大肠杆菌菌株区别.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑大肠杆菌菌株区别 JM109，DH5a，BL21这些感受态有何识别 1：DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株 基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上该菌适合表达非毒性蛋白 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3） 3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr 4：JM109菌株 该菌株在使用pUC系列质粒载体举行DNA转化或用M13 phage载体举行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15举行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很轻易鉴别重组体菌株 基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’ 5：TOP10菌株 该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传 基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)， φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74， recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG 6：HB101菌株 该菌株遗传性能稳定，使用便当，适用于各种基因重组测验 基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1 M110或 SCS110 大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。

常用的菌株都会产生dam,dcm，从而受到甲基化的影响. 片面限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司供给的内切酶说明中均有说明 大多数酶切位点的甲基化不影响切割，而有些会影响，如XbaI, BclI等而且甲基化只发生在特定序列，以XbaI为例，只有在位点序列旁展现GA或TC，该XbaI位才会被甲基化 而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法： （1）选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI一致；但不受甲基化影响； （2）利用甲基化酶缺失的受体细胞举行DNA的制备，如E.coli JM110和链霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者细胞内本就没有甲基化酶，从这些细胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割 E.coli JM110 要摈弃dam,dcm甲基化的影响，需要用特定的dam-,dcm-的菌株，如JM110 假设由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒，那么不会被甲基化. 各种感受态细胞的识别 用途 特征 Xl1-Blue菌株 基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘ hsdR17(rK- mK+)。

特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性 用途：分子克隆和质粒提取 BL21(DE3)菌株 基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 ) 特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上该菌适合于非毒性蛋白的表达 用途：蛋白质表达 BL21(DE3)ply菌株 基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR) 特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基 因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达 用途：蛋白质表达 DH5α菌株 基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ– 特点：一种常用于质粒克隆的菌株。

其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选recA1和 endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达 JM109菌株 基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- hsdR17(rK-mK+) 特点：片面抗性缺陷，适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选 用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达 — 4 —。