亚硝酸盐的测定.doc

盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的含量1亚硝酸盐的测定<盐酸萘乙二胺法>1.1原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化,产生重氮盐,此重氮盐再与偶合试剂<盐酸萘乙二胺>偶合形成紫红色染料,其最大吸收波长为550nm,测定其吸光度后,可与标准比较定量.1.2仪器和试剂1.2.1仪器   ①小型粉碎机.   ②分光光度计.   ③25ml具塞比色管.1.2.2试剂   ①氯化铵缓冲溶液：在1 000ml容量瓶中加人500ml水,然后准确加入20.0ml盐酸,振荡混匀后,再准确加入50ml氢氧化铵,用水稀释至刻度.必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试pH至9.6～9.7.   ②硫酸锌溶液<0.42mol/L>：称取120g硫酸锌,用水溶解,并稀释至1000ml.   ③氢氧化钠溶液<20g/L>：称取20g氢氧化钠用水溶解,稀释至1 000ml.   ④对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸,溶于700ml水和300ml冰乙酸中,置棕色瓶中混匀,室温保存.   ⑤盐酸萘乙二胺溶液<1g/L>：称职0.1g盐酸萘乙二胺,加60%乙酸溶解并稀释至100ml,混匀后,置棕色瓶中,在冰箱中保存,1周内稳定. ⑥显色剂：临用前,将盐酸萘乙二胺溶液<1g/L>和对氨基苯磺酸溶液等体积混合.仅供1次使用.   ⑦亚硝酸钠标准储备液：准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,用水溶解后移入500ml容量瓶中,加100ml氯化铵缓冲溶液,用水稀释至刻度,混匀,在4℃避光保存.此溶液每毫升相当于500μg的亚硝酸钠.   ⑧亚硝酸钠标准使用液：临用前,吸取亚硝酸钠标准储备液1.00ml,置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀.此溶液每毫升相当于5.0μg的亚硝酸钠.1.3操作步骤1.3.1样品的处理称取约10.00g<粮食称取5.00g>经绞碎混匀的样品,置于250ml烧杯中,加.70ml水和12ml氢氧化钠溶液<20g/L>,混匀,用氢氧化钠溶液<20g/L>调样品pH至8,定量转移至200ml容量瓶中,加l0ml硫酸锌溶液,混匀.如不产生白色沉淀,可再补加2～5ml氢氧化钠溶液,搅拌混匀.置60℃水浴中加热10min,取出后冷至室温,加水至刻度,混匀.放置0.5h,用滤纸过滤,弃去初滤液20ml,收集滤液备用.1.3.2亚硝酸盐标准曲线的绘制吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml亚硝酸钠标准使用液<相当于0.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg的亚硝酸钠>,分别置于25ml具塞比色管中.分别加入4.5ml氯化铵缓冲溶液,2.5ml60％的乙酸,然后立即加入5.0ml显色剂,加水至刻度,混匀,在暗处静置25min,用1cm比色杯<灵敏度低时可换2cm比色杯>,以零管调节零点,于波长550nm处测吸光度,绘制标准曲线.1.3.3样品的测定吸取10.0ml样品滤液于25ml具塞比色管中,按标准曲线制备程序,自"分别加入4.5ml氯化铵缓冲液"起依法操作.同时做试剂空白.1.4结果计算式中：X—样品中亚硝酸盐的含量,mg/kg； m1—样品的质量,g； m2—测定用样液中亚硝酸盐的质量,μg； V1—样品处理液的总体积,ml； V2—测定用样液体积,ml.结果以算术平均值的二位有效数字表述.1.5说明与注意事项 硫酸锌溶液作为蛋白质沉淀剂使用,也可用亚铁氰化钾和乙酸锌的混合溶液,利用产生的亚铁氰化锌与蛋白质共沉淀；实验中使用重蒸水可以减少试验误差.2硝酸盐的测定2.1原理 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,将样品提取液通过镉柱,使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子.