要尽量长期使用它在需要更换时，也要尽量保持与原有的一批血清相似目前诸多公司都提供血清预留，你一旦选定了某个批次的血清，最佳备足一年的量,这样可以避免诸多麻烦血清固然是细胞培养中不可或缺的成分，但正如上文所说,血清的批间差别大,更换血清时需要做大量的测试以取保替代的血清与本来的相似而血清的供应也是必须要考虑的因素由于气候或疯牛病的影响，说不定哪天血清就忽然没得卖了，那对实验的影响可非同小可此外,血清的价格也很昂贵，虽说目前也有便宜的国产血清，但是高品质的澳洲血清价格仍旧高企。

因此，也有某些实验室开始换用无血清培养基无血清培养基（Sｅruｍ-Free　Mｅdia）,一般以SFＭ表达，顾名思义,就是在细胞培养中不需要添加血清,但是在某些应用中也许要添加生长因子或细胞因子无血清培养基中添加了血清的重要成分:粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等,能减少上述血清带来的不利因素，使细胞培养的条件更稳定但它也不是完美的,从有血清培养过渡到无血清培养的条件并不像想象中那么直截了当处在发育的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比）需要不同的配方,对生长因子和细胞因子的选择尤为重要并且在清除血清的同步,也清除了某些血清蛋白具有的保护、解毒作用,因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的规定更高此外,它的价格也比一般的培养基贵诸多目前有诸多厂家生产无血清培养基GＩBCO这个细胞培养的金字招牌固然少不了，它也是最早研制无血清培养基的目前已经开发了ES细胞、杂交瘤、CHO、２93、昆虫细胞、神经细胞、淋巴细胞、角质细胞、内皮细胞等多种细胞的无血清培养基上个月还推出了首个间充质干细胞的无血清培养基,能使MＳC维持未分化状态超过9代HｙＣlｏne公司也有CHO、293、杂交瘤细胞、昆虫细胞、病毒疫苗细胞的多种无血清培养基。

Sｉgma则刚刚收购了澳大利亚ＪＲH公司,有了JRH的ＥX-CＥＬL系列,无血清培养基的选择也更多了这样多种，要选择起来也是个头疼的事情除了部分培养基是公开配方的，如用于培养内皮细胞的MCDB 13１(Sigma),大部分液体培养基都是专利配方的，也就是说其中的成分是保密的那么你只能是检索文献、让供应商推荐,然后用自己的细胞做几次传代培养来选出最合适的培养基毕竟实践出真知嘛P．Ｓ．附上某些细胞培养中的小Ｔip,也许会对您有所启发部分摘自Invｉtrogen的中文Focｕs）• 牢记，细胞培养基的储存条件是２-８摄氏度如果细胞培养基不小心被冻，您应当融化培养基并观测与否有沉淀产生如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果浮现沉淀，只能丢弃这些培养基• 贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基,也许在放置几天后颜色变紫这重要是由于在暴露到周边的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH值的上升您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的ｐＨ值(拟定松开瓶口以保证气体互换）• 当在无血清培养基中添加抗生素时,减少至少在有血清培养基中所使用浓度的５０%血清蛋白会结合和灭活某些抗生素。

在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，也许对于细胞达到毒性水平•　一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应当在两到三周内使用它由于某些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解• 总之,大部分添加物和试剂最多可以冻融３次,如果次数更多都会在涉及蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,将会影响它的性能• 血清的热灭。