实验六：枯草芽孢杆菌生长曲线测定.docx

微生物学》实验报告学院生物工程学院年级、专业、班10级牛工01班姓名吕亚慧成绩课程名称微生物学实验实验名称枯草芽孢杆菌生长 曲线测定实验指导教师李苹教师评教师签字：语年 月日开课时间室：A区文科楼5102012年11月22日实验目的:1、 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代代；2、 学习液体培养基的配置以及接种方法；3、 反复学习无菌操作技术；4、 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同;5、 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；6、 学习光电比浊法测量细菌数量的方法；7、 学习平板涂布技术实验原理i ①器调整期1 一/②/对数期③稳定期議&刖接种到1培养基上,吒适甌调理繁殖大于死亡 迅速増长・呈 等出数列増长繁殖二死亡- 活菌数量星 雾.接近K值繁殖率小于 死亡率」活 菌数量急剧a. 测数目b. 测軍旱8!犬量合成 酶和ATP生理特征稽定, 选育菌种时期代谢产物积 累，产生找 级代谢产物畸執自濬 釋曲代谢产 物徽生物的生申氧气等将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测 定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。

它反映 了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律依据其生长速率的不 同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期这4个时期的长短因菌种的遗 传性、接种量和培养条件的不同而有所不同因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长 规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用本实验用比浊法测定， 由于细菌悬液的浓度与光密度（0D值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推 知菌液的浓度，并将所测的0D值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲 线，此法快捷、简单实验器材⑴活材料：枯草芽孢杆菌（E.coli）2） 培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨液体培养基10支（每支试管培养基量相同）（3） 器材：1mL无菌移液枪、恒温培养箱、冰箱、光电比色计、标签等实验方法1. LB液体培养基的配制：500ml① 称取:酵母膏 蛋白胨 氯化钠② 混合后加去离子水（或注射用水）水400ml，待加热充分溶解后加去离子水定容至500ml③ 将其分装至三个锥形瓶内，在分装至小试管内，高压灭菌2. 接种：取10支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管，贴上标签（注明菌名、培养处理、培养时间、 组号）。

按无菌操作法用吸管向每管准确加入0.2mL的枯草芽孢杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡， 使菌体混匀3. 培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37°C下振荡培养其中9支培养管分别于培养的0、 2、4、6、8、16、18、20和24h后取出，放冰箱中贮存，待测定接种时间安排:管号生长时间（h）生长时间段冷藏时间10—14:002218:00-20:0014:00 20:003418:00—22:0014:00 22:004614:00—20:0020:005814:00—22:0022:0061622:00—次日 14： 0014:00 次日 14:0071820:00—次日 14:0014:00 次日 14:0082018:00—次日 14:0014:00 次日 14:0092414:00—次日 14:00次日14:0010重复试管5 （8h）14:00—22:0022:004•比浊：将培养不同时间、形成不同细胞浓度的细菌培养液，以蒸馏水作空白对照，选用540 —560nm波长进行光电比浊测定从最稀浓度的菌悬液开始依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未 接种的肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其光密度值在0.1—0.65以内，记录0D值。

实验结果及数据处理管号123456789100D值0.1020.培养时间02468161820248。