在酸性条件下,亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料,经比色测得亚硝酸盐总量,从还原前后亚硝酸盐量即可求得硝酸盐的含量.2.2仪器和试剂2.2.1仪器〔1〕镉柱 a.海绵状镉粉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于500ml200g/L的硫酸镉溶液中,经3～4h,当溶液中的镉全部被锌置换后,用玻璃棒轻轻刮下,取出残余锌皮,使镉沉底,倾去上层清液,以蒸馏水用倾斜法洗涤,然后移入组织捣碎机中,加500ml水.捣碎约2s,用水将金属细粒洗至标准筛上,取20～40目之间的部分.置试剂瓶中,用水封盖保存,备用.b.镉柱装填：如图8—3所示.用蒸馏水装满镉柱玻璃管,并装入2cm高的玻璃棉作垫.将玻璃棉压向柱底,并将其中所包含的空气全部排出,在轻轻敲击下加入海绵状镉至8～10cm高,上面用1cm高的玻璃棉覆盖,上置一个储液漏斗,末端穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接.图8—3镉柱装置示意图 如无上述镉柱玻璃管,也可用25ml酸式滴定管代用. 当镉柱填装好后,先用25ml盐酸<0.1mol/L>洗涤,再以蒸馏水洗2次,每次25ml,镉柱不用时用水封盖,随时都要保持水平面在镉层之上,不得使镉层夹有气泡.镉柱每次使用完毕后,应先以25ml盐酸<0.1mol/L>洗涤,再以水洗2次,每次25ml,最后用水覆盖镉柱.2.2.2试剂   ①氨缓冲溶液：量取20ml盐酸加50ml蒸馏水,混匀后加50ml氨水,用水定容至1 000ml.   ②稀氨缓冲溶液：取50ml氨缓冲溶液,用水定容至500ml.   ③对氨基苯磺酸溶液<4g/L>.   ④盐酸萘乙二胺溶液<2g/L>.   ⑤盐酸溶液<0.1mol/L>：吸取8.4ml盐酸,用水稀释至1 000ml.   ⑥硝酸钠标准储备液：准确称取0.123 2g硝酸钠<已于110～120℃干燥至恒重,相当于0.1000g亚硝酸钠>,以重蒸水溶解,移于500ml容量瓶中并定容.此液浓度为200μg/ml亚硝酸钠.   ⑦硝酸钠标准使用液：临用时吸取标准液2.50ml置于100ml容量瓶中,加水定容.此液浓度为5μmg/ml亚硝酸钠.   ⑧亚硝酸钠标准使用液同亚硝酸盐的测定.2.3操作步骤2.3.1样品的处理.同亚硝酸盐测定.2.3.2镉柱还原效率的测定   ①先以25ml稀氨缓冲溶液冲洗镉柱,流速控制在3～5ml/min<以滴定管代替的,可控制在2～3ml/min>.   ②吸取20ml硝酸钠标准使用液,加入5ml稀氨缓冲溶液,混匀,注入储液漏斗,使流经镉柱还原,以原烧杯收集流出液,当储液中溶液流完后,再加5ml水置换柱内留存溶液.将全部收集液如前经镉柱再还原一次,第二次流出液收集于100ml容量瓶中,再用20ml水洗涤镉柱,共洗涤3次,洗涤液收集于同一容量瓶中,加水至刻度,混匀.   ③吸取10.00ml还原后的标准液<相当于10mg亚硝酸钠>于50ml比色管中,加人2.0ml对氨基苯磺酸溶液<4g/L>,混匀,静置3～5min,各加入1.0ml盐酸萘乙二胺溶液<2g/L>,加水至刻度,混匀,静置15min,用2cm比色杯,于538nm处测定吸光度并绘制标准曲线.根据标准曲线计算测得结果.还原效率大于98%为符合要求.式中：X—还原效率,％； A—测得亚硝酸盐的含量,μg； 10—测定用溶液相当于亚硝酸盐的含量,μg.2.3.3样品中亚硝酸盐总量测定    ①样液还原：吸取20ml样品处理液于50ml烧杯中,加5ml氨缓冲溶液,混匀后注入储液漏斗中,使流经镉柱还原,以下按镉柱还原效率测定操作进行,收集还原后的样液于100ml容量瓶中并定容.   ②吸取10～20ml还原后的样液于50ml比色管中,以下按镉柱还原效率测定操作进行,测得吸光度,从标准曲线上查出亚硝酸盐量.2.3.4亚硝酸盐测定吸取40ml样品处理液于50ml比色管中,按亚硝酸测定操作进行,测定吸光度,从标准曲线上查出亚硝酸盐含量.2.4结果计算式中：X—硝酸盐含量,mg/kg； A1—经镉柱还原后测得的亚硝酸盐量,μg； A2—不经镉柱还原直接测得的亚硝酸盐量,μg； V—测定用经镉柱还原后样液体积,ml； 1.232—亚硝酸钠换算为硝酸钠的系数；m—样品的质量,g.5 注意事项①实验前要对容量瓶进行检漏与清洁.②要注意把握实验过程中的时间还有把握住试剂的用量.③注意加入试管中样品的浓度不要太浓,反应后最后颜色最好处于标准液之间.④实验后要注意搞好卫生.6 / 6。